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MentaTilaAlgunos alimentosos con propiedades antibióticas:         Propóleo         Setas medicinales         Miel   (Safo...
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PenicilinaEn 1928 Alexander Fleming noto que lacontaminación al de un placa de cultivobacteriano con el hongo Penicilliumn...
El antibiogramaEl primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepabacteriana que se sospecha es...
La determinación de la Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la base de lamedida de la sensibìlidad de una bacteria a u...
Interpretación de un AntibiogramaCiertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in vitro, cuando seinscriben en ...
Las sustancias a utilizar serán: Carragenina 50g. Gel antibacterial y alcohol. Caldo de pollo 300mL. Miel natural. Penicil...
Sustancia obtenida, después del paso 2.3    Ya disuelta la cantidad de carragenina medida en el caldo y que estos sevean u...
5    Una vez ya estando esterilizado el caldo, tendremos que entrar a la  campana de flujo laminal en donde desinfectaremo...
Preparación de antibiótico natural (miel)9    Con una perforadora se agujerara el papel filtro, creando círculos quenos ay...
Caja petri con señalización de los antibióticos 12   Una vez puestos los circulitos remojados, con el asa de siembra (cale...
Simbología y porcentaje de contaminación en los círculos.         A. Contaminación masiva. (80% al 100%).         B. Conta...
Muestra Numero 3      En este antibiograma se puede observar el crecimiento masivo de   microorganismos en el lote con ant...
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Cultivo de microorganismos.

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Cultivo de microorganismos.

  1. 1. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO ESCUELA NACIONAL PREPARATORIA NÚMERO 2 “ERASMO CASTELLANOS QUINTO” TEMAS SELECTOS DE BIOLOGÍA GRUPO 600C PRACTICA DE LABORATORIO 2 CULTIVO DE MICROORGANISMOS INTEGRANTES DEL EQUIPO: AYALA BUTANDA CITLALLI ROXANA. MERÁZ ACEVEDO ADRIÁN SEBASTIÁN. RIVAS MEZQUITA LUISA ANDREA. SÁNCHEZ GARCÍA KARLA EDITH. URIBE MEJÍA MÓNICA PAMELA.
  2. 2. Planteamiento del problema¿Qué efecto tienen los antibióticos, tanto los antibióticos naturales como losartificiales frente a los microorganismos que encontramos en todos lados?IntroducciónEn el siguiente trabajo se da una breve explicación de la historia y de los tiposde medios de cultivo existentes que son de gran importancia para mantener,separar, y poder seleccionar a los microorganismos para poder estudiarlosdetalladamente.También se dará una explicación acerca de los antibióticos sintéticos ynaturales y de forma más específica de la miel que es un antibiótico natural yde la penicilina que es un antibiótico sintético. Ya que en la práctica que sellevará acabo se pondrán a prueba estos dos antibióticos sobre el medio decultivo en este caso el caldo de pollo para identificar cual es su efecto en losmicroorganismos que se encuentran en él.También a través del microscopio podremos observar éstos microorganismosY conocer un poco más sobre su estructura.Finalmente viene implícito lo que es un antibiograma que es una pruebamicrobiológica que se realiza para conocer la sensibilidad de una coloniabacteriana ante el efecto de un antibiótico.Medios de cultivoGran parte de la microbiología depende de la capacidad de cultivar y mantenermicroorganismos en un laboratorio, y esto sólo es posible si se dispone demedios de cultivos adecuados. Además los medios especiales sonimprescindibles para aislar e identificar los microorganismos, evaluar lasensibilidad de antibióticos, analizar agua y alimentos… Un medio se utilizafrecuentemente para seleccionar y cultivar microorganismos específicos o parafacilitar la identificación de una especie en particular. En estos casos, la funciónde un medio estará también determinada por su composición. MEDIOSSINTÉTICOS O DEFINIDOS.- Algunos microorganismos, particularmente losautótrofos, pueden crecer en medios relativamente sencillos, que contienenCO2 como fuente de carbono, nitratos o amonio como fuente de nitrógeno,
  3. 3. sulfatos, fosfatos, y diversos minerales . Esta clase de medios en que seconocen todos los componentes se denomina medios definidos o mediossintéticos. No todos los medios definidos son tan sencillos, sino que puedenelaborarse a partir de docenas de componentes. Los medios definidos seemplean ampliamente en investigación. MEDIOS COMPLEJOS Losa mediosque contienen algunos ingredientes se desconocen se denominan medioscomplejos. Estos se necesitan porque a menudos se desconocen losrequerimientos nutricionales de un microorganismo en particular. Los medioscomplejos contienen componentes como peptonas, extracto de carne y delevadura. Se necesita un medio sólido para cultivar microorganismos ensuperficie, se puede solidificar un medio líquido añadiendo agar o cartageninaque son agentes solidificantes por que una vez que se funde en agua fríahirviendo, puede enfriarse hasta una temperatura de 40 a 42°C sinendurecerse, no fundirá de nuevo hasta que alcance una temperatura de 80 a90°C. Otros tipos de agentes solidificantes son el gel de sílice utilizado paracultivar bacterias autótrofas en medios sólidos en ausencia de sustanciasorgánicas. (Harley, J.P, et al, 1999)Tipos de mediosMedios para fines generales.- Porque mantienen el crecimiento de muchosmicroorganismos. Ej. Caldo y agar. (Harley, J.P, et al, 1999)Medios enriquecidos.- La sangre y otros nutrientes especiales se puedenincorporar a los medios para fines generales para favorecer el crecimiento deheterótrofos existentes. Ej. Agar mas sangre (Harley, J.P, et al, 1999)Medios selectivos.- Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares.Las sales biliares o colorantes favorecen el crecimiento de bacteriasgamnegativas, al inhibir el crecimiento de las grampositivas sin afectar a lasprimeras. Las pasibilidades de selección son infinitas y existen docenas demedios selectivos especiales disponibles. (Safont, N, 2004)Medios diferenciales.- Son medios que diferencian entre grupos distintos debacterias e incluso permiten una identificación tentativa de losmicroorganismos, según sus características biológicas. Ej. El agar sangre y elagar MacConkey. (Harley, J.P, et al, 1999)
  4. 4. Aislamiento de cultivos puros.En los hábitats naturales, los microorganismos crecen en poblaciones mixtas ocomplejas que contienen varias especies. Esto representa un problema para elmicrobiólogo porque no se puede estudiar adecuadamente un único tipo demicroorganismo en un medio mixto. Se ne4csita un cultivo puro, población decélulas que procede de una única célula, para caracterizar una especieindividual. Los cultivos puros son tan importantes que el desarrollo de lastécnicas de cultivos puros por el bacteriólogo alemán Robert Koch trasformóla microbiología. Existen varias formas de preparar cultivos puros. Las máscomunes son:SIEMBRA EN PLACAS POR EXTENSIÓN: Si se extiende una mezcla decélulas en una superficie de agar, de manera de que cada célula cree formandouna colonia independiente cada colonia representa un cultivo puro. La siembrapor extensión es una forma directa y fácil de conseguir este resultado. Se pasaun volumen pequeño de una célula microbiana di8luida conteniendo entre 100y 200 células, o menos, al centro de una placa de agar y se extiendeuniformemente sobre la superficie con una varilla doblada de vidrio estéril. Lascélulas dispersas desarrollan colonias aisladas. Este tipo de siembra puedeusarse para contar una población microbiana.Las colonias puras se pueden obtener también mediante siembra de estrías.Se pasa la mezcla microbiana a un extremo de la placa de agar con un asa deinoculación o un hisopo y se extiende formando estrías sobre la superficiesiguiendo uno de los posibles patrones recomendados. En algunos puntos deeste proceso algunas células individuales se desprenden del asa al frotarlasobre la superficie y desarrollan colonias separadas. En ambas técnicas unbuen aislamiento depende de la separación adecuada de las célulasindividuales. (Harley, J.P, et al, 1999)SIEMBRA EN PROFUNDIDAD: Se emplea ampliamente con bacterias yhongos puede generar también colonias aisladas. La muestra original se diluyevarias veces para reducir la población microbiana la suficiente con el fin deobtener colonias separadas cuando se siembren. La mayoría de las bacterias yhongos no se destruye con la exposición breve al agar calentado. Después deendurecerse el agar cada célula se fija a un lugar y forma una colonia
  5. 5. individual. Las colonias que crecen sobre la superficie se pueden utilizartambién para inocular un medio fresco y preparar cultivos puros.Las técnicas anteriores precisan de placas especiales de cultivo denominadasplacas de Petri. Las placas de Petri son muy fáciles de usar pueden aplicarsepara ahorrar espacio y constituyen unos de los materiales más comunes de loslaboratorios de microbiología.Los métodos de siembra descritos anteriormente son incluso más eficaces paraproducir cultivos puros cuando se emplean con medios selectivos odiferenciales.Los microorganismos que crecen en superficies sólidas tienden a formarcolonias con una morfología característica. Las colonias crecen normalmentecon mayor rapidez en los extremos donde la cantidad de recursos disponibleses mayor. (Harley, J.P, et al, 1999)AntibióticosSe denomina antibiótico a cualquier antibiótico utilizado para eliminar o inhibirel crecimiento de organismos infecciosos tanto en seres humanos como enanimales.Los antibióticos son elaborados en su metabolismo propio por seres vivos:plantas, animales, bacterias, hongos. Un antibiótico puede definirse como unasustancia derivada de un organismo vivo, generalmente un microorganismo, ouna modificación química de la misma que inhibe la producción, el crecimientoe incluso destruye otros microorganismos y células anormales.En un principio el término antibiótico se utilizaba para referirse a loscompuestos orgánicos producidos por bacterias u hongos que resultabantóxicos para otros microorganismos. (Cruz, A, 2001).El mecanismo de acción de los antibióticos fue conocido científicamente hastael Siglo XX. La primera observación de lo que hoy en día se denominaríaantibiótico fue realizada en el siglo XIX por el químico francés Louis Pasteur,EL uso de los antibióticos se dio en 1928 con los trabajos de Fleming, Chain yFlorey al descubrir la penicilina. Una veintena de los antibióticos son extraídosindustrialmente, éstos son la penicilina, la tiratrasina, estreptomicina,terramicina, etc. (Cruz, A, 2001).
  6. 6. ¿Qué tipo de antibióticos existen?Los antibióticos pueden clasificarse tomando en cuenta diferentes criterios:• Según su mecanismo de acción, algunos antibióticos impiden la síntesis de lapared celular de los microorganismos, otros alteran la membrana plasmática, yla mayor parte de ellos inhiben la síntesis de ácidos nucleicos o proteínas.• Según la estructura química se diferencian las penicilinas, cefalosporinas,aminoglucósidos, tetraciclinas, sulfamidas u otros.• Según su espectro de acción, es posible dividirlos en agentes de amplioespectro, que actúan frente a multitud de bacterias, y agentes de espectrorestringido que solo actúan frente a algunos tipos de bacterias. (Cruz, A, 2001).Usos y AbusosEl uso excesivo de los antibióticos sin previa autorización médica ha traídocomo consecuencia la resistencia de los gérmenes patógenos, mejor conocidacomo resistencia bacteriana, causando efectos secundarios como anemia,alucinaciones, alteraciones gastrointestinales etc.También la utilización de antibióticos antes de que aparezca la infección paratratar prevenirla, ha agravado el problema de resistencias. (Cruz, A, 2001).Actualmente en algunos países el uso de antibióticos es cada vez menor,permitiendo la utilización de medios alternativos como lo es el naturismo.Con el desarrollo de la bioquímica en los últimos años se ha descubierto quelas frutas y las hortalizas contienen innumerables sustancias con podercurativo. Con lo que también se logra calmar el dolor e incluso ayudar alapronta recuperación del paciente. Éstos son verdaderos antibióticos naturalesque cumplen con la función nutritiva, preventiva, curativa, y depurativa en elorganismo ya que logran arrastrar la mayoría de desechos que se han quedadoatascados en el cuerpo por el uso inadecuado de antibióticos sintéticos. (Cruz,A, 2001).En increíble la cantidad de enfermedades que son tratadas específicamentecon antibióticos sintéticos como la penicilina, amoxicilina, v ancomicina, etc sinembargo también estas pueden tratarse con antibióticos naturales, algunas
  7. 7. enfermedades son el acné, artritis, colitis, faringitis, neumonía, varicela, etc.(Cruz, A, 2001).Antibióticos naturalesLa tierra produce a través de procesos naturales como el sol y la lluvia infinidadde reinos vegetales que permiten la formación de sustancias que procuraninmunidad frente a bacterias y virus nocivos.Algunas plantas desarrollan flavonoides que protegen contra la destruccióninterna de proteínas, enzimas, tallos, hojas, de ciertas plantas. Hoy en día labioquímica y la biología molecular han descubierto que l brócoli contienesulforano el cual puede ayudar a prevenir el cáncer, que el ajo y la cebollatienen órganos sulfurados que ayudan a reducir el desarrollo de tumores. Lalista de sustancias presentes en los alimentos que pueden ayudar contra lasenfermedades es larga, los betacarotenos en las hortalizas y verdurasfrondosas, de color anaranjado oscuro, los licopenos del tomate, la bromelinade la piña, naranjita y nobiletina de los cítricos, toso pueden ayudar aprevenir elcáncer. (Cruz, A, 2001).Son numerosas las plantas que poseen un intenso poder antibiótico.Crucíferas: En este grupo cabe citar la mostaza, el rábano, la cocleria .Liliáceas: A esta familia pertenecen ajos, cebollas y puerros. Todos elloscontienen ácido tiociánico-HSCN, cuya estructura química presenta complejoscompuestos azufrados con gran poder bactericida especiales, el berro.Otras plantas de reconocida acción antibiótica frente a bacterias, virus yhongos son:Árbol del té.Equinacéa.Jengibre.Orégano.Semillas de pomelo (extracto).Tomillo.
  8. 8. MentaTilaAlgunos alimentosos con propiedades antibióticas: Propóleo Setas medicinales Miel (Safont, N, 2004)La mielLa miel es un producto que ha utilizado el ser humano desde los albores de lahumanidad. De hecho, las pinturas rupestres de la Cueva de la Araña, enBicorp (Valencia), que datan de 10.000 años a.C, muestran como un hombreestá recolectando miel. Esto demuestra que ya los primeros pobladores la tierradescubrieron los beneficios de este alimento.Hipócrates, el padre de la medicina, alabó sus poderes terapéuticos y la utilizópara curar diversas afecciones de la piel, úlceras y para aliviar el dolor engeneral. Los egipcios, por su parte, la utilizaron para tratar las cataratas, llagas,cortes o quemaduras.Procede del néctar de las flores. Gracias a ello, la miel es rica en vitaminascomo la B6, tiamina, niacina, riboflavina y ácido pantoténico. Asimismo,contiene minerales esenciales como el calcio, cobre, hierro, magnesio,manganeso, fósforo, potasio, sodio y cinc.Las propiedades antibacterianas de la miel proceden principalmente de sucontenido en la enzima glucosa oxidasa. Ésta enzima produce peróxido dehidrógeno (agua oxigenada).Sus propiedades nutritivas hacen de este alimento una poderosa arma contralos resfriados, los dolores de garganta, bronquitis, sinusitis, asma y algunasafecciones de la piel. De hecho, recientes estudios demuestran que la mielpura contiene un efectivo agente antimicrobiano, muy útil para el tratamiento de
  9. 9. las quemaduras menores, las heridas superficiales y como terapia adicional delos dolores de garganta y otras afecciones bacterianas.Puede neutralizar la bacteria Helicobacter pylori causante de la mayoría deúlceras del estómago responsables de la acidez y dolor estomacal.Su elevado contenido de azúcar, que limita la cantidad de agua capaz depermitir que los microorganismos se desarrollen, su acidez, su escaso pH y supobre contenido en proteínas que privan del nitrógeno que necesitan lasbacterias para crecer, hacen de la miel una barrera contra las infecciones.(Safont, N, 2004)Un reciente estudio llevado a cabo por un grupo de investigadores deÁmsterdam, dirigido por Sebastián A.J. Zaat y publicado en la revista FASEBJournal muestra que la miel cuenta con ingredientes bactericidas naturales .Enconcreto, el estudio describe en su artículo que la miel acumula pequeñaspartes de agua oxigenada y de metilglioxal, sustancias que poseen toxicidadsobre las bacterias. Además, en su composición, se pudo identificar un nuevopéptido, llamado defensina-1, con propiedades antimicrobianas. Los péptidosantimicrobianos son pequeñas moléculas presentes en plantas y animales queactúan en mecanismos de defensa, eliminando a patógenos como bacterias,virus y parásitos, además de tener una función moduladora de la respuestainmunitaria innata o natural.El estudio demostró que la defensina-1 de la miel es capaz de matarStaphylococcus aureus resistente a meticilina, Escherichia coli resistente abeta-lactámicos, Pseudomonas aeruginosa resistente a ciprofloxacina yEnterococcus faecium resistente a vancomicina, entre otros. ( J. Zaat. S,2010)
  10. 10. PenicilinaEn 1928 Alexander Fleming noto que lacontaminación al de un placa de cultivobacteriano con el hongo Penicilliumnotatum lisaba las bacterias cercanas.Esto fue consecuencia de la presencia Penicilina. Tomada de: Voet D. 2004de penicilina, un antibiótico secretadopor un hongo. No obstante, las dificultades para aislar y caracterizar a lapenicilina, debido a su inestabilidad, hicieron que pasaran más de 15 años paraque esta se encontrara disponible para el uso clínico de rutina. (Voet D. 2004)La penicilina se une de manera específica a las enzimas que funcionan paraunirse en forma cruzada con bandas de peptidoglucano de las paredes de lacélulas bacterianas e inactiva las enzimas. Dado que la expansión de la paredcelular también requiere la acción de enzimas que degradan las paredescelulares, la exposición de bacterias en proliferación a la penicilina, enduce asu lisis: esto es, la penicilina interrumpe el equilibrio normal entre la biosíntesisy la degradación de la pared celular. Sin embargo dado que ninguna enzimahumana se une a la penicilina, tiene baja toxicidad para el hombre, lo quecontribuye una necesidad terapéutica. (Voet D. 2004)La mayoría de las bacterias resistentes a la penicilina secretan penisilinasa queinactiva a la penicilina al divar el enlace amida de su anillo betalactámico. Sinembargo la observación de que la actividad de penicilinasa varia con lanaturaleza del grupo R de la penicilina condujo a la semisíntesis de penicilinas,como la ampicilina, que son eficaces en la clínica contra cepas de bacteriasresistentes a la penicilina. (Voet D. 2004) Antibiograma. Tomada de Tortora,G. 2007.
  11. 11. El antibiogramaEl primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepabacteriana que se sospecha es la responsable de una infección a uno o variosantibióticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previospara la eficacia in vivo de un tratamiento antibiótico. El antibiograma sirve, enprimer lugar, para orientar las decisiones terapéuticas individuales.El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolución de lasresistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiológico, a escalade un servicio, un centro de atención médica, una región o un país, es comopuede adaptarse la antibioterapia empírica, revisarse regularmente losespectros clínicos de los antibióticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias,como el establecimiento de programas de prevención en los hospitales. Haypues un doble interés: Terapéutico y epidemiológico. (Tortora,G. 2007).Realización de un antibiogramaSiempre que una toma bacteriológica de finalidad dìagnóstica haya permitido elaislamiento de una bacteria considerada responsable de la infección.(Tortora,G. 2007).Establecer esta responsabilidad exige una colaboración entre el bacteriólogo yel clínico. En efecto, en ciertas circunstancias, el microbiólogo no podrádeterminar con certeza que el aislamiento de una bacteria exige unantibiograma, sin los datos clínicos que le aporta el médico. Por ejemplo, unabacteria no patógena puede ser responsable de la infección de un enfermoinmunodeprimido o en un lugar determinado del organismo. La presencia designos clínicos puede ser también determinante para la realización de unantibiograma (por ejemplo: la infección urinaria con un número reducido degérmenes). (Tortora,G. 2007).Sensibilidad bacteriana a los antibióticos
  12. 12. La determinación de la Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la base de lamedida de la sensibìlidad de una bacteria a un determinado antibiótico. La CIMse define como la menor concentración de una gama de diluciones deantibiótico que provoca una inhibición de cualquier crecimiento bacterianovisible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer unaescala de actividad del antibiótico frente a diferentes especies bacterianas.(Tortora,G. 2007).Hay diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina,y de manera semicuantitativa, las CIM (métodos manuales y métodosautomatizados o semiautomatizados). Estos diferentes métodos de rutinapermiten categorizar una cierta cepa bacteriana en función de su sensibilidadfrente al antibiótico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia(I) o Resistente (R) al antibiótìco. (Tortora,G. 2007).Para un determinado antibiótico, una cepa bacteriana es, según la NCCLS: Sensible, si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un tratamiento a la dosis habitual. (Tortora,G. 2007). Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es de esperar ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento. (Tortora,G. 2007). Intermedia, cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir efecto terapéutico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la posología). (Tortora,G. 2007).Ciertas moléculas son representativas de un grupo de antibióticos. Losresultados (S, I, R) obtenidos con estas moléculas pueden ser ampliados a losantibióticos del grupo, que en ese caso no es necesario ensayar (Ejemplo:Equivalencia entre la cefalotina que se ensaya y las restantes cefalosporinasde 1ª generación que no es necesario probar, ya que el resultado puedededucirse del obtenido en la cefalotina).Este hecho permite ensayar un númeroreducido de antibióticos, sin limitar por ello las posibilidades terapéuticas.(Tortora,G. 2007).
  13. 13. Interpretación de un AntibiogramaCiertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in vitro, cuando seinscriben en el DNA bacteriano. Su expresión en el organismo, en donde lascondiciones en cuanto a medios son diferentes, expondría al riesgo de fracasoterapéutico. Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de maneraglobal a fin de descubrir, a través de la comparación de las respuestas paracada antibiótico, un mecanismo de resistencia incluso débilmente expresado.Así, gracias a la interpretación, una cepa que aparece como falsamentesensible será categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiellapneumoniae productora de BLSE puede aparecer sensible in vitro a lascefalosporìnas de 3" generación. El resultado de Sensible debe ser corregido aIntermedio o Resistente, ya que la utilización de estos antibióticos correría elriesgo de provocar un fracaso terapéutico). (Tortora,G. 2007).Justificación:Se eligió trabajar con los antibióticos: miel (natural) y penicilina (artificial),debido a la fácil obtención de estos, ya que los podemos comprar en una tiendao en una farmacia, respectivamente. Además son fáciles de diluir en agua parapoder probarlos en los medios de cultivo, su información esta a mayor alcancede nosotros y como ya dijimos son de uso común.Hipótesis:Nosotros consideramos que tanto los antibióticos naturales, como losantibióticos sintéticos tiene un nivel de fuerza muy similar para combatir a losmicroorganismos, pero cabe destacar que los naturales ofrecen una mayorventaja al no provocar tantos efectos secundarios como a veces llegan ahacerlo los sintéticos.Objetivos: Aprender a preparar un medio de cultivo, observar con elmicroscopio diferentes microorganismos y conocer el efecto de los antibióticosnaturales y sintéticos en éstos.Metodología.Los materiales, sustancias y equipo que utilizaremos en la práctica serán lossiguientes:
  14. 14. Las sustancias a utilizar serán: Carragenina 50g. Gel antibacterial y alcohol. Caldo de pollo 300mL. Miel natural. Penicilina y Agua. Los materiales y equipos a utilizar serán: Perforadora. Papel filtro. Autoclave. Horno de medios. Asa de siembra. Cajas de petri esterilizadas en una bolsa de plástico. Algodón, gasas y masking. Parrilla eléctrica. Vaso de precipitado. Matraz Helen Meyer. Balanza. Agitador. Reloj de vidrio. Bata de laboratorio y cubre bocas. Lámpara de alcohol. Microscopio. Campana de flujo laminal.Procedimiento:Lo primero que tendremos que realizar para la práctica serán los medios decultivo en donde crecerán los microorganismos para que después partamos deahí y entonces podamos comprobar la eficacia de los antibióticos naturales yartificiales 1 Estos se harán primeramente midiendo las cantidades de caldo de pollo que tendrá que llevar metiendo esta en el matraz Helenmeyer, se calcularan 300mL con ayuda del vaso de precipitado. Ya después estando esto se llenara de agua para que quede la disolución; también se medirán 90g de carragenina en la balanza y aun no se le agregaran a la solución. Materiales utilizados en el paso 1. 2 Ya teniendo medido el caldo y la carragenina, se proseguirá a calentar este en la parrilla eléctrica y mientras comienza a hervir, se le va agregando la carragenina poco a poco y moviendo la mezcla con el agitador, para que no queden grumos.
  15. 15. Sustancia obtenida, después del paso 2.3 Ya disuelta la cantidad de carragenina medida en el caldo y que estos sevean uniformemente distribuidos, se tapara el matraz con las gasas, haciendoun tapón a la medida y luego sellando con el maskin. Matraz con el caldo y tapado con maskin y gasas.4 Esto se rotulara y se llevara a la autoclave en donde se esterilizara. Autoclave utilizada en el experimento, perteneciente al laboratorio.
  16. 16. 5 Una vez ya estando esterilizado el caldo, tendremos que entrar a la campana de flujo laminal en donde desinfectaremos nuestras cajas petri con alcohol y entonces poder empezar el vaciado del medio. Vaciado del caldo en las cajas petri dentro de la campana de flujo laminal. 6 Ya vaciado en todas las cajas estas se rotulara y juntaran sin salir de la campana. Ya terminado esto se meterán al refrigerador.Cajas petri con caldo adentro (izquierda. Sellado de cajas petri con masking (derecha) 7 Una vez terminados los medios se elegirán 4 cajas petri que serán abiertas en cuatro lugares diferentes, como el trasporte o debajo de la cama, esto con el fin de que en ella comiencen a poblar microorganismos. Para esto se abrirá la caja más o menos 30 min. Para que se poblé de microorganismos, entonces esta se vuelve a sellar y se meterá en el horno de cultivos donde se dejara unos 5 días. 8 Entonces ya pasado este tiempo, se van a disolver previamente los antibióticos, que en este caso el natural es la miel, se disolverá con agua, y penicilina también disuelta.
  17. 17. Preparación de antibiótico natural (miel)9 Con una perforadora se agujerara el papel filtro, creando círculos quenos ayudaran en la elaboración de nuestro antibiograma.10 Se sacaran los medios del horno y con ayuda del microscopiomicrométrico se observaran las colonias y se elegirá un cultivo. Caja petri con crecimiento de bacterias y hongos.11 A las cajas no contaminadas se les colocaran los circulitos resultantesde la perforación del papel filtro, remojados en los antibióticos. Por cada cajapetri se pondrán 6 circulitos siendo estos remojados con los antibióticos yagua (esto es 2 serán remojados en miel, 2 con penicilina y 2 con agua,siendo estos últimos los testigos.) señalados al reverso de la caja con plumónindeleble.
  18. 18. Caja petri con señalización de los antibióticos 12 Una vez puestos los circulitos remojados, con el asa de siembra (calentada la punta con la lámpara de alcohol) se tomará parte de una colonia del cultivo previamente seleccionado y se pasara esta por toda la caja petri, pasando por encima de los circulitos. Esto se repetirá en todas las cajas no infectadas. Elaboración de antibiograma. 13 Hecho esto se meterán de nuevo al horno, por otros 5 días para observar el efecto de los antibióticos y así comprobar la hipótesis.RESULTADOSRealizamos una tabla de los resultados obtenidos.Muestra Antibiótico Natural. Antibiótico Artificial. Testigo. (miel) (penicilina) (agua) 1 2 3 4 5 61 A A A A B B2 A A A B B A3 A A B B B A4 B A B B B A
  19. 19. Simbología y porcentaje de contaminación en los círculos. A. Contaminación masiva. (80% al 100%). B. Contaminación regular. (50% al 75%). C. Contaminación menor. (0% al 45%). Muestra Numero 1En este antibiograma se puede observar que en el antibiótico natural y artificial se dio el crecimiento microbiano en gran cantidad (masivo) y en el testigo se dio de manera mas moderada el crecimiento microbiano. Vista desde arriba Vista desde abajo Antibiograma 1 Antibiograma 1 Muestra Numero 2 En este antibiograma se puede observar el crecimiento masivo de microorganismos en los tres lotes, en el natural, artificial y el testigo. Vista desde arriba Vista desde abajo Antibiograma 2 Antibiograma 2
  20. 20. Muestra Numero 3 En este antibiograma se puede observar el crecimiento masivo de microorganismos en el lote con antibiótico natural y en el testigo, y en el antibiótico artificial se dio un crecimiento microbiano moderado. Vista desde arriba Vista desde abajo Antibiograma 3 Antibiograma 3 Muestra Numero 4 En este antibiograma podemos observar que el crecimiento masivo de microorganismos se dio en el lote de antibiótico natural y en el testigo, y en el lote con antibiótico artificial se dio un crecimiento moderado. Vista desde arriba Vista desde abajo Antibiograma 4 Antibiograma 3DiscusiónTras haber realizado la práctica y haber visto los resultados que obtuvimos, noshemos dado cuanta que tal vez hemos realizado un paso de manera erróneapuesto que la hipótesis no fue comprobada, y los resultados fueron negativos,
  21. 21. aunque logramos aislar de manera correcta nuestra bacteria. Los resultados noapoyan a la hipótesis formulada con base en las referencias e investigacionesque realizamos. Otra idea del porque del fallo de los antibióticos frente alcrecimiento microbiano, pudo ser el que dejamos mucho tiempo a las cajaspetri con el crecimiento de microorganismos. Creemos que probablemente losantibióticos funcionaron en un principio del cultivo, pero con el paso del tiempose anulo su efectividad frente a los microorganismosConclusiónComo se aprecia en los resultados, nuestra hipótesis era errónea pues sepresentaron mayor cantidad de bacterias en la parte del antibiótico natural(miel) que en el artificial (penicilina). Aunque nuestros resultados no fueron losque originalmente se esperaban, la realización de la práctica, así como laculminación de esta fue satisfactoria y nos hizo darnos cuenta de la cantidad demicroorganismos que se encuentran flotando a nuestro alrededor ya sea encasa o en el trayecto de la casa a la escuela y viceversa, entre otros lugares.BibliografíaHarley, J.P, Klein D.A y Prescott J.M (1999) Microbiología. 4° Edición. México:McGraw-Hill, pp 1-16.Cruz, A. (2001) Antibióticos Naturales. México: Selector, pp 15-29.Safont, N. (2004) La miel, antibiótico natural. Recuperado el 10 de noviembredel 2011 en<http://www.dmedicina.com/vida-sana/nutricion/la-miel-antibiotico-natural> J. Zaat. S. (2010) How honey kills bacteria. The FASEB Journal. Recuperadoel 10 de noviembre del 2011 en<http://www.fasebj.org/content/24/7/2576.abstract>Voet D., Voet J.G.(2004). Bioquímica 3ª edición: México: medicapanamericana pp 389Tortora,G. Funke,B y Case,L. (2007)Introducción a la microbiología, México:Medica Panamericana pp 229-231

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