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Aula3 Replicacao

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  • Excelente trabalho!
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  • Coordiais saudaçoes a toda equipe do slideshare, aproveitando expor os imensos agradecimentos pelo enorme contributo de incrementar o conhecimento aos utentes, em particular (nos estudantes), docentes e demais.
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Aula3 Replicacao

  1. 1. Replicação do DNA O mecanismo de replicação está baseado no pareamento das bases da dupla hélice do DNA. A estrutura do DNA contém a informação necessária para perpetuar sua sequência de bases
  2. 2. A replicação do DNA é semi-conservativa Experimento realizado por Meselson & Stahl em 1958 Cultivo em meio 14 NH 4 Cl Cultivo em meio 15 NH 4 Cl Purificação do DNA seguida de centrifugação em gradiente de CsCl
  3. 3. A replicação é bidirecional
  4. 4. A replicação do cromossomo circular
  5. 5. O genoma bacteriano circular constitue um único replicon <ul><li>A velocidade da forquillha de replicação bacteriana é 50000pb/min </li></ul><ul><li>Um única origem de replicação em E.coli (OriC, 245 pb) </li></ul>
  6. 6. Origem de Replicação em bactérias: Somente origens completamente metiladas podem iniciar a replicação
  7. 7. O genoma eucariótico constitue vários replicons <ul><li>A velocidade da forquillha de replicação eucariótica é 2000pb/min </li></ul><ul><li>Os replicons eucarióticos tem 40-100 kb e são iniciados em tempos diferentes </li></ul><ul><li>Fase S demora ~ 6hrs em uma célula somática </li></ul>
  8. 8. Fita contínua (líder) Fita descontínua
  9. 9. Polimerases de DNA: As enzimas que sintetizam DNA <ul><li>A síntese de DNA ocorre pela adição de nucleotídeos a extremidade 3´OH da cadeia em crescimento. O precursor da síntese é o desoxiribonucleosídeo 5´trifosfato </li></ul><ul><li>Sentido da síntese sempre é 5’  3’ </li></ul><ul><li>A replicação é um processo extremamente fiel. As DNA-polimerases tem atividade revisora </li></ul>
  10. 10. Pareamento de bases correto incorreto
  11. 11. Atividade revisora 3’  5’ garante a fidelidade da replicação
  12. 12. Modelo da estrutura das DNA-polimerases
  13. 14. Proteínas presentes na origem de Replicação de E.coli DnaA Reconhece a origem e abre a dupla fita em sítios específicos DnaB (helicase) Desenrola o DNA DnaC Auxilia a ligação de DnaB na origem HU Proteína do tipo histona que estimula a iniciação Primase (DnaG) Sintetiza os primers de RNA Single strand binding (SSB) Liga a fita simples de DNA RNA polimerase Facilita a ação da DnaA DNA girase Alivia a tensão torsional gerada pela abertura da dupla-fita Dam Metilase Metila as sequências GATC na OriC
  14. 15. A síntese do DNA é semi-descontínua e requer um iniciador (primer) de RNA Fita contínua Fita descontínua Síntese da Fita descontínua Síntese da Fita Contínua
  15. 16. <ul><li>Fragmentos de Okasaki ocorrem na fita descontínua </li></ul><ul><li>A DNA polimerase III é responsável pela síntese da maior parte do DNA </li></ul><ul><li>A DNA polimerase I remove o primer de RNA e preenche as lacunas </li></ul><ul><li>A DNA ligase sela as quebras </li></ul>
  16. 17. A DNA ligase sela as quebras
  17. 18. Proteínas presentes na forquilha de Replicação de E.coli SSB Liga a fita simples de DNA DnaB (helicase) Desenrola o DNA Primase (DnaG) Sintetiza os primers de RNA DNA Polimerase III Sintese da fita nova DNA Polimerase I Preenche as lacunas e excisa os primers DNA Ligase Liga os fragmentos DNA girase Superenrolamento
  18. 19. Síntese das fitas contínua e descontínua é independente
  19. 20. O complexo de replicação
  20. 22. Duplicação dos cromossomos Separação dos cromossomos e divisão celular

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