Pasos de la técnica histológica básica

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Pasos de la técnica histológica básica

  1. 1. Pasos de la Técnica Histológica Básica
  2. 2. Toma de MaterialLos métodos más utilizados son:• Biopsias• Necropsias• Improntas• Frotis de células superficiales• Frotis de células sanguíneas• Animales de experimentación• Aplastados celulares
  3. 3. Fijación• La fijación debe realizarse lo más rápido posible luego de tomada la muestra, para evitar los procesos de autolisis. Además se debe escoger el método más adecuado al objetivo del estudio a realizar.• Se pueden clasificar en los siguientes métodos:  Por inmersión: pequeños trozos del tejido son sumergidos en el liquido fijador.  Por perfusión: el líquido fijador se aplica por inyección vascular.  Por vapores: consiste en utilizar líquidos fijadores que emitan vapores, se debe realizar bajo campana extractora de gases.
  4. 4. Deshidratación Luego de que la muestra ha sido fijada se debe eliminar el fijador y deshidratar. Para esto se utiliza una serie gradual de soluciones acuosas con una concentración de menor a mayor del agente deshidratante, como por ejemplo alcohol etílico. La deshidratación gradual se hace para evitar la deformación de la morfología del tejido, debido a la rápida salida del agua.
  5. 5. Aclaramiento Posterior a la deshidratación el tejido se debe sumergir en un líquido que sea miscible tanto en el medio de inclusión como en el medio de deshidratación. El líquido comúnmente utilizado es el xilol. Esta etapa se llama aclaramiento debido a que el tejido se vuelve transparente.
  6. 6. Inclusión Para poder obtener cortes delgados que puedan ser observados al microscopio óptico, los tejido deben ser incluidos en una sustancia de consistencia firme, la cual puede ser hidrófila o hidrófoba. Un medio hidrófobo que se puede utilizar es la parafina o el paraplast. Este último es una parafina altamente purificada a la cual se le han agregado cantidades variables de polímeros especiales, lo cual le dará distinta dureza y plasticidad al taco de inclusión.
  7. 7. Corte El taco obtenido en la inclusión se debe cortar en secciones lo suficientemente delgadas que permitan el paso de la luz, para esto se utiliza un aparato llamado micrótomo. Para esto el bloque se debe tallar, para eliminar el exceso de parafina, formando una pirámide truncada.
  8. 8. Corte Los cortes que se van obteniendo se deben ir estirando, esto se puede realizar en un baño termoregulado (40-45 ºC). El estiramiento se basa en la dilatación de la parafina producto del calor. Luego estos cortes se van recogiendo con un portaobjetos.
  9. 9. Tinción Primero la parafina debe ser eliminada sumergiendo los portaobjetos con los cortes en un solvente orgánico que puede ser xilol. Luego los cortes deben ser hidratados pasando por una serie de graduaciones decreciente de alcohol etílico, hasta llegar a una solución que sea 100% agua. Una vez rehidratado el tejido puede ser teñido. Los colorantes más utilizados son hematoxilina y eosina.
  10. 10. Montaje Luego de teñir el tejido este debe ser deshidratado nuevamente, para esto hay que pasarlo por una serie de alcoholes en grado ascendente. Posteriormente hay que pasar el tejido por xilol, de modo de hacerlo miscible con el medio de montaje. Finalmente se le agrega el medio de montaje y se le coloca el cubreobjetos, teniendo cuidado en no dejar burbujas.
  11. 11. Observación al Microscopio
  12. 12. Observación al Microscopio

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