INMUNOHEMATOLOGÍA
Salvador Camacho Garrido
REACCIONES Ag-Ac
Tanto la respuesta humoral como la celular
suponen el reconocimiento de determinadas
estructuras químicas...
CONTACTO
Cuando se ponen en contacto un
antígeno con el anticuerpo específico,
reaccionan uniéndose mediante un
enlace no ...
ANTÍGENOS

Toda sustancia que, introducida en un organismo que no
la poseía, provoca en él la formación de un anticuerpo
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Antígenos eritrocitarios
ANTÍGENOS ABH
GEN
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ENZIMA

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Fenotipo Bombay

Productos codificados por los genes ABO y H
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1,2 Fucosiltransferasa

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FENOTIPO
FRECUENCIA

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(tipo II)
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ANTICUERPOS (SUERO) ANTI-B

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GRUPO O POR MUTACIÓN
Se han aislado los ADN de las enzimas responsables de
la biosíntesis de los antígenos sanguíneos.
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Productos codificados por los genes ABO y H
LEWIS
Los grupos sanguíneos Lewis a, b, c, d y x, y
derivan respectivamente de las cadenas 1 y 2, por
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SISTEMA ABO
Y LEWIS

Le(b)

Le(a)

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SISTEMA ABO
Y LEWIS

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antígeno B

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enzima X

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75% Excretan antígenos A, B y H en leche, saliva, jugo
gástrico, esperma, etc.. Se les dice Secretores
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ANTICUERPOS
Los anticuerpos son glucoproteínas secretadas
por las células plasmáticas, que reciben
colectivamente el nombr...
ESTRUCTURA
Las inmunoglobulinas son moléculas que tienen forma
de “Y” constituida por cuatro cadenas polipeptídicas
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Alotipos de las inmunoglobulinas (Grupos GM)
ANTICUERPOS
TIPOS

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SUERO

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LOCALIZACIÓN

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Pueden atravesar la placenta y pasar al
embrión. Facilita ...
Reacciones antígeno-anticuerpo
Tanto la respuesta humoral como la celular suponen el
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Reacciones más importantes
Precipitación
Aglutinación
Neutralización
Opsonización
Precipitación
Al unirse antígenos y anticuerpos solubles forman
agregados insolubles que precipitan, lo que inactiva a
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Aglutinación
El anticuerpo se une a antígenos situados en la superficie de
una célula. Como los anticuerpos tienen dos pun...
Neutralización
La unión del anticuerpo bloquea la acción de los
antígenos contra la célula. Así, los antígenos no se
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Opsonización
Producida por unos anticuerpos especiales (opsoninas),
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DETERMINACIONES
TRANSFUSIONALES
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GRUPO SANGUÍNEO AB0
La sangre a menudo se clasifica de acuerdo con
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Donantes: 6 346

Grupo
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DETERMINACIÓN DIRECTA
La sangre se extrae de una vena
El sitio de punción se limpia con un antiséptico
Se coloca una banda...
Valores normales
Si los glóbulos sanguíneos se pegan o aglutinan
al mezclarse con:
· Suero anti-A, la persona posee sangre...
DETERMINACIÓN INVERSA
· Si la sangre se aglutina cuando se agregan
células B a la muestra, la persona tiene sangre
tipo A....
Tipificación del Rh
· Si los glóbulos sanguíneos se pegan o
aglutinan al mezclarlos con suero antiRh (anti-D), el tipo de ...
IMPORTANCIA
Si una persona es Rh(+), puede recibir sangre
Rh(+) o Rh(-), pero si es Rh(-), únicamente
puede recibir sangre...
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CONSIDERACIONES
Muchos antígenos menores no se detectan
rutinariamente durante la determinación del
grupo sanguíneo
Si no ...
Hemólisis
La hemólisis (eritrocateresis) es el fenómeno de
la desintegración de los eritrocitos (glóbulos
rojos o hematíes...
Hemoaglutinación directa
Mientras que el entrecruzamiento de los antígenos
proteicos multivalentes con el anticuerpo produ...
Test directo de aglutinación
Eritrocitos aglutinados
Test indirecto de Coombs

Anticuerpos

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2 GOTAS HR
5 % EN SS

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2 GOTAS SR

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INCOMPATIBLE

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PRUEBA CRUZADA
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Inmunohematología

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Para una perfecta compatibilidad en transfusiones sanguíneas no basta la compatibilidad ABO y Rh. Existen otros antígenos y anticuerpos implicados y son necesarias un número mayor de pruebas, para evitar la aglutinación y la hemolisis asociadas al mezcla sangres incompatibles.

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Inmunohematología

  1. 1. INMUNOHEMATOLOGÍA Salvador Camacho Garrido
  2. 2. REACCIONES Ag-Ac Tanto la respuesta humoral como la celular suponen el reconocimiento de determinadas estructuras químicas en la superficie de macromoléculas extrañas, los antígenos Las zonas del antígeno que se unen específicamente con el anticuerpo o con el receptor de un linfocito, se denominan determinantes antigénicos Cada antígeno puede presentar varios determinantes antigénicos diferentes que estimulan la producción de anticuerpos y la repuesta de los linfocitos T Estas estructuras químicas, los determinantes antigénicos, son los responsables de la especificidad de la respuesta inmunitaria
  3. 3. CONTACTO Cuando se ponen en contacto un antígeno con el anticuerpo específico, reaccionan uniéndose mediante un enlace no covalente y se desencadenan una serie de procesos capaces de neutralizarlo y eliminarlo La combinación del anticuerpo con el antígeno desencadena una serie de procesos capaces de neutralizar y eliminar a una sustancia extraña
  4. 4. ANTÍGENOS Toda sustancia que, introducida en un organismo que no la poseía, provoca en él la formación de un anticuerpo específico con el cual puede combinarse de forma electiva Pueden ser cuerpos figurados vivos o muertos (células de los tejidos, elementos de una célula, microbios) o sus productos de elaboración (secreciones celulares, toxinas), o compuestos orgánicos (albúminas, nucleínas) Antígeno eritrocitario. Antígeno presente en los glóbulos rojos y también en los leucocitos (ver leucocito) y en diferentes tejidos del organismo Existen más de 130 antígenos eritrocitarios pero en la práctica sólo dos son importantes: el antígeno eritrocitario A y el antígeno eritrocitario B, cuya presencia o ausencia caracteriza a los grupos sanguíneos y regula las incompatibilidades sanguínea e hística y el denominado factor Rh
  5. 5. Antígenos eritrocitarios
  6. 6. ANTÍGENOS ABH GEN A B H ENZIMA AZÚCAR 1,3N-acetilgalactosaminiltransferasa N-acetilgalactosamina 1,3 Galactosiltransferasa Galactosa 1,2 Fucosiltransferasa Fucosa
  7. 7. Fenotipo Bombay Productos codificados por los genes ABO y H
  8. 8. 5 6 1 D-Galactosa 4 3 1 6 2 N-acetil-glucosamina enlace alfa 1-3 4 2 3 NHCOH3 D-Galactosa CADENA PRECURSORA TIPO 1 Glucosa 1
  9. 9. 5 4 6 1 D-Galactosa 3 6 5 2 N-acetil-glucosamina enlace 1-4 4 2 3 NHCOH3 D-Galactosa CADENA PRECURSORA TIPO 2 Glucosa 1
  10. 10. Fuc 1,2 Fucosiltransferasa 6 Gal SUSTANCIA H TIPO 1 enlace alfa 1-3 1 11 6 NAcGlc 4 1 2 3 NHCOH3 Gal Glu
  11. 11. 1,3 N-acetilgalactosaminiltransferasa NAcGal Fuc 6 Gal ANTÍGENO A (H 1) enlace alfa 1-3 1 11 6 NAcGlc 4 1 2 3 NHCOH3 Gal Glu
  12. 12. Gal l 1,3 Galactosiltransferasa ANTÍGENO B (H 1) Fuc 6 Gal enlace alfa 1-3 1 11 6 NAcGlc 4 1 2 3 NHCOH3 Gal Glu
  13. 13. 1,2 Fucosiltransferasa Fuc 5 6 Gal 4 3 enlace alfa 1-4 SUSTANCIA H TIPO 2 1 6 5 2 NAcGlc 4 1 2 3 NHCOH3 Gal Glu
  14. 14. 1,3 N-acetilgalactosaminiltransferasa NAcGal Fuc 5 6 Gal 4 3 enlace alfa 1-4 ANTÍGENO A (H 2) 1 6 5 2 NAcGlc 4 1 2 3 NHCOH3 Gal Glu
  15. 15. Gal l Fuc 5 1,3 Galactosiltransferasa 6 Gal 4 3 enlace alfa 1-4 ANTÍGENO B (H 2) 1 6 5 2 NAcGlc 4 1 2 3 NHCOH3 Gal Glu
  16. 16. FENOTIPO FRECUENCIA A1 80% SUST PRECURSORA H1 (tipo II) H2 H3 H4 SITIOS ANTIGÉNICOS 850,000 ANTICUERPOS (SUERO) ANTI-B A2 20% H1 H2 240,000 ANTI-B ANTI-A1(3 %)
  17. 17. GRUPO O POR MUTACIÓN Se han aislado los ADN de las enzimas responsables de la biosíntesis de los antígenos sanguíneos. Dos aminoácidos (leucina 266 y glicina 268) hacen a la enzima A capaz de reconocer la N-acetilgalactosamina. Dos aminoácidos (metionina 266 y alanina 268) hacen a la enzima capaz de reconocer la galactosa. Los ADN de las células O por mutaciones carecen de la síntesis de una enzima. Los grupos O pudieron tener esa pérdida por mutación de los grupos A y/o B.
  18. 18. Productos codificados por los genes ABO y H
  19. 19. LEWIS Los grupos sanguíneos Lewis a, b, c, d y x, y derivan respectivamente de las cadenas 1 y 2, por adición de una fucosa, o de un ácido siálico en los derivados sialilados Su presencia depende de la naturaleza de la cadena oligosacárida básica, de las enzimas presentes en una célula dada y de otros parámetros genéticos del sujeto La cadena tipo 1 está presente en mayor parte en los epitelios secretores La cadena tipo 2 está presente en los glóbulos rojos y en otras células sanguíneas y epiteliales
  20. 20. SISTEMA ABO Y LEWIS Le(b) Le(a) enzima HE antígeno B enzima Le Gen Se enzima B tipo 1 enzima H1 Le(c) antígeno H Le(d) antígeno A enzima Le SLe(a)
  21. 21. SISTEMA ABO Y LEWIS Le(y) antígeno B antígeno A enzima X enzima X enzima Hll enzima B enzima A tipo 2 antígeno A2 enzima A1 enzima ST enzima X SLe(x) antígeno A1
  22. 22. GENES SE Y se 75% Excretan antígenos A, B y H en leche, saliva, jugo gástrico, esperma, etc.. Se les dice Secretores La secreción está relacionada con la presencia de un Se, en secretores y se, en los no secretores El gen Se dirige la producción de una fucosiltransferasa específica de la cadena tipo 1. Mientras que otro gen H proporciona la enzima específica de la cadena de tipo 2 El estado de secreción y no secreción influye en la distribución de los grupos Lewis Por ejemplo, los antígenos Le(a) o Le(c) están en los no secretores (25 al 30%). Los antígenos Le(b) o Le(d) están en los secretores (70 al 75%)
  23. 23. ANTICUERPOS Los anticuerpos son glucoproteínas secretadas por las células plasmáticas, que reciben colectivamente el nombre de inmunoglobulinas (abreviadamente Ig) La especificidad de estas proteínas ante los diferentes antígenos es semejante a la de la enzima con respecto a su sustrato Los anticuerpos circulan por la sangre y penetran en los fluidos corporales donde se unen específicamente al antígeno que provocó su formación
  24. 24. ESTRUCTURA Las inmunoglobulinas son moléculas que tienen forma de “Y” constituida por cuatro cadenas polipeptídicas iguales dos a dos. Dos cadenas pesadas o cadenas H (del inglés heavy) y dos cadenas ligeras o cadenas L (light) de menor peso molecular. Las uniones entre las cadenas se hacen mediante puentes disulfuros (-S-S-) Las zonas amino terminales de las cadenas H y L constituyen las regiones variables cuya secuencia de aminoácidos es específica de cada anticuerpo (por ellas se unen a los antígenos) La porción carboxilo terminales corresponden a las regiones constantes, que varían muy poco dentro de cada tipo de inmunoglobulina
  25. 25. Alotipos de las inmunoglobulinas (Grupos GM)
  26. 26. ANTICUERPOS TIPOS % EN SUERO FUNCIÓN LOCALIZACIÓN Ig G 80 Pueden atravesar la placenta y pasar al embrión. Facilita la fagocitosis. Sangre y leche materna 5 - 10 Son los primeros que se producen ante la presencia de antígenos. Facilita la fagocitosis y la lisis celular. Suero y membrana de los linfocitos B 10 - 15 Protege las cavidades externas del cuerpo. Saliva, lágrimas, mucus respiratorio, leche, etc. Su función es poco conocida. Se cree que estimula a los linfocitos B a producir anticuerpo. Membranas de los linfocitos B Interviene en las infecciones parasitarias y en fenómenos alérgicos. Piel Ig M Ig A Ig D Ig E < 1
  27. 27. Reacciones antígeno-anticuerpo Tanto la respuesta humoral como la celular suponen el reconocimiento de determinadas estructuras químicas en la superficie de macromoléculas extrañas, los antígenos. Las zonas del antígeno que se unen específicamente con el anticuerpo o con el receptor de un linfocito, se denominan determinantes antigénicos Cada antígeno puede presentar varios determinantes antigénicos diferentes que estimulan la producción de anticuerpos y la repuesta de los linfocitos T. Estas estructuras químicas, los determinantes antigénicos, son los responsables de la especificidad de la respuesta inmunitaria Cuando se ponen en contacto un antígeno con el anticuerpo específico, reaccionan uniéndose mediante un enlace no covalente y se desencadenan una serie de procesos capaces de neutralizarlo y eliminarlo La combinación del anticuerpo con el antígeno desencadena una serie de procesos capaces de neutralizar y eliminar a una sustancia extraña
  28. 28. Reacciones más importantes Precipitación Aglutinación Neutralización Opsonización
  29. 29. Precipitación Al unirse antígenos y anticuerpos solubles forman agregados insolubles que precipitan, lo que inactiva a los antígenos.
  30. 30. Aglutinación El anticuerpo se une a antígenos situados en la superficie de una célula. Como los anticuerpos tienen dos puntos de unión, los microorganismos forman agregados y ya no pueden infectar otras las células La hemoaglutinación se produce entre los anticuerpos del plasma sanguíneo y los antígenos de los glóbulos rojos de la sangre de diferente grupo sanguíneo. Esta prueba es fundamental en la determinación de los grupos sanguíneos ABO
  31. 31. Neutralización La unión del anticuerpo bloquea la acción de los antígenos contra la célula. Así, los antígenos no se pueden unir a las células y matarlas
  32. 32. Opsonización Producida por unos anticuerpos especiales (opsoninas), que se fijan sobre la superficie del antígeno facilitando la acción de células fagocitarías y células asesinas naturales (NK)
  33. 33. DETERMINACIONES TRANSFUSIONALES Los médicos necesitan conocer el tipo de sangre de una persona cuando se van a someter a una transfusión de sangre o a un trasplante, debido a que no todos los tipos de sangre son compatibles entre sí. Por ejemplo: · Si una persona tiene sangre tipo A, únicamente puede recibir sangre tipo A y tipo O. · Si una persona tiene sangre tipo B, únicamente puede recibir sangre tipo B y tipo O. · Si una persona tiene sangre tipo AB, únicamente puede recibir sangre tipo A, B, AB y O. · Si una persona tiene sangre tipo O, únicamente puede recibir sangre tipo O. La sangre tipo O se le puede dar a alguien con cualquier tipo de sangre, razón por la cual este tipo de personas son llamadas donantes universales.
  34. 34. GRUPO SANGUÍNEO AB0 La sangre a menudo se clasifica de acuerdo con el sistema ABO Este método separa los tipos de sangre en cuatro categorías: · Tipo A · Tipo B · Tipo AB · Tipo O El tipo de sangre (o grupo sanguíneo) de una persona también depende de lo que ha heredado de sus padres.
  35. 35. Donantes: 6 346 Grupo sanguíneo % 3 096 O 48,79 2 231 A 35,15 774 B 12,20 227 AB 3,58 14 A2B 0,22 2 A2BHw 0,03 1 Ael 0,01 1 Aint 0,01
  36. 36. DETERMINACIÓN DIRECTA La sangre se extrae de una vena El sitio de punción se limpia con un antiséptico Se coloca una banda elástica Se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre Se retira la banda para restablecer la circulación La sangre se puede recoger en una pipeta (tubo pequeño de vidrio), en una lámina portaobjetos, en una tirilla de examen o en un recipiente pequeño La sangre de la persona se mezcla con anticuerpos contra sangre tipo A y tipo B, y la muestra se revisa para ver si los glóbulos sanguíneos se pegan o aglutinan. Si dichos glóbulos se aglutinan, eso significa que la sangre reaccionó con uno de los anticuerpos
  37. 37. Valores normales Si los glóbulos sanguíneos se pegan o aglutinan al mezclarse con: · Suero anti-A, la persona posee sangre tipo A. · Suero anti-B, la persona posee sangre tipo B. · Sueros anti-A y anti-B, entonces la persona posee sangre tipo AB. Si los glóbulos sanguíneos no se pegan o aglutinan cuando se agrega suero anti-A y antiB, la persona tiene sangre tipo O.
  38. 38. DETERMINACIÓN INVERSA · Si la sangre se aglutina cuando se agregan células B a la muestra, la persona tiene sangre tipo A. · Si la sangre se aglutina cuando se agregan células A a la muestra, la persona tiene sangre tipo B. · Si la sangre se aglutina cuando se agregan ambos tipos de células a la muestra, la persona tiene sangre tipo O. La falta de aglutinación de los glóbulos sanguíneos cuando la muestra se mezcla con ambos tipos de sangre indica que la sangre es tipo AB.
  39. 39. Tipificación del Rh · Si los glóbulos sanguíneos se pegan o aglutinan al mezclarlos con suero antiRh (anti-D), el tipo de sangre es Rh positivo · Si la sangre no se coagula al mezclarse con suero anti-Rh, el tipo de sangre es Rh negativo
  40. 40. IMPORTANCIA Si una persona es Rh(+), puede recibir sangre Rh(+) o Rh(-), pero si es Rh(-), únicamente puede recibir sangre Rh(-) La determinación del grupo sanguíneo es especialmente importante durante el embarazo. Si la madre posee sangre Rh negativa, entonces el padre también debe ser evaluado Si el padre tiene sangre Rh positiva, entonces la madre necesita recibir un tratamiento para ayudar a prevenir el desarrollo de sustancias que le pueden hacer daño al feto
  41. 41. D R AB+ ABA+ AB+ BO+ O- O- O+ B- B+ A- A+ AB- AB+ X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X
  42. 42. CONSIDERACIONES Muchos antígenos menores no se detectan rutinariamente durante la determinación del grupo sanguíneo Si no se detectan, la persona puede experimentar una reacción al recibir ciertos tipos de sangre Un proceso llamado pruebas cruzadas, seguido de una prueba de Coombs, puede ayudar a detectar estos antígenos menores Además se puede estudiar el factor DU o Rh(+) débil.
  43. 43. Hemólisis La hemólisis (eritrocateresis) es el fenómeno de la desintegración de los eritrocitos (glóbulos rojos o hematíes) En determinadas situaciones patológicas hay un aumento de la destrucción de los eritrocitos intra o extravascular, como consecuencia de: unión antígeno-anticuerpo (reacción transfusional,), de lesiones mecánicas (como en el fallo de las prótesis valvular cardiaca) trastornos osmóticos trastornos enzimáticos trastornos tóxicos alteraciones congénitas de los eritrocitos (en anomalías de la hemoglobina o en infecciones)
  44. 44. Hemoaglutinación directa Mientras que el entrecruzamiento de los antígenos proteicos multivalentes con el anticuerpo produce una precipitación, la interrelación entre células o partículas de gran tamaño con los anticuerpos dirigidos contra los antígenos de superficie conducen a una aglutinación Dado que la mayoría de las células poseen cargas eléctricas, se requiere una cantidad razonable de anticuerpos entre dos células antes de que se supere la repulsión mutua con un reactivo antiglobulina La presencia de antígenos en la superficie de los glóbulos rojos se puede detectar por la hemoaglutinación producida cuando se añade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antígenos
  45. 45. Test directo de aglutinación
  46. 46. Eritrocitos aglutinados
  47. 47. Test indirecto de Coombs Anticuerpos Eritrocitos Antiglobulina
  48. 48. Test de Commbs 2 GOTAS HR 5 % EN SS 2 GOTAS HR 5 % EN SS 2-3 GOTAS SR ALBÚMINA 2 GOTAS 2 GOTAS anti D ALBÚMINA 2 GOTAS 37 ºC 15 minutos Hemantígenos I, II y III 1 GOTA Determinación de Du centrifugar resuspender INCOMPATIBLE centrifugar resuspender INCOMPATIBLE lavado Tamb. 30 minutos 37 ºC 15 minutos Determinación de anticuerpos irregulares. Test de Coombs Indirecto centrifugar resuspender INCOMPATIBLE lavado 2 GOTAS anti IgG-C3d COMPATIBLE 1 GOTA Control Coombs centrifugar resuspender INCOMPATIBLE centrifugar resuspender COMPATIBLE inconcluyente
  49. 49. 2 GOTAS SR 1 GOTA HD centrifugar resuspender INCOMPATIBLE salino inmediato 2 GOTAS albúmina PRUEBA CRUZADA MAYOR EN TUBO centrifugar resuspender albúmina inmediata 37 ºC albúmina incubada INCOMPATIBLE 30 minutos centrifugar resuspender INCOMPATIBLE lavado 2 GOTAS anti IgG-C3d COMPATIBLE 1 GOTA Control Coombs centrifugar resuspender INCOMPATIBLE centrifugar resuspender COMPATIBLE inconcluyente

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