Cromatorafia de gases

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Cromatorafia de gases

  1. 1. ANALISIS INSTRUMENTALCromatografía de Gases
  2. 2. CROMATOGRAFIA POR EXCLUSIÓN DETAMAÑO Llamada también cromatografía molecular o en gel Método en el que Fase estacionaria = malla o criba molecular por el cual las moléculas se separan según su tamaño, forma y peso. Son hidrofílicas = son capaces de absorber agua e incharse
  3. 3.  Los de mayor tamaño no caben en el poro y pasan por entre las esferas y llegan primero, una vez introducidas en el gel, las moléculas mas pequeñas tardaran mas en salir de la red porosa; quedaran retenidas (+) tiempo. Las de mayor tamaño, al no caber en el poro, pasan entre las esferas y eluyen las primeras; a (+) tamaño (+) velocidad a (-) tamaño (-) velocidad Permite separar, proteínas, enzimas, péptidos, ácidos nucleicos. Hormonas, etc.
  4. 4. MATERIALES MAS USADOS PARA LACROMATOGRAFIA POR EXCLUSION DE TAMAÑO
  5. 5. Cromatografía de intercambio iónico•Se usan principalmente para separarsustancias inorgánicas.•Intercambio de iones en la fase estacionaria.•Fase estacionaria= formada por perlas depoliestireno con divinilbenceno
  6. 6. Resinas intercambiadoras de cationes Contienen grupos funcionales ácidos unidos al anillo aromático de la resina Tipo de Grupo funcional Nombre comercial intercambiador intercambiadorCatiónico Acido sulfónico Dowex a 50; Amberliteh IR120;Ácido fuerte IonacC CGC-240; Rexynd 101; Permutite QÁcido débil Ácido carboxílico Amberlite IRC 50; Ionac CGC-270; Rexyn 102; Permutit H-70Aniónico Ion amonio cuaternario Dowex 1; Amberlite IRA 400;Base fuerte Ionac AGA-542: Rexyn 201; Permutit S-1Base débil Grupo amino Dowex 3; Amberlite IR 45; Ionac AGA-316; Rexyn 203; Permutit W
  7. 7. Resinas intercambiadoras de cationes Capacidad de intercambio de una resina es la cantidad total de H sustituible por unidad de peso o de volumen. Capacidad de intercambio iónico afecta la retención del soluto, mayor retención mejor resolución. Intercambiadoras de cationes se suministran en forma de H, y se convierten al ion sodio. Las resinas ácidos fuertes se usan en la mayor parte de las separaciones. Las ácidas débiles se prefieren para proteínas y péptidos nRzSO₃ ¯H⁺ +Mⁿ⁺¹ (RzSO₃)η M+ nH⁺nRzCO₂ ¯ H⁺ +Mⁿ⁺¹ (RzCO₂)η M+ nH⁺
  8. 8. Resinas intercambiadoras de aniones Contiene anión hidroxilo. Reacciones de intercambio: nRzNR₃⁺OH¯ +Aⁿ¯ (RzNR₃)η A+ nOH¯ nRzNH₃⁺OH¯ +Aⁿ¯ (RzNH₃)η A+ nOH¯ Resinas básicas fuertes (pH 0-12) son las que se aplican en general. L as básicas débiles (pH 0-9) se usan para separar ácidos fuertes. ENTRECRUZAMIENTO <Entrecruzamiento; <diferencia de selectividad en una resina Se representa en forma de % de divinilbenceno. Entrecruzamiento: < rigidez, >hinchamiento, porosidad y solubilidad de una resina.
  9. 9. Efecto del pH: separación de aminoácidos Las formas iónicas de las sustancias son influenciadas por el pH de la solución efluente. Los aminoácidos pueden tener carga positiva o negativa o ser neutros ( en su punto isoeléctrico). Estas tres formas se pueden separar con una combinación de resinas intercambiadora de cationes y aniones. Para los aminoácidos anfóteros existen 3 formas de separación:  La forma Zwitterion; por el punto isoeléctrico  Moore y Stein  Analizadores automáticos de aminoácidos.
  10. 10. Cromatografía iónica.La aplicación de las técnicasde HPLC a la cromatografía de intercambio iónico se llama Cromatografía iónica. La cromatografía iónica es la forma de alto rendimiento para la cromatografía de intercambio iónico.
  11. 11. En 1970, William Bauman,sugirió una forma de eliminarel eluyente de fondo con una segunda columna de intercambio iónicopermitiendo así la detección de los iones de analito con un detector muy sensible (micromhos). Esta segunda columna se llama columna supresora. Esta columna remueve los iones del eluyente e intercambia los iones del analito por cationes u aniones, por lo que se puede usar un detector de conductividad de alta sensibilidad.
  12. 12. En la cromatografía iónica seusan resinas intercambiadoras débiles, aunque también se usan fuentes.
  13. 13. Los aniones como F-, Cl-, Br-, así como los ácidos orgánicos y sussales, se determinan con facilidad en cuestión de minutos hasta concentraciones de partes por millón o menos.
  14. 14. CROMATOGRAFÍA DE CAPADELGADA (TLC)  Es la forma plana, que se aplica en el cribado a gran escala para análisis cuantitativo. (Análisis cualitativo).  La fase estacionaria es una capa delgada de adsorbente finamente dividido, soportado sobre una capa de vidrio o de aluminio, o sobre una banda de plástico.  Los sólidos que se usan en CLC, deben de ser un aglutinante adecuado para tener buena adherencia a la placa.
  15. 15. Disposición para la cromatografía de capa delgada. Tapa de la cámara Cámara Línea con lápiz que Puntos de marca el lugar deaplicación con la los puntos de muestra aplicación Eluyente
  16. 16. Desarrollo del cromatograma1. Trazar una raya delgada con un lápiz que cruce la placa a unos cm arriba del fondo.2. Se practican las manchas gota a gota, para referencia del Rf. (separación máxima y mínimo arrastre).3. Con una pistola de aire caliente evaporar el disolvente después de cada gota.4. Colocar en una cámara cerrada a presión, para evitar evaporación.5. Duración de 10 min a 1 hr. (dependerá de la complejidad de la mezcla de solutos a separar).Ventaja:  Se puede tener mayor poder de separación usando la cromatografía bidimensional de capa delgada , en donde se usa una placa grande y la muestra se deposita en una de sus esquinas inferiores, después del desarrollo la capa se gira 90° y se sigue desarrollando con otros disolventes.
  17. 17. Detección de las manchas Solutos fluorescentes (compuestos orgánicos). Iluminar con una lámpara de luz ultravioleta. Rociar con ácido sulfhídrico, hasta quemar y desarrollar manchas negras. Manchas incoloras o no fluorescentes. Exponer la placa a vapores de Yodo, que producen colores. Después de identificar las manchas, se lavan y se raspan los solutos, para identificar cuantitativamente con un micrométodo.
  18. 18. Fases estacionarias para lacromatografía de capa delgada Polvo finamente dividido (10-50μm). Adsorbentes, son las que se usan con mayor frecuencia, por ejemplo: gel de sílice, alúmina y celulosa pulverizada. Líquidas, pueden ser preparadas para separación mediante cromatografía de partición líquido-líquido (Agua sobre gel sílice). Resinas de intercambio iónico (40 a 80 μm), como por ejemplo: intercambiadora de cationes Dowex 50 W (ácida), y la intercambiadora de aniones Dowex 1 (básica).
  19. 19. Fases móviles paracromatografía de capa delgada En la cromatografía de adsorción, el poder eluyente de los disolventes aumenta al incrementar su polaridad. (Hexano a acetona a alcohol a agua). Se debe usar un disolvente o a lo mucho tres. Los disolventes deben ser de gran pureza.
  20. 20. Mediciones cuantitativas Para la cromatografía bidimensional de capa delgada se mide ópticamente la densidad de las manchas. Se mide la transmitancia de la luz que atraviesa la capa, o la reflectancia de la luz que se atenúa por el color del analito. Se mide la intensidad de fluorescencia al iluminar con radiación ultravioleta. CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA DE ALTA EFICIENCIA (HPTLC) Se usan partículas más finas para tener separaciones rápidas y eficientes usando muestras más pequeñas.

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