Inmunohistoquimica

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Sesion correspondiente al dia 28 de julio de 2010.

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Inmunohistoquimica

  1. 1. “Inmunohistoquímica aplicada al diagnostico histopatológico Conceptos básicos” Dr. César Lara Torres Departamento de Patología COE-ISSEMYM
  2. 2. Manuel Toussaint Vargas Gac Med Mex 1898;373-378 El uso del microscopio en el diagnóstico de enfermedades ha adquirido en nuestros días tal incremento, que no existe en el arsenal del médico otro recurso que tenga tan variada y múltiples aplicaciones… Unas veces nos revela , al primer golpe de vista, el agente patógeno de una enfermedad; otras hace accesible a nuestra mirada el mecanismo íntimo de un estado patológico… preciosos elementos para formular pronóstico y conducir tratamiento… 1898
  3. 3. Técnicas adicionales de diagnóstico • Tinciones especiales (PAS, Masson, ZN) • Cultivo de tejidos • Microscopía electrónica • Inmunofluorescencia • Inmunohistoquímica • Biología molecular
  4. 4. Primer antecedente: inmnofluorescencia Albert H Coons ,Hugh Creech, Norman Jones y Ernst Berlinier, en la Universidad de Harvard en 1941.
  5. 5. Cesar Milstein Georges JF Köhler Niels K Jerne Cambridge UK Basel Institute
  6. 6. PREMIO NOBEL EN MEDICINA 1984 Cesar Milstein GJF Köhler Niels K Jerne
  7. 7. Inmunización Célula Tumoral Cultivo de tejidos Hibridomas
  8. 8. Tipos de proteínas que se pueden detectar ? • Proteínas estructurales – Citoesqueleto (FI – CK, GFAP) – Uniones intercelulares (E-cadherina, B- catenina) • Proteínas asociadas a vesículas secretoras – Cromogranina A, sinaptofisina, CD68 • Receptores – HER2, EGFR1, RE, RP, • Factores de transcripción /ciclo celular – P53, Ki67, TTF1, PAX5, Miogenina
  9. 9. Aplicaciones generales • Clasificación de neoplasias linfoides/hematológicas • Identificación de primario desconocido • Identificación de sobre-expresión de proteínas asociadas a translocaciones • Identificación de blancos terapéuticos • Infecciones • Caracterización de substancias extracelulares
  10. 10. Anticuerpos epiteliales CKAE1/3 Antígeno Tiroglobulina carcinoembrionario Receptores de CK5/6 CK8 estrógeno Receptores de CK7 Hepar-1 progesterona P53 CD20 Her2/neu Calcitonina Ki67 E-cadherina Antígeno Epitelial de CK34BE12 Membrana Antígeno prostático TTF-1 CMV específico Racemasa p504 Calrretinina HPV
  11. 11. Linfoides CD45 CD68 (KP-1) ALK-1 CD3 CD34 Bcl-6 CD20 CD138 LMP1 (EBV) CD43 CD1a Mieloperoxidasa CD15 CD21 PAX5 CD30 Kappa CD23 Lambda CD10 Bcl-2 CD56 Ciclina D1
  12. 12. No Epiteliales CD99 S-100 PLAP GFAP CD117 HMB-45 Inhibina alfa PBM CD31 Mart-1 HCG Neurofilamentos Sinaptofisina Alfa- Enolasa fetoproteína neuronal Vimentina Cromogranina A Desmina Actina músculo liso Actina musculo específica Miogenina
  13. 13. Anticuerpo primario 1) Anticuerpo secundario 2) Estreptavidina Fosfatasa alcalina 3)
  14. 14. • Obtención de la muestra • Preservación (formol pH 7.4) • Técnica histológica (deshidratación- parafina) • Recuperación antigénica • Bloqueo de substancias endógenas (perox) • Aplicación de anticuerpos y cromógenos • Análisis histológico y diagnóstico
  15. 15. Estandarización • Selección de controles • Bloqueadores (tipo y dilucion) • Anticuerpo primario (poli, mono, ratón, conejo, cabra) • Anticuerpos secundarios (caballo, conejo, cabra) • Amplificadores de señal (ABC, polímeros) • Tipo de cromógeno (DAB, FALK)
  16. 16. E-Cadherina HHV-8 GFAP Her2/ neu
  17. 17. Anti-Mitocondrias Oncocitoma Renal Diaminobencidina Nueva Fuscina
  18. 18. HMB-45
  19. 19. DOBLE INMUNOMARCACION Linfoma B rico en células T/H CD3 / CD20
  20. 20. Oscar /CK5/6 Carcinoma Basal-Like
  21. 21. INMUNOHISTOQUIMICA • Especificidad / Sensibilidad • Aplicación en material de rutina • Correlación con la morfología • Compatible con fijadores de rutina • Material descalcificado • Material congelado
  22. 22. MARCACIÓN NUCLEAR CDX2 Ki-67 PAX-5
  23. 23. MARCACIÓN MEMBRANA Distrofina E-Cadherina CD30 Membrana y Golgi
  24. 24. MARCACIÓN CITOPLASMICA Mitocondrias Citoplasma y núcleo S-100 CD68
  25. 25. INMUNOHISTOQUIMICA APLICADA AL DIAGNOSTICO HISTOPATOLÓGICO
  26. 26. Q-1028-10 • H 44 años tumor de base de lengua • Dx: Neoplasia maligna poco diferenciada (carcinoma poco diferenciado vs linfoma)
  27. 27. Neoplasia maligna poco diferenciada Sarcoma Melanoma Varios S-100, HMB45, Melan-A Linfoma Carcinoma CD20 CKAE1/3 CD3
  28. 28. CKAE1/3
  29. 29. CD3
  30. 30. CD20
  31. 31. Q-1028-10 • Biopsia de tumor de base de lengua • Linfoma No Hodgkin difuso de células grandes con inmunofenotipo B (CD20)
  32. 32. Biopsia de Estómago. Gastritis xantomatosa vs Adeno Ca. poco dif Macrógafos? o Ca. con moco? CD68 vs Citoquertina
  33. 33. Queratina (AE1-3) Dx: Adenocarcinoma poco diferenciado
  34. 34. Mujer de 67 años de edad con lesión en duodeno. ¿Ca. Poco diferenciado ?
  35. 35. HMB-45 CK AE1-3
  36. 36. Tumores Caracterizados por Inmunohistoquímica • Tumores del estroma del • Tumor rabdoide tubo digestivo • Tumor fibroso solitario • Tumor desmoplásico • Tumor de células intra abdominal granulares. • Linfomas • Neuroma Apendicular • TNEP/ Sarcoma de • Tumor adenomatoide Ewing
  37. 37. Nódulo Gástrico
  38. 38. Actina CD34 CD-117 (c-kit)
  39. 39. “Tumor de Células Redondas, Pequeñas y Azules” • Linfoma • TNEP/ Sarcoma de Ewing • Rabdomiosarcoma
  40. 40. Tumor de Células Redondas, Pequeñas y Azules. • Linfoma CD45 / CD20 / CD3 • TNEP/ Sarc de Ewing CD99 / CD56 / Sinaptofisina • Rabdomiosarcoma Desmina / Miogenina / MyoD1
  41. 41. CD45 INMUNOFENOTIPO CD45 Positivo CD20 Negativo CD3 Positivo TdT Positivo CD10 Positivo Dx: Linfoma linfoblástico de precursores T CD10 TdT
  42. 42. INMUNOHISTOQUIMICA EN LA METASTASIS DEL PRIMARIO DESCONOCIDO
  43. 43. Nódulo pulmonar en una mujer de 45 años de edad Queratina Positivo = carcinoma
  44. 44. TIROGLOBULINA Dx. Metastasis de Ca. Papilar del tiroides
  45. 45. QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+ Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de Ca mucinosos Ca Escamoso células pequeñas) Merkel de ovario Ca Neuroendocríno Ca Ca Gástrico 60% Carcinoide Bronquioloalveolar pulmonar Ca seroso de Ovario Ca Endometrial Mesotelioma
  46. 46. Tumor Pulmonar CK7 CK20 CDX-2
  47. 47. QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+ Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de Ca mucinosos Ca Escamoso células pequeñas) Merkel de ovario Ca Neuroendocríno Ca Ca Gástrico 60% Carcinoide Bronquioloalveolar pulmonar Ca seroso de Ovario Ca Endometrial Mesotelioma
  48. 48. CK7 (-) Hombre de 56 años de con lesiones lítica en vértebras AE1-3 CK20 (-)
  49. 49. QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+ Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de Ca Ca Escamoso células pequeñas) Merkel mucinosos de Ca Neuroendocríno Ca Ca Gástrico 60% ovario Carcinoide Bronquioloalveolar pulmonar Ca seroso de Ovario Ca Endometrial Mesotelioma
  50. 50. CK7 PSA CK20
  51. 51. Ganglio linfático axilar, mujer de 68 CK7 años CK20
  52. 52. QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido Q7 + / Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+ Q20+ Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de Ca Ca Escamoso células pequeñas) Merkel mucinosos Ca Neuroendocríno Ca Ca Gástrico 60% de ovario Carcinoide Bronquioloalveolar pulmonar Ca seroso de Ovario Ca Endometrial Mesotelioma
  53. 53. CK7 RE CK20
  54. 54. IHQ. Predicción al Tx Her2/neu Herceptin CD117 GIST Gleevec LMC VEGF Avastin CD20 EGFR Iresa Tarceva Rituximab
  55. 55. Resumen • Proceso de estandarización es muy importante • Selección de controles adecuados • Personal entrenado – constante revisión y ajuste • Saber por qué, para qué • Correlación morfológica imprescindible IHQ es una técnica complementaria
  56. 56. INMUNOHISTOQUIMICA CON FACTOR PRONÓSTICO Y PREDICTIVO
  57. 57. Johns Hopkins 1884 William Halsted
  58. 58. Factores Pronósticos en Carcinoma de la Glándula Mamaria MORFOLOGÍA • Pronóstica favorable: Ca Tubular, Ca Cribiforme, Ca Medular Ca. Mucinoso, Ca Papilar, Ca Adenoideo quístico, Ca Juvenil secretor • Pronóstico desfavorable Ca de células con anillo de sello, Ca Escamoso, Ca metaplásico, Ca neuroendocríno
  59. 59. Inmunohistoquímica como factor pronóstico y predictivo • Receptores de Estrógenos y Progesterona • Gen supresor p53 • Ki-67 • Her2/neu (cerbB2) • Angiogénesis • Fascina / Bcl-2 / Ciclina D1 / otros
  60. 60. RE RP RESPUESTA A TX. HORMONAL RECEPTORES RESPUESTA A TX RE+ /RP+ 75% RE+ / RP+/- 50% RE+ / RP- 25% RE- / RP- 10-25%
  61. 61. Estrógeno E Prot Membrana * E E+RE+DNA c-myc, c-jun,c-fos RNA m Ribosomas Factores de crecimiento EGF / IGF
  62. 62. Estrógeno DISMINUCIO Prot Membrana N • Síntesis de DNA • Timidina cinasa DNA Polimerasa Anti- • • Proliferación celular estrógeno * E+RE+DNA c-myc, c-jun,c-fos RNA m Ribosomas Factores de crecimiento EGF / IGF
  63. 63. HER2/neu Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 Gen neu (ratón / neuroblastoma) • Proteína transmembrana 185 kD / Tirosina-cinasa cromosoma 17q21 • Factor de crecimiento Epidérmico : - EGFR (Her1) / Her2 / Her3 / Her4 • Movilidad, adhesión celular
  64. 64. HERCEPTIN Baselga J, Tripathy D, Mendelsohn J, Baughman S, Benz CC, Dantis L, Sklarin NT, Seidman AD, Hudis CA, Moore J, Rosen PP, Twaddell T, Henderson IC, Norton L. Phase II study of weekly intravenous recombinant humanized anti-p185HER2 monoclonal antibody in patients with HER2/neu-overexpressing metastatic breast cancer. J Clin Oncol 1996 Mar;14(3):737-44 MSKCC
  65. 65. Lab Invest 2007;87;403-408
  66. 66. Biopsia nodulo cervial en paciente de 25 años
  67. 67. • La paciente mas probablemente es una mujer y tiene un carcinoma metástasico • El tumor primario está localizado en la tiroides, lo mas probable en el lóbulo ipsilateral y muy posiblemente sea pequeño y no detectable clínicamente pero… créanme ahí está! • El tumor está formado por células foliculares, y seguramente hay tumor en diversos focos de la glándula y si la paciente recibió radioterapia de niña, podemos asumir una relación causal con el tumor.
  68. 68. • Otros ganglios cervicales, muy probablemente estén afectados y,… cuidado con el pulmón de esta paciente por que es en este sitio donde se pueden encontrar metástasis • Estas células tienen la capacidad de incorpora yodo por lo que si se encontrara algún otro foco tumoral, con una dosis grande de yodo radioacivo, puede haber regresión. • Y, a pesar de que estas células son malignas, muy probablemente la paciente estará viva y bien los siguientes 10 años.
  69. 69. Biopsia nodulo cervial en paciente de 25 años Metástasis de ca papilar del tiroides
  70. 70. Manuel Toussaint Vargas Gac Med Mex 1898;373-378 El uso del microscopio en el diagnóstico de enfermedades ha adquirido en nuestros días tal incremento, que no existe en el arsenal del médico otro recurso que tenga tan variada y múltiples aplicaciones… Unas veces nos revela , al primer golpe de vista, el agente patógeno de una enfermedad; otras hace accesible a nuestra mirada el mecanismo íntimo de un estado patológico… preciosos elementos para formular pronóstico y conducir tratamiento… 1898
  71. 71. QUERATINAS 7/20 Metástasis de primario desconocido Q7 + / 20+ Q7- / Q20- Q7+ / Q20- Q7- / Q20+ Ca Urotelial Ca Hepatocelular Ca Mamario Ca de Colon Ca Páncreas Ca Próstata Ca Pulmón ( No Ca de célula de Ca mucinosos Ca Escamoso células pequeñas) Merkel de ovario Ca Neuroendocríno Ca (Sinaptofisina) Carcinoide Bronquioloalveolar Ca Gástrico 60% pulmonar Ca seroso de Ovario Ca Endometrial Mesotelioma
  72. 72. Cortesía Dr. Schnider
  73. 73. Diagnóstico diferencial Linfoma cutáneo vs Células de Merkel
  74. 74. Diagnóstico diferencial Linfoma cutáneo vs. Células de Merkel CD45 QUERATINA Linfoma + - Ca de células de - + Merkel
  75. 75. CK 20 AE1-3 Cromogranina A Sinaptofisina
  76. 76. INMUNOHISTOQUÍMICA Juan Rosai
  77. 77. RE Miogenina
  78. 78. Mesotelioma Q7 Q5/6 Trombomodulina
  79. 79. Líquido Cerfalorraquídeo CD10 Leucémia Linfoblástica Aguda TdT

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