Fitohormonas

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Auxinas, AIA, IBA, ANA, Auxinas, Citoquinina, reguladores in vitro, BAP, CPPU, Brasinoesteroides, Ácido Abscisico, Carbo activado, Etileno, Nitrogeno, Urea, Agua de coco, Extracto de malta. Preparación de medios de cultivo.

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Fitohormonas

  1. 1. Cultivo de Tejidos Vegetales presentación de FITOHORMONAS
  2. 2. ¿Qué son ? • Compuestos naturales que poseen la propiedad de regular procesos fisiológicos en concentraciones muy por debajo de la de otros compuestos (nutrientes, vitaminas) y que en dosis más altas los afectarían.
  3. 3. ¿Qué son ? factores externos: luz, nutrientes, agua y temperatura, entre otros, Factores internos: hormonas. Desarrollo normal de una planta • Depende de la interacción de:
  4. 4. ¿Qué actividades cumplen ? Regulan procesos de correlación recibido el estímulo en un órgano lo amplifican Traducen generan una respuesta en otra parte de la planta.
  5. 5. ¿Qué actividades cumplen ? Interactúan entre ellas por distintos mecanismos: Sinergismo: la acción de una determinada sustancia se ve favorecida por la presencia de otra. Antagonismo: la presencia de una sustancia evita la acción de otra. Balance cuantitativo: la acción de una determinada sustancia depende de la concentración de otra
  6. 6. ¿Qué actividades cumplen ? Se Diferencian de las hormonas animales por su efectos Pleiotrópicos Actua en diversos procesos fisiológicos Síntesis no se relaciona con una glándula, sino que están presentes en casi todas las células y existe una variación cualitativa y cuantitativa según los órganos.
  7. 7. ¿Cuáles son y sus efectos?
  8. 8. ¿Sus estructuras?
  9. 9. Auxinas Grupo de compuestos que estimulan la elongación de las células. Del griego 'crecer' •ácido indolacético (AIA) es la forma natural predominante, actualmente se sabe que también son naturales •IBA (ácido indol butírico), •ácido feniácetico, •ácido 4 cloroindolacético •ácido indol propiónico (IPA), las más conocidas: Auxinas sintéticas •ANA (ácido naftalenacético) •IBA (ácído indolbutírico) •2,4-D (ácido 2,4 diclorofenoxiacético) •NOA (ácido naftoxiacético) •2,4-DB (ácido 2,4 diclorofenoxibutilico) •2,4,5,-T (ácido 2,4,5 triclorofenoxiacético)
  10. 10. Auxinas Ubc. en toda la planta ↑ [] en las regiones meristemáticas Su síntesis puede derivar de: •triptofano, que por transaminación y descarboxilación da origen al AIA o de la triptamina por oxidación. Se le encuentra tanto como: •Forma activa, molécula libre •Forma inactiva, en formas conjugadas (con proteínas solubles) •transporte, almacenamientoen semillas en reposo, y de evitar la oxidación por acción de la AIA oxidasa. [] auxina libre en plantas varía de 1 a 100 µg/kg peso fresco. [] de auxina conjugada + ↑
  11. 11. Efectos Auxinas Actúan en la Mitosis. Alargamiento celular. Formación de raíces adventicias. Dominancia Apical Herbicida Partenocarpia Graviotropismo Diferenciación de xilema Regeneración del tejido vascular en tejidos dañados Inhibición del crecimiento radical en concentraciones bajas Floración senectud Geotropismo Retardan la caída de hojas, flores y frutos jóvenes dominancia apical
  12. 12. Giberelinas El Acido giberélico GA3 •Japon hongo Giberella fujikuroi •producía en crecimiento inusual de las plantas de arroz
  13. 13. Giberelinas Biosíntesis Terpenos Estructura: •por ciclación de estas unidades, formando kaureno. Sintetizado en el camino metabólico del ácido mevalónico. Síntesis se produce en todos los tejidos de los diferentes órganos. Mov. a través de floema y xilema No es polar como en el caso de las auxinas.
  14. 14. Citocinas Derivan de adeninas sustituidas Promueven la división celular en tejidos NO meristemáticos. Inicialmente fueron llamadas cinetinas En musgos, algas café, rojas y en algunas Diatomeas. .
  15. 15. EstructuradeCitocinas
  16. 16. Síntesis de Citocinas En los órganos en crecimiento y en el meristema de raíz. A partir del isopentenil adenosina fosfato (derivado de la ruta del ácido mevalónico) por perdida de un fosfato, eliminación hidrolítica de la ribosa y oxidación de un protón origina la zeatina es una citocinina natural que se encuentra en el maíz (Zea mays L.) de allí su nombre.
  17. 17. Etileno De estructura más simple, gaseoso. Hidrocarburo, es muy diferente a otras hormonas vegetales naturales. geotropismo y abscisión 1960
  18. 18. Síntesis de Citocinas Deriva de los C3 y C4 de la metionina con gasto de ATP, a S-adenosilmetionina (SAM) por acción de una enzima pasa a ácido aminociclopropano- 1 carboxílico (ACC) por oxidación de este y por la acc oxidasa se forma etileno. Posee acción autocatalítica •La presencia de etileno activa la acción del gen que codifica la enzima que pasa de ACC a etileno
  19. 19. Escuela Politécnica de las Fuerzas Armadas Departamento de Ciencias de laVida Ingeniería en Biotecnología Cultivo deTejidosVegetales Msc. Mónica Jadan AUXINAS Esteban Caiza
  20. 20. AUXINAS Hormonas vegetales “auxein” = crecer 1928 - Frits Went 1881 - Charles Darwin. Elongación celular Ácido Indolacético (AIA)
  21. 21. AUXINAS NATURALES SINTÉTICAS Ac. Indolacético (AIA) Ac. Naftalenacético (ANA) Ac. 4-cloro-indolacético (4-Cl-IAA) Ac. Naftoxiacético (NOA) Ac. fenilacético (PAA) Ac. 2, 4 diclorofenoxibutílico (2,4-DB ) Ac. diclorofenoxiacético (2,4,D) Ac. 2,4,5-triclorofenoxiacético (2,4,5-T) Clasificación: Tabla 1. Clasificación de las auxinas
  22. 22. AUXINAS Fig 1. Estructura de algunas auxinas naturales y sintéticas.
  23. 23. AUXINAS Biosíntesis:Meristemas apicales, hojas jóvenes, frutos en desarrollo. Efectos: Alargamiento (tallos), abscisión (hojas, flores, frutos), formación de raíces adventicias, Floración y fructificación, dominancia apical, extensibilidad pared celular, diferenciación vascular.
  24. 24. AUXINAS AIB y ANA son frecuentemente usados para enraizamiento, 2,4-D para inducción de callos Se disuelven en etanol diluido o solución de Na(OH) 2,4-D,ANA, AIA,AIB [ ] mM o uM (1mM = 10-3 mol/L) pH: 5,5 – 6,0 De Fossard (1976) AIB 0.01-0.5-5 mg/L
  25. 25. AUXINAS Fig 2. Formación de callo por efecto de la auxina 2,4-D
  26. 26. AUXINAS Fig 3. Efecto de las auxinas y citoquininas
  27. 27. Fig 4. Efecto de la composición del medio de cultivo sobre la las células de tabaco. AUXINAS
  28. 28. 2,4 D ALEXANDRACHASIQUIZA
  29. 29. HISTORIA Usado en la guerra de Vietnam por EEUU. 50 % de 2,4- D 50 % de 2,4,5-T Herbicida
  30. 30. 2,4 D Ácido 2,4 Diclorofenoxi- acético Auxina Sintetizada Químicamente Regulador de crecimiento Formador de callo Concentraciones de 0.01 y 6.0 mg/L PM: 221
  31. 31. Almacenaje Líquido: 2-8°C pH: 5.5-6 Etanol Dimetil- sulfóxido Eficaz Soluble Callo Efectos tóxicos Almacenaje del polvo: RT Coautoclavable con otros componentes de los medios
  32. 32. EFECTOS TÓXICOS
  33. 33. BIBLIOGRAFÍA:• Sigma- Aldrich, 2013, Productos y servicios, recuperado el: 09/09/2013. disponible en [http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/d7299?lang=en&reg ion=EC] • Almeida, F., 1974, “Aspectos tóxicos de los herbicidas 2,4 D y 2,4,5 T”, Universidad de Buenos Aires, recuperado el 09/09/2013, disponible en [http://www.produccion- animal.com.ar/sanidad_intoxicaciones_metabolicos/intoxicaciones/34- toxicologia_herbicidas.pdf]
  34. 34. UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS – ESPE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA CULTIVO DETEJIDOSVEGETALES JAVIER DONOSO
  35. 35. AIA AIA: Ácido indolacético Fórmula: C10H9NO2 Auxina natural. Produce alargamiento y agrandamiento celular. In vitro: Promueve la división celular. http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/d/d3/Indol-3- ylacetic_acid.svg/200px-Indol-3-ylacetic_acid.svg.png
  36. 36. FUNCIONES DEL AIA Promueve el fototropismo positivo. Promueve y provoca el desarrollo de raíces laterales y adventicias. Estimula el desarrollo de los frutos
  37. 37. Cultivo in vitro: Importante en el enraizamiento. Tiene la capacidad de generar raices adventicias. http://revista.ibp.co.cu/component/docman/doc_view/1435-v5-n2-2005289-94.html
  38. 38. CONCENTRACIÓN No es posible establecer una concentració n de auxina particular. Varia desde 0.001 – 10 mg/L Punto óptimo: 0.1- 1 mg/L
  39. 39. ADICIÓN AL MEDIO Se agrega el AIA al MB Se ajusta el pH a 5.8 Adición y dislución del agar. Esterilización por autoclavado. Se agregan sustancias termolábiles esterilizadas por filtración
  40. 40. Peso Molecular: 203.3 gramos Fórmula Molecular: C12-H13-N-O2
  41. 41. AUXINAS SINTÉTICAS MÁS ACTIVAS - IBA (Acido indol butírico) - NAA (Acido naftaleno acético) - 2,4-D (Acido 2,4 diclorofenoxiacético)
  42. 42. ACIDO INDOL 3-BUTIRICO Mas eficiente: IAA (Acido Indol Acetico) Promover formacion de raices laterales Comercial
  43. 43. IBA Diluyente: Agua Solvente: Alcohol diluido - Solucion de Na(OH) USO: Aerosol - Polvo
  44. 44. Concentración de trabajo 000.1- 10 (mg/L) Almacenaje: Esterilización: Autoclavado y filtrado Polvo: 2 – 8 °C Líquido: 0°C
  45. 45. - Elongación celular - Expansión de los tejidos - División celular (formación de callo) - Formación de raíces adventicias - Tropismos - Dominancia apical (Inhibición de la formación de vástagos axilares y adventicios) - Baja concentración: Formación de raíces adventicias.
  46. 46. NOMBRE DESARROLLADO FORMULA
  47. 47. FAMILIA UTILIZACION CONDICIONES pH TIPO
  48. 48. EFECTOS IN VITRO EFECTOS EN LA PLANTA DOSIS Y FRECUENCIA DE APLICACION ALTAS
  49. 49. COMO ACTUA?
  50. 50. COMO SUMINISTRAR EN EL MEDIO DE CULTIVO? Disminución actividad
  51. 51. Auxinas Citoquininas
  52. 52. Citoquininas Auxinas
  53. 53. Auxina Citoquinina
  54. 54. Citoquinina Nombre :Paola Iturralde
  55. 55. Definición Constituyen un grupo de hormonas vegetales Promueven la división celular En tejidos no meristematicos
  56. 56. Estructura química Derivados de adenina •Cadena lateral unida al grupo amino 6 del anillo purinico Isoprenoide Aromatico Zeatina , isopenteniladenina y dihidrozeatina Benciladenina, kinetina y topolina
  57. 57. Biosíntesis Asociada a los meristemos Apicales y cambium Semillas, frutos y raíces En cultivo in vitro se prefiere las sintéticas gracias a su Gran estabilidad
  58. 58. Citoquininas
  59. 59. Preparación y usos  Medios esterilizados en polvo  Filtrados en 0,2 µm de un doble filtro dentro de una botella esteril PROTOCOLO Para preparar una 1 mg / ml de solución madre Añadir 100 mg de medio a un matraz aforado ,Y 2-5 ml de disolvente Añadir 1,0 ml de la solución madre a 1 litro de medio Se utiliza concentraciones A un intervalo de 0,1-10,0 mg / L
  60. 60. Tabla de Molar Preparación Equivalencia y Solución
  61. 61. Funciones  Pueden regular la división celular  Estimular la proliferación de brotes axilares y adventicias.  regular la diferenciación.  inhiben la formación de raíces.  activar la síntesis de ARN y proteínas.  estimular la actividad enzimatica.
  62. 62. Función citoquinina/auxina
  63. 63. NOM B RE: FRED D Y M OPOSIT A FEC HA : 1 0/ 09/ 201 3 REGULADORES IN VITRO ESCUELA POLITECNICA DEL EJERCITO INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
  64. 64. Citocininas Son derivados de la adenina que promueven la división celular. incrementan la tasa de división celular, el transporte de solutos hacia las hojas, semillas, flores y frutos y producen un retardo de la senescencia de las hojas.
  65. 65. 6 - (y, y-DIMETHYLALLYLAMINO) purina (2-Isopentenyl) adenina, 2iP, N6-[2-amilo] adenina CARACTERISTICAS Este es un regulador in vitro que promueve la división celular en las raíces y brotes, también es un regulador para el desarrollo de microinjertos
  66. 66. 6 - (y, y-DIMETHYLALLYLAMINO) purina CARACTERISTICAS Cultivo de células de plantas ensayadas Son de origen natural Soluble en NaOH 1 N Pertenece a la familia de la citocininas.
  67. 67. 6 - (y, y-DIMETHYLALLYLAMINO) purina CARACTERISTICAS Peso molecular: 203.24 Almacenamiento : De -20 a 0 º C Punto de fusión: 212-214 ° C
  68. 68. BIBLIOGRAFIAS  http://www.ecuaquimica.com/pdf_agricola/CYTOK IN.pdf  http://www.phytotechlab.com/detail.aspx?ID=242  http://www.plantmedia.com/index.php?main_page =product_info&products_id=126165
  69. 69. UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS-ESPE CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES BAP Bencilaminopurina Giovanna C. Móran Marcillo
  70. 70. Fórmula empírica • C 12 H 11 N 5 Peso molecular • 225,25 g/mol Estructura Bencilaminopurina
  71. 71. Características Regulador de crecimiento sintético Pertenece a la familia de las citoquininas junto con las auxinas provoca crecimiento de las plantas
  72. 72. Características BPA retrasa la senescencia foliar Reduce la degradación de pigmentos proteínas fotosintéticas y membranas cloroplásticas Mantiene el equilibrio hídrico del tejido
  73. 73. In vitro Xanthosoma sagittifolium L (ocumo) determinar la concentración de citoquinina para inducción de brotes concentraciones de 0, 2, 3, 4 mg.L-1 (BAP) longitud y biomasa de los brotes,biomasa fresca total e índice de crecimiento
  74. 74. 2 mg.L-1 de BAP en los medios de cultivo fue determinante para la inducción de brotes Se concluyó que el uso de 6-BAP mejora la multiplicación y calidad de los brotes citoquinina más efectiva y empleada es BAP para la inducción de yemas axilares. frecuencia de 75%
  75. 75. Preparación Murashige and Skoog Gamborg’s (Toledo, 1998)
  76. 76. Tabla de equivalencia molar y preparación de soluciones SIGMA-ALDRICH http://www.sigmaaldrich.com/life-science/molecular-biology/plant-biotechnology/tissue-culture-protocols/growth-regulators.html
  77. 77. Usos Prolongan la vida de flores cortadas Aumentar la productividad de cultivos Prolongar el almacenamiento postcosecha
  78. 78. Yanara Naranjo Rojas Escuela Superior Politécnica del Ejército Departamento de Ciencias de la Vida Facultad de Ingeniería en Biotecnología Cultivo de Tejidos Vegetales
  79. 79. CPPU 1- (2- cloro - 4- piridil) 3- fenilurea) Regulador de crecimiento Citoquininica Diámetro y peso - Uvas - Kiwi 0,1% p/v SL Concentración soluble M.Acción: Sistémico Fenilurea Citoqunina sintético
  80. 80. Meneses, 2002 Efectos de CPPU y GA en vitícolas “Italia” en región Submedio San Francisco, Noreste de Brasil CarlosAgusto Meneses Feitosa (2002)
  81. 81. “In vitro” Mora, 2010 Explante deArándano en medioWPM (Woondy plant medium) Usadas como Citocininas - Organogénesis - Desdiferenciación Auxinas/Citocininas - Alta: Raices - Baja: vástago Producción de hojas (2mg/L) Mora, 2010: "ORGANOGÉNESIS in vitro DE ARÁNDANO Vaccinium corymbosum L." "ORGANOGÉNESIS in vitro DE ARÁNDANO Vaccinium corymbosum L." Explantes de epicotilo
  82. 82. Bibliografia  Meneses, C. 2002. Efectos de CPPU y GA en vitícolas “Italia” en región Submedio San Francisco, Noreste de Brasil. Revista RBF, ISSN 0100-2945.  Ormedo,A. (S/A). Influencia de cppu (n-(2-cloro-4-piridil)- infenilurea) sobre producción y calidad de fruta de arándanos. Universidad deTalca.  http://www.anasac.cl/agropecuarios/opensite_det_2009081012 4855.aspx  http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/2211/4_- _Cultivo_in_vitro.pdf?sequence=6  http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/2211/4_- _Cultivo_in_vitro.pdf?sequence=6
  83. 83. DANIELA NAVARRETE
  84. 84. GENERALIDADES ESTEROIDAL En muy bajas cantidades únicas hormonas vegetales con una estructura química crecimiento crecimiento Compuestos que actúan como reguladores de crecimiento vegetal PAPEL IMPORTANTE
  85. 85. Sustancias vegetales fabricadas en un determinado lugar de una planta se transladan a otro donde actúan regulando el crecimiento, desarrollo o metabolismo del vegetal
  86. 86. En los tejidos jóvenes de las plantas en crecimiento: procesos de expansión división diferenciación celular Incrementar el rendimiento de los cultivos
  87. 87. AUSENCIA o cambios en la concentración: enanismo severo cambios drásticos del fenotipo cambios en la morfología de las hojas poco desarrollo de las raíces
  88. 88. ESTRUCTURA cuatro anillos (A, B, C y D) y una cadena lateral condensación de bloques de cinco átomos de carbonos isoprenos esteroides con 27, 28 o 29 átomos de carbono diferentes sustituyentes en los anillos A y B y en la cadena lateral
  89. 89. EFECTOS incremento en la tasa de elongación del tallo aumento en la expansión de las hojas crecimiento del tubo polínico desenrollamiento de las hojas reorientación de las microfibrillas de celulosa adaptación al estrés  aumenta tolerancia al frío organogénesis y embriogénesis somática
  90. 90. BRASINOLIDO Es el más activo y el primero en aislarse de Brassca napus en 1979 Biosintéticamente provienen del cicloartenol, obtenido desde el escualeno (triterpeno)
  91. 91. EFECTOS  Favorecen la elongación y división celular en segmentos de tallos.  Favorecen el desenrrollamiento de las hojas.  Favorecen el crecimiento de tubos polínicos.  Promueven la diferenciación del xilema.  Favorecen la germinación.  Inhiben el crecimiento de las raíces.  Retardan la abscisión de hojas.  Aumentan la sensibilidad a las auxinas
  92. 92.  Estimula la actividad fotosintética acelerando la fijación de CO2  Incrementa la biosíntesis de proteínas y el contenido de azúcares reductores.
  93. 93. COMO ACTÚA  Su mecanismo involucra la unión a receptores LRR (enriquecidos en leucina) ligados a la membrana plasmática, miembros de la familia de receptores tipo kinasa.
  94. 94. BIBLIOGRAFÍA  http://www.revistaciencia.amc.edu.mx/in dex.php?option=com_content&task=vie w&id=47  http://fisiohorticola.files.wordpress.com/2 008/09/clase_5_otras_fitohormonas.pdf  http://www.biologia.edu.ar/plantas/regula dores.htm#Brasinoesteroides y turgorinas
  95. 95. ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES ABSCÍSINAS ALEJANDRA OVIEDO
  96. 96. ¿Qué es el Ácido Abscísico? (García, Roselló & Santamarina.,2006). Se les denomino dorminas. Puede ser sintetizada por células de hojas maduras, tejidos estresados, semillas y el ápice de raíz.  Se transporta principalmente por el floema pero también por el xilema . Concentración en plantas 0.01 y 1 mg/L En plantas marchitas puede incrementarse hasta 40 veces http://www.barrameda.com.ar/botanica/images/botanic79.jpg
  97. 97. Funciones biológicas • Estimula el cierre estomático . • Inhibe el crecimiento del tallo pero no el de las raíces; en algunos casos puede incluso inducirlo. • Induce en las semillas las síntesis de proteínas de almacenamiento. • Inhibe el efecto de las giberelinas. • Induce y mantiene la latencia. • Induce la senescencia en hojas. • Induce indirectamente la defensa contra patógenos.
  98. 98. ABA (-) ABA (+) Efecto de ABA en latencia de semillas http://www.flickr.com/photos/mdecena/5867155322/
  99. 99. Efecto en plantas in vitro - Produce efecto negativo en los cultivos in vitro. - Es un inhibidor del crecimiento (antagonista de auxinas, citoquininas y giberelinas) - Tolerancia al estrés ambiental (estrés hídrico): - Dormición: retraso en el tiempo de dormición de la semilla - Induce senescencia mediante inducción de etileno. mejorvendedor.wordpress.com 3.bp.blogspot.com
  100. 100. GRACIAS
  101. 101. Bibliografía • García J., Roselló J. & Santamrina P. (2006) Introducción al funcionamiento de las plantas. Editorial de la UPV. Valencia. Imágenes: ABA en semillas. [Extraído el 09/09/2013]. http://www.flickr.com/photos/mdecena/5867155322/ Xilema y floema. [Extraído el 09/09/2013]. http://www.barrameda.com.ar/botanica/images/botanic79.jpg Cultivo in vitro. [Extraído el 09/09/2013]. http://mejorvendedor.wordpress.com/2011/01/03/seminario-cultivo-plantas-in-vitro/ http://3.bp.blogspot.com/- IGkGY5dt0W8/Tl5aHAXi2KI/AAAAAAAAFnM/orRr5vfmz5g/s320/Cultivos%2Bin%2Bvitr o%2Blibres%2Bde%2Bpat%25C3%25B3genos.jpg
  102. 102. David Ramírez
  103. 103.  Adsorbente altamente cristalino Porosidad interna desarrollada Microporos menor a 1 nanometro 1 gramo puede poseer un area de 500 metros cuadrados
  104. 104.  auxinas y citocininas se liberan progresivamente en el medio favoreciendo embriogénesis somática. Adsorbe sustancias químicas en general Limita los problemas de oxidación(compuestos fenólicos)
  105. 105.  Desarrollo de cultivos inhibidos Induce a la sinteisis de compuestos (benzoquinonas en lithospermum) El clima luminoso del cultivo cambia (se obscurece) y forma raíces. Efecto estimulador del crecimiento y la organogénesis de las especies leñosas.
  106. 106.  Promueve la embriogénesis somática y la embriogénesis en cultivo de anteras Ayuda a estabilizar el PH Concentración 0,2 – 3 % P/V
  107. 107. Nombre químico (IUPAC): carbono activado Fórmula química: C Estructura química Combinados en forma grafitica Placas separadas con distintas orientaciones (poro)
  108. 108.   http://www.cnf.org.pe/secretaria_conflat/memoria s/DOCUMENTO%20MESAS/MESA%201/Graciela %20Castillo.pdf  http://www.carbonactivo.com/web/index.php?Ite mid=81&id=50&option=com_content&task=view  http://books.google.com.ec/books?id=yLLONP5TP LIC&pg=PA16&dq=citoquinina&hl=es&sa=X&ei=1Z guUtnnOZHO9gStkID4BA&ved=0CFUQ6AEwCA# v=onepage&q&f=false Bibliografía
  109. 109. ETILENO • Promueve la maduración de los frutos y la senescencia (flores y hojas). • Inducen la abscisión de las hojas. • Promueve el crecimiento lateral (pérdida de gravitropismo). • Respuestas ambientales, patógenos, heridas, estrés abiótico.
  110. 110. • Es una de las fitohormonas más ampliamente utilizadas en la agricultura. • Las auxinas y el ACC pueden disparar la biosíteis natural del etileno. • Debido a su alta velocidad de difusión, es difícil de aplicar como gas, pero esta limitación se soslaya utilizando algún compuesto que libere etileno: ethephon (ácido 2- cloroetilfosfónico) nombre comercial (Etherel)
  111. 111. • Componente esencial (estructural,formación de aa, clorofila, enzimas, etc) • Estimular al crecimiento, especialmente en la etapa inicial de crecimiento vegetativo. • Genera un alto índice de área foliar. • Incrementa el número de flores, # y peso de la vaina (rendimiento). • Regulador de fitohormonas. NITRÓGENO
  112. 112. • El N en general destaca por sus concentraciones relativamente altas en los medios de cultivo. • Puede ser suministrado en forma de amonio y/o nitrato, también en forma de úrea, glutamina y caseína hidrolizada.
  113. 113. ÚREA • En la tierra entre el 8 y 10 %
  114. 114. UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS – ESPE CIENCIAS DE LA VIDA Y DE LA AGRICULTURA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA CULTIVO DE TEJIDOS Jéssica Villarreal Máster Mónica Hadan 10 – Sep – 2013 Quito - Ecuador 10/09/2013 122
  115. 115. 12310/09/2013 1942, Van Overbeek mostró que embriones se podían cultivar in vitro hasta la madurez Utilizando el endosperma líquido del Coco Como suplemento de un medio de cultivo estándar 1948, Caplin: potencial AC induce la división celular en tejidos diferenciados Observaron 1era vez en el parénquima del floema secundario de la raíz de zanahoria Se sabía que el AC era sólo uno de los líquidos que, al ser nutritivos para los embriones inmaduros, podía producir el mismo efecto en tejidos y en células explantadas.
  116. 116. 12410/09/2013 Substancias Naturales • Termoestablles En relación a sus componentes se dividió • Mezcla de aa y amidas • Fracción neutral (mio inositol y d – sorbitol • Fracción Activa (difenil urea y leuco antocianina) Resultado total de los 3 • AC mezcla compleja cuyos componentes y [ ] Unidas por carbonos activos En Coco se desarrolla gran cantidad de endosperma líquido donde se almacenan nutrientes para el embrión en desarrollo, mientras el embrión siga latente el endosperma inducirá la división celular 5 – 10% interactúan con auxinas y promueven el crecimiento
  117. 117. 12510/09/2013 Medio complejo con gama de componentes orgánicos e inorgánicos Buena capacidad de amortiguación Mg, P, Azúcar 2,5% N2 no proteico soluble en forma de aa
  118. 118. 126 Fuente de N reducido (tejidos se oscurecen y mueren) Precursor de adenil citocinina Ac. Aspártico y glutámico. Malta de Ragi 0.1% y como un suplemento Diversos tejidos responden de manera diferente a varios compuestos
  119. 119. 127  El uso del AC se justifica no solo por ser un líquido amortiguador sino también porque sus cualidades promotoras del crecimiento frecuentemente son superiores en su totalidad a las de otros medios conocidos.  En aquellas áreas donde crece, el coco es significativamente más barato que compuestos purificados o sintéticos tales como la zeatina o el inositol.
  120. 120. 10/09/2013 128
  121. 121. Preparación de medios y otros compuestos que se añaden Marco Viteri
  122. 122. Preparación del medio de cultivo Es necesario preparar el medio utilizando agua bidestilada o agua desmineralizada-destilada. Se debe evitar el almacenamiento prolongado para evitar contaminantes, todas las sustancias deben ser de alto grado de pureza. La preparación dependerá del tipo de medio, su consistencia y componentes termolábiles.
  123. 123. a. Medios semisólidos sin sustancias termolábiles Incorporación del medio basal (MB), de los reguladores y otros compuestos, ajustar el pH. Adición y disolución del agar, distribución en los recipientes de cultivo (cajas Petri, tubos de ensayo, etc.). Esterilización en el autoclave
  124. 124. b. Medios líquidos con o sin sustancias termolábiles. Se realiza el mismo procedimiento de a, pero sin adicionar agar, y esterilizando por filtración en caso de que existan sustancias termolábiles.
  125. 125. c. Medios semisólidos con una o mas sustancias termolábiles. Incorporación de compuestos que pueden ser esterilizados en autoclave, ajustar pH. Adición y dilución del agar. Incorporación de las sustancias termolábiles esterilizadas por filtración. Componentes esterilizados a temperatura de 40-50°C. Distribución del medio en los recipientes previamente esterilizados en el autoclave.
  126. 126. Se adicionan como fuentes de nitrógeno reducido, factores de crecimiento, carbohidratos, y otros. Entre ellos están el agua de coco, AC, (5-15%, v/v)m el jugo de frutos de tomate, extracto de levadura y extracto de tubérculos de papa. El jugo de frutos de tomate se lo utiliza como inhibidor de crecimiento de semillas. El Carbón activado incorporado al medio (0.1-5%), ha demostrado ser de utilidad en el cultivo de diferentes explantes, posiblemente por absorber metabolitos tóxicos.
  127. 127. Se añaden ácidos orgánicos como el cítrico, el málico, el succínico y el piruvato, como precursores de aminoácidos. Sustancias antioxidantes (ácido ascórbico, L-cisteinam polivinilpirrolidona) puede ser de utilidad para el cultivo de explantes con alto contenido de polifenoles.
  128. 128. 2,3,5 TIBA (Ácido triiodobenzoico)Esterilizable por filtro Concentración 0.05-5.0 mg/L Solvente: NaOH 1N Diluyente: Agua Auxina Peso molecular 499.8 es un inhibidor de transporte de auxina, para estudiar el papel de flujo de auxina durante el crecimiento y desarrollo de plantas.
  129. 129. Bibliografía  Roca, W.,(1993), Cultivo de tejidos en agricultura, cap 2, Medios de cultivos: generalidades, composición y preparación.  Sigmaaldrich, (en línea), recuperado el: 06/09/2013, disponible en: http://www.sigmaaldrich.com/us- export.html

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