Meristemos cartucho

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Se estudió la obtención de plantas libres de enfermedades mediante el cultivo de meristemos de Zantedeschia aethiopica, utilizando explantes de ápices, cultivado en medio Murashige y Skoog, suplementado con AIA, KIN y carbón activado.
El uso de meristemos se debe a que estos no presentan virus ni patógenos, además debido a que las células meristemáticas no son diferenciadas, se pudo observar resultados en un corto plazo, los dos explantes sembrados dieron lugar a brotes en una semana.

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Meristemos cartucho

  1. 1. OBTENCIÓN DE PLANTAS LIBRES DE ENFERMEDADES MEDIANTE EL CULTIVO DE MERISTEMOS DE CARTUCHO (Zantedeschia aethiopica). Alexandra Chasiquiza Cultivo de Tejidos. Ingeniería en Biotecnología. Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE. Sangolquí-Ecuador Noviembre 2013 RESUMEN Se estudió la obtención de plantas libres de enfermedades mediante el cultivo de meristemos de Zantedeschia aethiopica, utilizando explantes de ápices, cultivado en medio Murashige y Skoog, suplementado con AIA, KIN y carbón activado. El uso de meristemos se debe a que estos no presentan virus ni patógenos, además debido a que las células meristemáticas no son diferenciadas, se pudo observar resultados en un corto plazo, los dos explantes sembrados dieron lugar a brotesen una semana. Palabras Clave: meristemos, virus, plantas sanas. ABSTRACT Studied the production of disease-free plants by meristem culture of Zantedeschia aethiopica, using apex explants, cultured on Murashige and Skoog mediumsupplemented with IAA, KIN and activated carbon. Meristems use is that these pathogens have no virus or also because the nondifferentiated meristematic cells could be observed in the short term results, the two explants were seeded in outbreaks in a week. Keywords: meristems, viruses, healthy plants. INTRODUCCIÓN Muchos cultivos vegetales contienen virus sistémicos, los cuales afectan su funcionamiento y abaten su rendimiento, representando grandes pérdidas económicas para los agricultores, por tanto es deseable la producción de plantas libres de virus. En muchas especies se puede lograr plantas sanas sometiéndolas a tratamientos con calor o con la aplicación de productos químicos, sin embargo ciertos virus han resistido a todas las pruebas de erradicación, lo cual hace necesario el uso de otros métodos (Pérez, 2009). Los meristemos están compuestos por células no diferenciadas que se dividen activamente, sugiriéndose varias hipótesis respecto de la ausencia de virus en esta zona. Una primera hipótesis explicaría la ausencia de virus en el meristemo por problemas de transporte de los virus, así si estos se mueven por el sistema vascular de la planta, como los vasos no llegan al meristemo, el virus no podría alcanzarlo, e incluso si el virus fuera
  2. 2. capaz de invadir o moverse de célula a célula, la velocidad de avance de los virus sería inferior a la de crecimiento del meristemo e impediría su invasión; otras hipótesis proponen una inhibición de la replicación de los virus en la zona meristemática debido a la alta tasa metabólica del meristemo y a la elevada concentración de reguladores en esa zona. Aunque el motivo de la ausencia de virus en el meristemo no está totalmente esclarecido, estas hipótesis o una conjunción de las mismas parecen ser bastante correctas. (López et al, 2013). La razón principal por la cual las plantas son susceptibles a los virus, es que no presentan síntomas cuando estos invaden los tejidos(Afanor, 2005). El objetivo de la presente práctica es la obtención de plantas libres de enfermedades mediante el cultivo de meristemos de cartucho (zantedeschia aethiopica) en medio MS enriquecido con AIA y KIN, con guía en el “Manual de Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales”. solución de detergente al 2% más tres gotas de tween 20 durante 20min, se enjuagó tres veces con agua destilada yse sumergió las muestras en una solución de cloro al 2.5% más 3 gotas de tween 20 durante 10min en agitación, se enjuagó nuevamente tres veces con agua destilada (Jadán 2012). Se trasladó las muestras sumergidas en cloro a la cámara de flujo laminar, dentro de la misma se realizó tres lavados con agua estéril previo antes de proceder a la siembra (Jadán, 2012). Siembra del material:Sé eliminó el material de la periferia dañado por la desinfección, luego se quitó las capas de tejido hasta llegar al meristemo, se colocó los explantes en el medio MS enriquecido con KIN y AIA y se selló el mismo para incubación en luz (Jadán 2012). El proceso anteriormente detallado se llevó a cabo en condiciones de total asepsia, procurando evitar contaminaciones. RESULTADOS MATERIALES Y MÉTODOS Preparación de la sala de siembra: El piso se desinfectó con kalipto, las cámaras de siembra se limpiaron con papel toalla estéril y Savlón. Los materiales usados en la siembra tales como: mecheros, pinzas bisturí, papel toalla, plástico, ligas, botellas de agua, etc. fueron introducidas previa esterilización, luego se prendió las lámparas UV de las cabinas de flujo durante 15min y en los siguientes 15 min se encendió el flujo de aire luego de apagar las lámparas (Jadán, 2012). Material vegetal:Se usó ápices de cartucho. La desinfección inició con un lavado en agua, con el fin de retirar todas impurezas, presentes en las muestras, después se colocó las muestras vegetales en agitación con una Los resultados se presentan en las siguientes fotografías y tablas. Como se puede observar en la tabla 1 y en las figuras 1 y 2 los explantes sembrados dieron resultados positivos, el explante 1 sufrió oxidación, mientras que ambos explantes presentan brotes y raíces. Tabla 1. Evaluación semanal de explantes de meristemo de cartucho cultivados in vitro Fecha de siembra (30/10) # frasco Explante 1 2 Me1 Me2 Contaminación (hongo o bacteria) No No Nº brotes Long. (mm) 1 1 20 25 Me: Meristemo Fecha de evalua-ción (06/11) Otras características Oxidación -
  3. 3. 1 2 2 Fig.2Frasco 2 con el explante en desarrollo. Primera Semana. Vista Lateral (1), vista superior (2). En rojo se muestra la raíz formada DISCUSIÓN Fig.1 Frasco 1 con el explante en desarrollo. Primera Semana. Vista Lateral (1), vista superior (2). En rojo se muestra la raíz formada 1 Gómez (2007) argumenta que la técnica de cultivo de meristemos permite la obtención de plantas libres de patógenos, en un tiempo reducido debido a la no diferenciación de sus células, en concordancia con lo expuesto por el autor, en la primera semana de evaluación se pudo observar la formación de brotes, como se muestra en las figuras 1 y 2, además según Martínez (2008), una concentración superior de citoquininas, dará lugar a la formación de brotes mientras que un cuidadoso equilibrio de los reguladores de crecimiento producirá raíces y brotes, y por lo tanto, una plantita incipiente, en las figuras mencionadas anteriormente se puede observar también la formación de raíces debido al uso de la auxina AIA. Según Roca (1993), el empleo de sustancias antioxidantes como el carbón activado, incorporado al medio, ha mostrado ser de utilidad, posiblemente por absorber metabolitos tóxicos que podría matar a los explantes, como se puede observar en la fig.1 el explante sufrió oxidación, sin embargo se obtuvo resultados positivos gracias a la presencia de carbón activado en el medio.
  4. 4. CONCLUSIONES El cultivo de meristemos permite la obtención de plantas libres de enfermedades, debido a la ausencia de microorganismos y virus dentro de este tejido. Los meristemos están formados por células no diferenciadas, lo cual junto con las concentraciones adecuadas de reguladores de crecimiento permiten una rápida obtención de brotes. Al quitar las capas de tejido, es importante hacerlo con sumo cuidado, ya que el daño del meristemo ocasiona que las células del explantes sean incapaces de dividirse evitando la obtención de brotes. Se recomienda el uso de un antioxidante en el medio de cultivo, como el carbón activado, puesto que los explantes tienden a oxidarse rápidamente. BIBLIOGRAFÍA Afanador, A. 2005. Propagación in vitro a partir de meristemos de cinco variedades comerciales de Dianthus caryophyllus. Bogotá. Recuperado el: 10/11/2013. Disponible en: http://www.javeriana.edu.co/biblos/t esis/ciencias/tesis68.pdf Gómez, L. 2007. Cultivo in vitro. Caracas. Recuperado el: 09/11/2013. Disponible en: http://www.slideshare.net/mariasalo mev/cultivo-de-meristemos Jadán, M., 2012, Manual de Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales, Escuela Politécnica del Ejército, Práctica N°3: Muestreo del material vegetal y métodos de desinfección en cultivo in vitro. López E., Cazorla M. Saneamiento del material vegetal: cultivo de meristemos. Recuperado el: 11/11/2013. Disponible en:http://www.encuentros.uma.es/en cuentros41/meristemos.html. Martínez, R. 2008. Micropropagación. Buenos Aires. Recuperado el: 09/11/2013. Disponible en: http://www.redalyc.org/pdf/1932/19 3215825004.pdf Pérez M. 2009, Enfermedades en las plantas: Organismos, Patógenos, Identificación y Diagnóstico. Recuperado el: 10/11/2013. Disponible en:http://agricultura.uprm.edu/sea/cl inica/CLDIAEnfPlan.pdf Roca, W., 1993. Cultivo de tejidos en la agricultura. Fundamentos y aplicaciones, Cali, Centro Internacional de Agricultura tropical.

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