Silenciamiento de genes mediante rna de interferencia

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Silenciamiento de genes mediante rna de interferencia

  1. 1. Silenciamiento de genes mediante RNA de interferencia 17 | 06 | 2011 Nicole Salgado | Silvia Lazzarino
  2. 2. CONTENIDOS .1. Introducción .2. Mecanismo .3. Función .4. Aplicación .5. Análisis
  3. 3. Un poco de historia sobre los RNA de interferencia..INTRODUCCIÓN Trabajo de botánicos con petunias. Se descubre un fenómeno 1990 de silenciamiento que fue llamado “co-supresión”. Trabajos el hongo Neurospora crassa. Se descubre un 1992 fenómeno equivalente al de co-supresion que fue llamado “quelling”. Andrew Fire y Craig Mello trabajaron el silenciamiento de 1998 genes en C.elegans, definiendo el rol del RNA de interferencia (iRNA). Tomas Tuschl descubre el uso directo de los siRNA, lo que 2000 permite su aplicación en mamíferos. Andrew Fire y Craig Mello ganan el premio Nobel de medicina 2006 por descubrir el silenciamiento de genes por iRNA.
  4. 4. INTRODUCCIÓN Este mecanismo fue Caenorhabditis elegans observado por primera vez en 1990, en plantas (Petunias). Más tarde se observó en: - Caenorhabditis elegans -Neurospora crassa -- Drosophila Melanogaster Drosophila Melanogaster Luego se observó en mamíferos Neurospora crassa
  5. 5. MECANISMO
  6. 6. MECANISMO ¿Qué es el RNA de interferencia y cuál es su mecanismo de acción? Video Nature Reviews: http://www.nature.com/focus/rnai/animations/index.html
  7. 7. MECANISMO RNA de interferencia A B C D A B C D siRNA se siRNA se acopla RISC iRNA se une al RNAm Se evita introduce (RNA induced silencing complex) Slicer Ago 2 corta el traducción y se en la célula y se le remueve la hebra RNAm silencia el gen sentido
  8. 8. ¿Cuál es el rol natural del iRNA en la célula? Este mecanismo actúa como un sistema inmune PROTECCIÓNFUNCIÓN a nivel celular. Este sistema regula la expresión de genes, REGULACIÓN especialmente en el desarrollo.
  9. 9. Usos del iRNA como metodología experimental…APLICACIÓN
  10. 10. Usos del iRNA como metodología experimental…APLICACIÓN FIGURA 1 FIGURA 2 Análisis de la expresión de b- Efecto de la supresión de niveles de arrestina en células HEK293 B-arrestina mediada por siRNA en la transfectadas con siRNA. internalización del receptor 7MS.
  11. 11. Aspectos a considerar sobre la metodología experimental… Técnica de fácil uso. VENTAJAS Gran variedad de mecanismos efectores.ANÁLISIS Existen programas gratuitos para el diseño de iRNA. Producción de siRNA ampliamente extendida. DESVENTAJAS El silenciamiento no es 100% completo. Puede haber silenciamiento inespecífico. Es necesario utilizar un mecanismo para que el iRNA ingrese a la célula blanco.
  12. 12. Otras proyecciones al uso de los iRNA…APLICACIÓN Eliminar de la célula Anular la función Interferir en la los elementos de proteínas que expresión de esenciales para un estén involucradas genes patógeno. en enfermedades. patógenos.
  13. 13. FIN
  14. 14. BIBLIOGRAFÍA • Maria Fernanda Correa, Haroution Adjounian, Sarkis Horacio, “Silenciamiento de genes mediante RNA de interferencia, consideraciones del mecanismo y diseño de los sistemas efectores”, Archivos de farmacología y terapéutica, 2007. • www.nature.com - RNA interference • “Biotecnología, RNA de interferencia: el silencio de los genes”, Tomás López, Daniela Silva, Susana López y Carlos Arias. • Seungkirl Ahn, Christopher D. Nelson, Tiffany Runyan Garrison, William E. Miller, and Robert J., “Desensitization, internalization, and signaling functions of !-arrestins demonstrated by RNA interference” PNAS, 2002.
  15. 15. Sistemas efectoresANEXO shRNA

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