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OBJETIVO<br />Determinar la regulación molecular de los osteoclastos durante su activación y formación atreves de la expre...
MATERIALES Y METODOS<br />Se hicieron dos tipos de estudios en ratas y ratonesquehacian parte de lascolonias de reproducci...
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 Primer y segundo molar mandibular de ratones de 3 -4 dias de nacidos.</li></li></ul><li>Se utilizòpara el estudio,  el fo...
Experimento in vitro<br />Se usaronlascèlulas del quintopasaje (muestra)deratasyratones<br />Se trataton con mezcla de pro...
DOSIS<br />Las cèlulas se trataron con 1ng/mL,10ng/mL,25ng/mL,50ng/mL , 100ng/mL de PTHrP por 30 minutos o por 24 horas.<b...
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Los experimentos se hicieron 3 vecespararatas y ratones.</li></ul>AISLAMIENTO RNA<br />	 Los cebadoresutilizadosparaanaliz...
3´fue de 1020-1001</li></li></ul><li>En Ratones el cebadorfue:<br /><ul><li> 5´fue de 428-447
 3´fue 1242-1223</li></ul>Se amplificò el cDNA por PCR , susproductos fueron expuestos a electroforesis  en un gel agar al...
INMUNOLOCALIZACION ODF<br /><ul><li>Se removieronmandibulas de ratas con 1 -10 dias de nacidas
Fueron fijadas en un buffer de formalina 10% neutral por 48Horas a 4ºC
Se  enjuagaron con10mM PBS a un pH 7,4
Se descalcificaron al 5% con acìdoformico por 7 dias
Se deshidrataron, se colocaron en parafina y se hicieron 8  microcortes</li></li></ul><li>Se deshidrataron, se colocaron e...
RESULTADOS<br />IN VIVO<br /> EL GEN OPG SE EXPRESO EN EL FOLICULO DENTAL DE LA RATA Y EL RATON.<br /> HAY CAIDA DE LA EXP...
RESULTADOS<br />IN VITRO<br />La expresion del OPG de la celula del foliculo dental en la rata se inhibio al incubarse en ...
RATON<br />lascelulas del foliculo dental tuvieronconcentración de PTHrP  1 ng/mLbajo, inhibe la expresión OPG  <br />IN V...
RESULTADOS<br />TIEMPO<br />INICIO DE INHIBICION DEL OPG FUE A LOS 30` DE INCUBACION EN PTHrP Y SE MANTUVO HASTA 1 HORA<br />
RESULTADOS<br />EN RATAS LA INCUBACION DE LAS <br />CELULAS EN CSF1 INHIBE<br /> LA EXPRESION OPG.<br />
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Osteoprotegerin and Osteoclast differentiation factor in tooth eruption

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Osteoprotegerin and Osteoclast differentiation factor in tooth eruption

  1. 1. Osteoprotegerin and osteoclastDiffetentiation factor in tooth ERUPTION<br />AUTORES: <br />G.E. Wise; S.J:Lumpkin.<br />Department of Veterinary Anatomy and Cell Biology, School of Veterinary Medicine, Lousiana State University. Journal Dentistry 79(12):1937-1942,2000<br />DRA. SONIA YESMITH PEREZ LOPEZ <br />DRA. YINNA LIZZETH RIVERA<br />
  2. 2. OBJETIVO<br />Determinar la regulación molecular de los osteoclastos durante su activación y formación atreves de la expresión del OPG y ODF durante la formación de la vía de erupción dental.<br />
  3. 3. MATERIALES Y METODOS<br />Se hicieron dos tipos de estudios en ratas y ratonesquehacian parte de lascolonias de reproduccion de la Universidad de Luisana.<br /> Se aprobaron los estudios por el comiteInstitucionalpara el cuidado animal bajo un protocolo especial paraanimales.<br />ESTUDIO IN VIVO<br />ESTUDIO IN VITRO <br />CULTIVO CELULAR<br />MODELOS ANIMALES<br />
  4. 4. <ul><li> Se removió quirúrgicamente el Primer y Segundo molar mandibular de ratas con 6 y 7 Dias de nacidas.
  5. 5. Primer y segundo molar mandibular de ratones de 3 -4 dias de nacidos.</li></li></ul><li>Se utilizòpara el estudio, el folìculo dental y el esmalte los cuales fueron sometidos a los siguientesprocesos:<br />Microsecado<br />Tripsinizaciòn (romper lasuniones de lascèlulas de soporte por medio de la enzimatripsina)<br />Se usaronlascèlulas del folìculo del quintopasaje se trataron en un suero de MEM (Medium minimoescencial) <br />
  6. 6. Experimento in vitro<br />Se usaronlascèlulas del quintopasaje (muestra)deratasyratones<br />Se trataton con mezcla de proteinarelacionada con la parathormonay CSF <br />Se hicieron estudios con dosis y tiempo de exposiciòn. <br />CSF 1<br />PTHrP<br />LAS CELULAS SE INCUBARON EN<br />10ng/mL POR 5Min, 30Min, 1 hora y 3 horas<br />LAS CELULAS SE INCUBARON EN <br />10ng/Ml de CSF1 por 5,15,30minutos, 1,3,12,24,48 <br />
  7. 7. DOSIS<br />Las cèlulas se trataron con 1ng/mL,10ng/mL,25ng/mL,50ng/mL , 100ng/mL de PTHrP por 30 minutos o por 24 horas.<br />Todos los experimentos se realizaron por lo menostresveces.<br />EXPERIMENTO IN VIVO<br /><ul><li>Se removieronfoliculosdentales de ratasreciennacidasyratonessacrificados
  8. 8. En los dias 1,3,5,7,10
  9. 9. Para vercuantaexpresiòn del OPG habia en cadamomento.</li></li></ul><li>Experimento in vivo<br /><ul><li> Se requirieron 6 folìculos por cadaedadparatenersuficientecantidad de RNA y asianalizar la expresiòn de OPG
  10. 10. Los experimentos se hicieron 3 vecespararatas y ratones.</li></ul>AISLAMIENTO RNA<br /> Los cebadoresutilizadosparaanalizar la expresiòn del OPG en ratas fueron:<br /><ul><li> 5`fue de 461-480
  11. 11. 3´fue de 1020-1001</li></li></ul><li>En Ratones el cebadorfue:<br /><ul><li> 5´fue de 428-447
  12. 12. 3´fue 1242-1223</li></ul>Se amplificò el cDNA por PCR , susproductos fueron expuestos a electroforesis en un gel agar al 1% <br />Se visualizò con tinciòn de bromuro de etileno, parapoderverlasbandas.<br />La amplificaciònfueidenticapararatasyratones a traves del sebadorActina B<br />
  13. 13. INMUNOLOCALIZACION ODF<br /><ul><li>Se removieronmandibulas de ratas con 1 -10 dias de nacidas
  14. 14. Fueron fijadas en un buffer de formalina 10% neutral por 48Horas a 4ºC
  15. 15. Se enjuagaron con10mM PBS a un pH 7,4
  16. 16. Se descalcificaron al 5% con acìdoformico por 7 dias
  17. 17. Se deshidrataron, se colocaron en parafina y se hicieron 8 microcortes</li></li></ul><li>Se deshidrataron, se colocaron en parafina y se hicieron 8 microcortes.<br />
  18. 18. RESULTADOS<br />IN VIVO<br /> EL GEN OPG SE EXPRESO EN EL FOLICULO DENTAL DE LA RATA Y EL RATON.<br /> HAY CAIDA DE LA EXPRESION EN EL DIA 3 EN RATA Y EN EL DIA 5 EN RATONES.<br />
  19. 19. RESULTADOS<br />IN VITRO<br />La expresion del OPG de la celula del foliculo dental en la rata se inhibio al incubarse en PTHRP <br /> la maxima inhibiciones en 25ng/ml.<br />
  20. 20. RATON<br />lascelulas del foliculo dental tuvieronconcentración de PTHrP 1 ng/mLbajo, inhibe la expresión OPG <br />IN VITRO<br />
  21. 21. RESULTADOS<br />TIEMPO<br />INICIO DE INHIBICION DEL OPG FUE A LOS 30` DE INCUBACION EN PTHrP Y SE MANTUVO HASTA 1 HORA<br />
  22. 22. RESULTADOS<br />EN RATAS LA INCUBACION DE LAS <br />CELULAS EN CSF1 INHIBE<br /> LA EXPRESION OPG.<br />
  23. 23. RESULTADOS<br />EN RATONES LAS CELULAS FOLICULOS TUVIERON <br />MAXIMA REDUCCION DEL OPG EN CONCENTRACION DE 50ng/mL<br />DE CSF1<br />
  24. 24. DISCUSION<br /><ul><li>Hay una inhibición in vivo de la expresión del gen de OPG en el folículo dental en un tiempo crítico 3 días en la rata y el día 5 en el ratón.
  25. 25. Es significativo por que hay tiempos respectivos cuando el numero máximo de osteoclastos se ven alrededor de hueso alveolar del primer molar mandibular tanto en las ratas como en los ratones.</li></li></ul><li>DISCUSION<br /><ul><li>Simonet en 1997, y Yasuda en (1998, 1999): describen como se la OPG inhibe tanto la formación como la activación de los osteoclastos, y por otro lado una reducción de la expresión de OPG generando formación de osteoclastos.</li></li></ul><li>DISCUSION<br /><ul><li>En 1998 Yasuda y colaboradores señalarón que la activación de osteoclastos es inducida por el factor de diferenciación de osteoclastos (ODF) y que la reducción de la expresión de OPG puede proveer un período de tiempo critico para una reabsorción inicial del hueso alveolar por la activacion del osteocalsto.</li></li></ul><li>DISCUSION<br /><ul><li>Wise y Fan en (1989), Cielinski en (1994) expusieron que el tiempo critico de reducción de la expresión del OPG es el tiempo donde se presenta mayor formación de osteoclastos.
  26. 26. Horwood y colaboradores en (1998) refiere que en los osteoblastos de ratones la hormona paratiroidea también causa ligero incremento de la laPTHrp.</li></li></ul><li>DISCUSION<br /><ul><li>Sakata en (1999) describió como el gen de la OPG se expresa en las células mesenquimáticas dentales humanas, recientes estudios muestran la transcripción del OPG en fibroblastos gingivales, células del LP y células pulpares.</li>

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