Brotes a partir de embriones inmaduros de limon

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Se estudió la obtención de brotes libres de enfermedades mediante el cultivo de embriones inmaduros de Citrus limonum, cultivado en medio Murashige y Skoog. El uso de embriones inmaduros permite obtener plantas viables y estos no presentan virus ni patógenos debido a que las semillas se encuentran aisladas dentro del fruto, se pudo observar ausencia de contaminación pero oxidación en dos de los cuatro frascos.

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Brotes a partir de embriones inmaduros de limon

  1. 1. OBTENCIÓN DEBROTES A PARTIR DE EMBRIONES INMADUROS DE LIMÓN (Citrus limonum) EN EL LABORATORIO DE CULTIVO IN VITRO DE TEJIDOS VEGETALES. Paola Ayala, Alexandra Chasiquiza Cultivo de Tejidos. Ingeniería en Biotecnología. Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE. Sangolquí-Ecuador Diciembre 2013 RESUMEN Se estudió la obtención de brotes libres de enfermedades mediante el cultivo de embriones inmaduros de Citrus limonum, cultivado en medio Murashige y Skoog. El uso de embriones inmaduros permite obtener plantas viables y estos no presentan virus ni patógenos debido a que las semillas se encuentran aisladas dentro del fruto, se pudo observar ausencia de contaminación pero oxidación en dos de los cuatro frascos. Palabras Clave: embryos, in vitro culture, healthyplants. ABSTRACT Obtaining free outbreaks studied by culturing immature embryos of Citrus limonum, grown in Murashige and Skoog medium. The use of immature embryos and allows to obtain viable plants are unable to produce virus or pathogens because the seeds are isolated within the fruit, we observed absence of contamination but oxidation in two of the four flasks. Keywords: meristems, viruses, healthy plants. INTRODUCCIÓN La propagación sexual de algunas especies tiene limitantes como: una baja producción de semillas porárbol en condiciones naturales causada porla pérdida de frutos durante el desarrollo y ladificultad de conservar los genotipos encondiciones silvestres, la semilla tiene latencia natural, la cual produce baja uniformidaden la germinación en condiciones de vivero(Gómez & Toro, 2007). La técnica de obtención de brotes a partir de embriones sirve para evitar la presencia de contaminantes endógenos debido a que muchos cultivos vegetales contienen virus sistémicos, los cuales afectan su funcionamiento y abaten su rendimiento, representando grandes pérdidas económicas para los agricultores, por tanto es deseable la producción de plantas libres de virus. En muchas especies se puede lograr plantas sanas sometiéndolas a tratamientos con calor o con la aplicación de productos químicos, sin embargo ciertos virus han resistido a todas las pruebas de erradicación, lo cual hace necesario el uso de otros métodos(Pérez, 2009). El objetivo de la práctica fue obtener brotes, a partir de embriones extraídos de frutos de limones, cultivados in vitro en medio MS.
  2. 2. MATERIALES Y MÉTODOS RESULTADOS Preparación de la sala de siembra: El piso se desinfectó con kalipto, las cámaras de siembra se limpiaron con papel toalla estéril y Savlón. Los materiales usados en la siembra tales como: mecheros, pinzas bisturí, papel toalla, plástico, ligas, botellas de agua, etc. fueron introducidas previa esterilización, luego se prendió las lámparas UV de las cabinas de flujo durante 15min y en los siguientes 15 min se encendió el flujo de aire luego de apagar las lámparas. Después de una semana de la siembra, se evaluó la contaminación por hongos y bacterias, la oxidación y la geminación de los explantes. Se establecieron 3 escalas para la evaluación de los resultados como se indica en la tabla 1,2 y 3: Material vegetal:Se utilizómuestras de limón adquiridas en un mercado, se manejó un limón por persona. Contaminación por hongo y bacteria 0 No existe contaminación. 1 Poca contaminación. 2 Contaminación total. Finalizado los lavados, se realizó cortes profundos en el limón, para obtener las semillas, sin dañarlas. Se colocó aproximadamente 3 semillas por frasco de medio de cultivo. El medio utilizado fue el MS. Tabla 1.- Escala de germinación. Tabla 2.- Escala de contaminación por hongos y bacterias 0 1 2 Oxidación No oxidación Oxidación media Oxidación total Tabla 3.- Contaminación por hongo y bacteria 1 No No 2 No No 3 No Si 4 No SI Tabla 4.- Evaluación semanal de explantes de brotes. Siembra del material:Sé eliminó la corteza, se extrajolas semillas y se las colocó en el medio MS. Figura 1y 2.- Frasco 1 con el explante en desarrollo. Primera Semana. Nº brotes Oxidación Como se puede observar en la tabla 4 y en las figuras 1 y 2, dos de los explantes sembrados dieron resultados positivos, En el frasco 3 y 4 se observa oxidación. Contaminación (hongo o bacteria) Inmediatamente al término del lavado con cloro, se trasladó los explantes a la cámara de siembra y se realizó 3 lavados con agua estéril. 0 1 2 # frasco Se realizó lavados con agua corriente para remover impurezas y se preparó 1000 ml de una solución de detergente al 2% más 6 gotas de Tween, se sumergieron los limones en la solución poniéndola en agitación durante 20 minutos. Posterior a este tiempo se lavó los explantes, dos veces con agua destilada y una vez con agua estéril. Se eliminó el agua y se prosiguió a sumergir las muestras en 1000 ml de una solución de cloro al 5% más 6 gotas de Tween durante 10 minutos en agitación. Germinación No existe germinación Germinación media Germinación total 2 1 3 1
  3. 3. DISCUSIÓN En este estudio se buscó evaluar el porcentaje de germinación de las semillas de limón (Citrus limon), en el cual presentó un porcentaje bajo ya que perduro la dormancia de las semillas.de limón que se encuentra vivas pero en estado de latencia(Campbell, 2005). Referente a la contaminación, ninguna de las semillas dentro de los frascos tuvo presencia de hongos o de bacterias. Otro factor que pudo influir en la germinación de las semillas es la temperatura de incubación porque existe una acumulación de metabolitos secundarios en las semillas y por lo tanto su crecimiento está directamente asociados a la temperatura(Sinclair, 1984). CONCLUSIONES El método de desinfección fue agresivo debido a que la mitad de las semillas presento oxidación. La obtención de brotes a partir de embriones inmaduros, esposiblepor el bajo nivel de contaminación, aunque la respuesta de los brotes es lenta. Las semillas se desarrollan de manera lenta, pero sin cambios no previstos, debido a la ausencia de hormonas en el medio, RECOMENDACIONES Para mejorar el tiempo de germinación se podría agregar fitoreguladores en el medio. Cuando se maneje las semillas hay que cuidar de no maltratarlas, para que no se afecte su capacidad regenerativa. BIBLIOGRAFÍA Gómez, M., & Toro, J. (2007). Boletín Técnico de Biodiversidad: Manejo de las semillas y propagación de especies forestales. medellín: Corporación Autónoma Regional del Centro de Antioquia. López, J. (1997). Tratamientos pregerminativos. Medellín: Universidad Nacional de Colombia. Ospina, C., Hernández, J., Patiño, J., & Salazar, J. (2003). El Cedro Negro: una especie promisoria de la zona cafetera. Chichina-Caldas: Federación nacional de cafeteros de Colombia. Pérez, M. (2009). Enfermedades en las plantas: Organismos, Patógenos, Identificación y Diagnóstico. . Recuperado el 12 de 2013, de http://agricultura.uprm.edu/sea/cli nica/CLDIAEnfPlan.pdf Sinclair, W. (1984). The Biochemistry ans physiology of the lemon and other citrus fruits.California: universidad de California, División Agrícola, Reserva Natural.
  4. 4. CUESTIONARIO: 1. ¿Por qué considera Ud. Que el desarrollo del embrión cortado, es diferente del embrión intacto? Un embrión intacto además de permanecer aislado y estéril dentro del fruto posee elementos como nutrientes y fitohormonas que le permiten crecer de forma natural, un embrión cortado muestra un desarrollo diferente dado que al ser cortado y extraído se afecta la disponibilidad de las sustancias normales que lo rodean, hay que denotar que los embriones tienen un endospermo muy delicado que puede lastimarse al cortar el embrión afectando su capacidad de desarrollo(Sinclair, 1984). 2. Describa las razones para las variaciones de crecimiento. Una de las principales razones para la variación del crecimiento de los embriones se debe a que la semilla tiene latencia natural, la cual produce baja uniformidaden la germinación(Gómez & Toro, 2007). Otra razón asociada con la variación del crecimiento es la retención de inhibidores, los cuales estáncontenidos en la testa que es permeable alagua y semi o impermeable a algunos químicos o gases, la cual, además, ejerce resistenciamecánica contra el desarrollo del embrión(López, 1997), el grado de lignificación de la testaestá relacionado con la latencia que limitala cantidad de oxígeno dentro de la semilla,lo que lleva a la producción de sustanciasinhibidoras del crecimiento en los tejidos embriogénicos. También los altos contenidos de aceitesen los cotiledones, disminuyen la capacidady uniformidad de germinación, sobre todo encondiciones de alta temperatura(Ospina, Hernández, Patiño, & Salazar, 2003).

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