Successfully reported this slideshow.
We use your LinkedIn profile and activity data to personalize ads and to show you more relevant ads. You can change your ad preferences anytime.

Neuroprotección, neurogénesis y neurorrescate

2,712 views

Published on

Published in: Travel, Sports
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

Neuroprotección, neurogénesis y neurorrescate

  1. 1. NEUROGÉNESIS, NEUROPROTECCIÓN Y NEURORRESCATE Enrike G. Argandoña Tarija 2010 sábado 29 de mayo de 2010
  2. 2. Patología SNC TCE Ictus Tumores Patologías neurodegenerativas sábado 29 de mayo de 2010
  3. 3. Patología SNC TCE Ictus Tumores Patologías neurodegenerativas Vascularización sábado 29 de mayo de 2010
  4. 4. Neuroprotección mediante enriquecimiento ambiental Patologías neurodegenerativas Parkinson Alzheimer Hungtinton Ictus TCE sábado 29 de mayo de 2010
  5. 5. NEUROGÉNESIS Altman (1965), neurogenesis en ratas Eriksson (1998), hipocampo humano Gould (1999), neocortex primates adultos sábado 29 de mayo de 2010
  6. 6. NEUROGÉNESIS Bulbo olfatorio Giro dentado áreas corticales? Sustancia negra? 2 regiones fundamentales: ZSV y ZSG del giro dentado sábado 29 de mayo de 2010
  7. 7. TIPOS sarrollo embrionario tardío y posnatal, las células de la glía ra- dial generan astrocitos [24,25] y, en algunas especies, la glía radial mantiene sus propiedades precursoras aun en el animal CELULARES adulto [26]. En este contexto, Merkle et al [27] demostraron que, en el adulto, las células de la glía radial provienen de las células progenitoras de la ZSV. Los estudios realizados sobre el origen de las neuronas cor- ticales apuntan hacia dos direcciones. La primera sugiere que son las células de la ZSV las que las originan, como sucede con las nuevas neuronas granulares y periglomerulares del bulbo celulas troncales (multipotentes) y olfatorio [28,29]. La segunda teoría se basa en el comporta- miento deCPN (célulasque presentan las células de la glía células troncales precursoras radial, las cuales generan neuronas y células gliales [30-33]. En conjunto, neuronales) la idea de que las células troncales estos datos apoyan se desarrollan de un linaje neuroepitelial-glía radial-astrocítico (Fig. 3) [22,34]. CT generan muevas CT y CPNs Otro punto de controversia ha sido determinar si las nuevas neuronas originadas en el adulto provienen del mismo tipo de Origen: células neuroepiteliales que producen neuronas durante el de- sarrollo embrionario. Los tipos celulares retenidos dentro del neuroepitelio del sistema nervioso adulto, tales como las células epéndimo? ependimales o las llamadas células de la glía radial, son proba- blemente los precursores neurales equiparables a las células neuroepiteliales embriónicas, de las cuales se derivan y son las astrocitos? Parece mas que conservan propiedades que les permiten responder a los pa- trones de señales inductoras de neurogénesis en el embrión [22, plausible (Garcia-Verdugo) 35,36]. Por tanto, las neuronas generadas en el adulto pueden tener distintos precursores, siendo algunos de ellos cercanos pero no directamente equivalentes a los CT neuroepitelio em- Aisladas y cultivadas del en cerebro brionario. Por lo anterior se cree que las células troncales en el adulto pueden ser máspost-mortem humano especializadas y solamente generar un Figura 1. C élulas troncales con potencial capacidad neurogénica. La figu- rango limitado de subtipos neuronales. Además, estas células ra muestra, en orden jerárquico, las células troncales que en los mamífe- ros pueden dar origen a neuronas. son incapaces de activar las cascadas de señalización que utili- zan las células troncales embrionarias y que involucran a las pro- sábado 29 de mayo de 2010 bHLH [36]. teínas proneurales acuerdo con su morfología, ultraestructura, propiedades elec-
  8. 8. trocitos), las cuales secretan factores de crecimiento que favorecen el olfatorio [39,40,47]. Los neu- al bulbo pro- ceso de migración [48,50,51]. Lospresentes en la VRM mues- a roblastos tu- bos de células gliales (conocidos morfología alargada y forman tran una tam- b NEUROGENESIS bién como glía radial o glía de Berg-ellos, lo que facilita su cadenas entre migración hacia el bulbo olfatorio [39, mann) [52,53] sirven de soporte direc- 48,49]. Estas cadenas de neuroblastos cional y contribuyen a la se desplazan entre estructuras tubula- superviven- cia de los neuroblastos, evitando que por células gliales (as- res integradas éstos salgan prematuramente de laslas cuales secretan factores trocitos), ru- de crecimiento que favorecen el pro- tas de migración [44]. Losceso de migración [48,50,51]. Los tu- neuroblas- tos en migración presentan conos de gliales (conocidos tam- bos de células b crecimiento muy desarrollados y glía radial o glía de Berg- bién como en proceso activo de extensión y retrac- sirven de soporte direc- mann) [52,53] cional y contribuyen a la superviven- ción, lo que sugiere que estas células cia de los neuroblastos, evitando que utilizan los mismos mecanismos de lo- éstos salgan prematuramente de las ru- comoción usados por lostas de migración [44]. Los neuroblas- axones en crecimiento [50]. tos en migración presentan conos de crecimiento muy desarrollados y en Distintos estudios han demostrado de extensión y retrac- proceso activo Vía migratoria al bulbo la importancia de las moléculas de ción, lo que sugiere que estas células adhesión (como las integrinas) y los mismos mecanismos de lo- utilizan de la comoción usados por los axones en matriz extracelular (como la tenascina Figura 4. N eurogénesis en el siste ma zona subventricular (ZSV)-bulbo olfatorio: a) Vista sagital del cere- olfatorio crecimiento [50]. y el sulfato de condrointina) en la mi- brohan demostrado Distintos estudios de una rata adulta que muestra las células progenitoras neuronales (CPN) en la ZSV y su migración gración de los neuroblastos a lo largo dehaciamoléculasolfatorio; b) Secuencia de los tipos celulares involucrados en el linaje neuronal y sus mar- la importancia las el bulbo de cadores específicos (modificado de [26] y [53]). de la VRM [54-57]. Concretamente, las integrinas) y de la adhesión (como matriz extracelular (como la tenascina Figura 4. N eurogénesis en el siste ma zona subventricular (ZSV)-bulbo olfatorio: a) Vista sagital del cere- la PSA-NCAM parece estar implica- y el sulfato de condrointina) en la mi- da en el establecimiento de contactos neuroblastos a lo largo bro deeluna rata adulta queSecuencialas células progenitorasinvolucrados (CPN)linaje neuronal ymigración muestra neuronales en la ZSV y su En hipocampo, se gración de los hacia bulbo olfatorio; b) de los tipos celulares en el sus mar- las VRM [54-57]. Concretamente, cadores específicos (modificado de [26] y [53]). entre los neuroblastos de de lacadenas migratorias y las células la PSA-NCAM parece estar implica- gliales que forman los tubos de neuroblastos establecimiento de contactos da en el [58]. incorporan 250000 entre los neuroblastos de las cadenas Además, la presencia de factores qui- las células gliales que migratorias y miorrepulsivos –tales como los los tubos de neuroblastos [58]. forman inhi- neuronas/mes (6%) bidores migratorios Slits–Además, área en el la presencia de factores qui- miorrepulsivos –tales como los inhi- septal parece desempeñar un papel im- bidores migratorios Slits– en el área portante en prevenir la migración de septal parece desempeñar un papel im- los neuroblastos hacia ciertas zonas portante en prevenir la migración de cerebrales [51]. los neuroblastos hacia ciertas zonas Participan en aprendizaje y cerebrales [51]. Las nuevas interneuronas, gene- Las nuevas interneuronas, gene- radas a partir de CPN de radas a partir de CPN de la ZSV del la ZSV del cerebro adulto que migran hacia el que migran hacia el cerebro adulto memoria bulbo olfatorio por la VRM, presen- por la VRM, presen- bulbo olfatorio tan potenciales de acción de forma de acción de forma tan potenciales espontánea y reciben contactos sináp- espontánea y reciben contactoshasta que se integran a la red ticos sináp- ticos hasta que se integran a la del bulbo olfatorio (Fig. 6). neuronal red neuronal del bulbo olfatorio (Fig. 6). interneuronas que se Las nuevas integran a la capa periglomerular ex- Las nuevas interneuronas que se Figura 5. Esque ma sagital del cerebro de una rata adulta que muestra la migración tangencial y radial presan marcadores neuronales y reci- de las nuevas neuronas desde la zona subventricular (ZSV) hasta el bulbo olfatorio siguiendo la vía ros- integran a la capa periglomerular ex- sinápticos una vez que tral migratoria (VR M). La migración tangencial de las nuevas neuronas en la VR M se divide en tres fases ben contactos Figura 5. Esque ma sagital del cerebro de una rata adulta que muestra la migración tangencial y radial presan marcadores neuronales y reci-los circuitos neuronales rias con actividad mitótica se observan en(ZSV) pero aúnel bulbo olfatorio siguiendo los vía ros- se integran en simultaneas: 1) Las células ya están migrando, son capaces de dividirse; las células migrato- de las nuevas neuronas desde la zona subventricular las regiones más cercanas a la ZSV adyacente a la ventrícu- hasta ben contactos sinápticos una vez que continuo recambio de M).los laterales. 2) Entangencial de las nuevas neuronas M , las células se divide encelularfases (Fig. 6) [46]. El tral migratoria (VR La migración un mom ento determinado dentro de la VR en la VR M salen del ciclo tres y con- las interneuronas del bulbo olfatorio células ya están migrando, pero bulbo son capaces vez dentro del bulbo células las células simultaneas: 1) Las tinúan su proceso de migración hacia el aún olfatorio. 3) Una de dividirse; las olfatorio, migrato- se integran en los circuitosse modifica por cambios enactividad mitótica se observan tangencial por radial más cercanas a la ZSV adyacente a los ventrícu- neuronales rias con el micro- cambian su migración en las regiones e invaden el parénquima de esta estructura, diferenciándo- sábado 29 de mayo de 2010 se en células granulares y periglom erulares. N O: nervio olfatorio; Gl: células glom erulares; PG, células (Fig. 6) [46]. El continuo recambio de
  9. 9. #2(2')")(+. 01. &)!280*(23. ")+"+9. 215. )180(*1')1"+,. H!()). 2+B FACTORES ).+!*<1."!2". .()-0*1+9."!). #)6"+. *;. 2543". !0##*62'#23. 1)4(*-)1)+0+. !28). &))1. 01B ")1+08)3:. 018)+"0-2")5$. *1). 0+. "!). ')6!210+'. *;. 2543". 1)4(*B REGULADORES 215."!).+4&B -)1)+0+9. 0,),. !*<. 1)<B&*(1. 1)4(*1+. #(*30;)(2")9. 50;;)()1"02")9. #*62'#4+.*;. .0+.30'0")5."*. ,.H!)+).;015B *;.'*3)6432(. *-+.>J9.KA9.80B N543". 1)4(23. 23. '0-(2"*(:. 50;;)()1"02"). *"(21+'0"")(+. )./C@.*;."!). .215. 2(). 01B *1+."*."!).!0B =4,5676766>?7, <7M:,N%-$(*(+, :,Q.R+$-(.3-$, 0$12' 32. /0-123+. ()-432"01-. 2543". !0##*62'#23. 1)4(*-)1)+0+, sábado 29 de mayo de 2010
  10. 10. FACTORES REGULADORES Genéticos (Notch, BMO, Eph,...) Factores de crecimiento (BDNF, IGF-I, VEGF, EPO) Administrando BDNF al ventrículo se incrementa la neurogenesis, el BDNF necesario para mantener el ritmo. Neurotransmisores (Glutamato, serotonina, dopamina, noradrenalina) Sobre todo glutamato mediante el NMDA Hormonas (estrogenos). Neurogénesis sube 65% durante embarazo con pico en el parto (prolactina) sábado 29 de mayo de 2010
  11. 11. FACTORES REGULADORES Edad. Se reduce en Hipocampo, pero no en ZSV Factores externos: Reguladores positivos: Actividad física, ambientes enriquecidos, restricción calórica, modulacion actividad neuronal, antidepresivos, electroshock Reguladores negativos: Stress, edad, glucocorticoides, drogas de abuso sábado 29 de mayo de 2010
  12. 12. ENRIQUECIMIENTO AMBIENTAL Y NEUROGÉNESIS Ejercicio mejora el carácter y la cognición Cambios vasculares, gliales, en neurotrofinas y en neurotransmisores Tambien neurogenesis Las celulas neoformadas implementan su morfologia Mejora el aprendizaje (LTP) sábado 29 de mayo de 2010
  13. 13. ENRIQUECIMIENTO AMBIENTAL Y NEUROGÉNESIS Neuromol Med (2008) genesis in the young and aged dentate gyrus. Young another set of experiments, retrovirus expressing green sábado 29 de mayo de 2010
  14. 14. NEUROPROTECCIÓN Reserva cognitiva: Actividad física y mental reduce el riesgo de Alzheimer y otras demencias en humanos (epidemiologia) Ratas: Enriquecimiento ambiental Ejercicio físico Estimulación sensorial sábado 29 de mayo de 2010
  15. 15. NEUROPROTECCIÓN J. Neurosci., May 25, 2005 • 25(21):5217–5224 • 5221 /g enriched; s tested, the ic APPswe/ biased stere- ampus cov- nic animal. plaques by es, was cho- defined bor- counting at levels ob- c plaques in er than in 05) (Fig. 3). ures was no sábado 29 de mayo de 2010
  16. 16. NEUROPROTECCIÓN Mecanismos celulares Plasticidad sináptica Neurogenesis gliogénesis angiogénesis sábado 29 de mayo de 2010
  17. 17. NEUROPROTECCIÓN Moleculares Modulación expresión génica Neurotrofinas Neurotransmisores Sinaptogénesis angiogénesis sábado 29 de mayo de 2010
  18. 18. Introducción Entorno Enriquecido (EE) “La combinación de objetos inanimados y la estimulación social” (Hebb, 1949) Efectos celulares y moleculares sobre:  Plasticidad neuronal  Niveles de neurotrofinas  Genes neuroprotección Efectos sobre el sistema visual  Acelera el desarrollo sábado 29 de mayo de 2010
  19. 19. !! )! ! )!!#!# !"#$%&'"!"#$$%& '()*!+$,++++-.,+/0%1234$,#$$%,$++$5,6 !"#$%&'()*+*,&%$*)%$),*-.%,*/)01,)*23%,124*25'() Blackwell Publishing Ltd *2,%&"4*25)51)100$*5)5"*)-.'25%5'5%3*)*00*&5$)10) β /',67,*',%28)12)5"*)97:;;β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`!)A!=(=BC!'B>NA:??!I(>!=9:!'B>N1>:B>)AO :6F:>)E:A=?`! BA'! 'B>N1>:B>)AO! )A! D(A')=)(A?! (I! :A>)D9:'! :AY)>(AE:A=! [)=9(<=! BA'! [)=9! F9H?)DBC! :6:>D)?:,! 89: B?=>(DH=)D!':A?)=H![B?!:?=)EB=:'!XH!)EE<A(9)?=(D9:E)?=>H!I(>!G1+$$β!F>(=:)A,!a<BA=)I)DB=)(A?![:>:!F:>I(>E:'!)A CBH:>!LV,!89:!?(EB=(?:A?(>)BC!D(>=:6!XB>>:C!I):C'![B?!BC?(!?=<'):'!B?!D(A=>(C,!89:!Y(C<E:!(I!CBH:>!LV![B?!?=:>:(C(O)DBCCH DBCD<CB=:'!I(>!:BD9!>:O)(AQ!BO:!BA'!:6F:>)E:A=BC!D(A')=)(A,!b>(E!=9:!X:O)AA)AO!(I!=9:!D>)=)DBC!F:>)('Q!B?=>(DH=: ':A?)=H![B?!9)O9:>!)A!D(A=>(C!>B=?!=9BA!)A!=9:!:A>)D9:'!:AY)>(AE:A=!O>(<F![)=9(<=!F9H?)DBC!:6:>D)?:Q![)=9!':A?)=):? (I!B?=>(DH=:?!B>(<A'!#$c!9)O9:>!B=!BCC!(I!=9:!')II:>:A=!BO:?,!LA!D(A=>B?=Q![9:A!=9:!BA)EBC?!9B'!BDD:??!=(!Y(C<A=B>H :6:>D)?:Q!':A?)=):?![:>:!?)OA)I)DBA=CH!9)O9:>!=9BA!:Y:A!=9:!D(A=>(C!>B=?,!<>!EB)A!>:?<C=!?9([?!=9B=!?=>B=:O):?!=( BFFCH!:AY)>(AE:A=BC!:A>)D9E:A=!?9(<C'!BC[BH?!D(A?)':>!=9:!)AD(>F(>B=)(A!(I!F9H?)DBC!:6:>D)?:Q!:Y:A!I(>!?:A?(>)BC B>:B?!?<D9!B?!=9:!Y)?<BC!B>:BQ![9:>:!D(EFC:6!:A>)D9:'!:6F:>):AD:!XH!)=?:CI!)?!A(=!:A(<O9!=(!D(EF:A?B=:!=9:!:II:D=? (I!Y)?<BC!':F>)YB=)(A, >*#)?1,/$ B?=>(OC)B`!'B>N1>:B>)AO`!:AY)>(AE:A=BC!:A>)D9E:A=`!G1+$$β`!Y)?<BC!D(>=:6`![9::C!><AA)AO, Y)?<BC!D(>=:6!)?!X:=[::A!=9:!=9)>'!BA'!I)I=9!F(?=AB=BC![::N @25,1/.&5%12 [)=9!B!F:BN!B=!=9:!I(<>=9![::N!"bBO)(C)A)!:=!BC,!+%%/&,!G(E: 89:!F(?=AB=BC!':Y:C(FE:A=!(I!=9:!Y)?<BC!D(>=:6!)?!E('<1 B<=9(>?! 9BY:! ?=<'):'! =9:! :II:D=?! (I! =9:! )AD>:B?:! BA'-(> CB=:'!XH!:6F:>):AD:Q![9)D9!?9BF:?!I<AD=)(ABC!BA'!D(>=)DBC ':F>)YB=)(A!(I!Y)?<BC!:6F:>):AD:!(A!=9:!A:<>(ABC!"K:AA:== B>D9)=:D=<>:,!M6F:>):AD:1E:')B=:'!D9BAO:?!B>:!B=!B!EB6)E<E :=!BC,!+%0/`!dBAD:''B!:=!BC,!#$$/&Q!O:A:=)D!"eBEF(A!:=!BC, '<>)AO!B!F>:':=:>E)A:'!=)E:![)A'([!DBCC:'!=9:!D>)=)DBC #$$$&Q! YB?D<CB>! "KCBDN! :=! BC,! +%42`! G)>:YBBO! :=!BC,! +%44` F:>)('!"K:>B>')!:=!BC,!#$$$`!S:A?D9Q!#$$3&Q![9)D9!)A!=9:!>B= ;>OBA'(PB!f!WBI<:A=:Q!+%%0Q!#$$$`!;>OBA'(PB!:=!BC,!#$$3` sábado 29 de mayo de 2010 K:AO(:=6:B!:=!BC,!#$$4&!BA'!B?=>(OC)BC!"d(>Y:==)!:=!BC,!#$$5Q
  20. 20. sábado 29 de mayo de 2010
  21. 21. NEUROPROTECCIÓN Entornomiméticos sábado 29 de mayo de 2010
  22. 22. number of animals used. All animal experiments were on consecutive slices. The average values per group and performed in accordance with the European Com- region were compared via variance analysis (ANOVA) munity Council Directive of 24 November 1986 on Statview IITM (Abacus Concepts, USA). NEURORRESCATE (86=609=EEC). After postfixation of the whole brain for 24 hours at Results 4 C, histoprocessing of coronal sections including the lesion was performed. Routine 4-mm paraffin slices No animal died as a result of the surgery nor were obtained for histology (HE), lectins histochemis- before the established survival times, and try for LEA, and conventional immunohistochemistry for Flk-1, GluT-1 and EBA. all recovered without complications or func- tional deficits. Neuropathological changes Histochemistry of lectins were examined by HE staining in order to Paraffin was removed from the tissue through xylene immersion; the tissue was rehydrated with ethanol. Endogenous peroxidase activity was blocked by incu- bation in 4% H2O2=methanol for 20 min. Sections were washed in a Tris buffer at pH 7.4 and incubated over- Ictus 1 millón casos/año EU night with biotinylated lectin from Lycopersicon esculentum (LEA 5 mg=ml; SIGMA L0651) at 4 C. (25% de hombres y 20% Sections were rinsed with a Tris buffer and incubated with avidin biotin peroxidase complex (Elite ABC kit, mujeres sufrirán a los 85 años) Vector laboratories, Burlingame, CA, USA). Finally, the reaction product was detected using 3,30 -diamino- benzidine (DAB 0.25 mg=ml) and hydrogen peroxide solution (0.01%). Slides were lightly counterstained TBI with haematoxylin, dehydrated and covered. For immunohistochemistry, paraffin was removed from the tissue through xylene immersion; the tissue was rehydrated with ethanol. Endogenous peroxidase Fig. 1. Schematic representation of a coronal section Especialmente en desarrollo activity was blocked with 4% H2O2=methanol for 20 min. Sections were kept in a Tris buffer at pH 7.4, through the centre of the cortical lesion showing the three considered areas, 1. the core of the lesion, 2. the then incubated for 30 min. at 37 C in Trypsin 0.1% marginal region and 3. the edematised areas sábado 29 de mayo de 2010
  23. 23. Objetivos terapeúticos Neuroprotección/neurorescate Incremento vascularización sábado 29 de mayo de 2010
  24. 24. TCE en Desarrollo Mayor capacidad de plasticidad Interferencia en los mecanismos fisiológicos Apoptosis Plasticidad sináptica (NMDA) sábado 29 de mayo de 2010
  25. 25. Linea de trabajo Effectos de la administración e inhibición del VEGF en la corteza visual de ratas en desarrollo sábado 29 de mayo de 2010
  26. 26. Linea de trabajo Effectos de la administración e inhibición del VEGF en la corteza visual de ratas en desarrollo sábado 29 de mayo de 2010
  27. 27. Introducción Factor de Crecimiento Vascular Endotelial (VEGF)  Angiogénesis Angioneurina  Neurogénesis  Neuroprotección  Proliferación astroglial sábado 29 de mayo de 2010
  28. 28. Introducción Muerte celular programada durante el desarrollo Texto sábado 29 de mayo de 2010
  29. 29. Introducción Muerte celular programada durante el desarrollo Texto sábado 29 de mayo de 2010
  30. 30. VEGF infusion 18 dpn Long Evans rats Alzet minipumps for 1 week at a 1 µl /h rate. VEGF. 25 ng/ml. anti-VEGF. 25 µg/ml. PBS. Untreated rats. sábado 29 de mayo de 2010
  31. 31. sábado 29 de mayo de 2010
  32. 32. Minipump placement sábado 29 de mayo de 2010
  33. 33. sábado 29 de mayo de 2010
  34. 34. sábado 29 de mayo de 2010
  35. 35. EBA sábado 29 de mayo de 2010
  36. 36. HSP-70 sábado 29 de mayo de 2010
  37. 37. GFAP sábado 29 de mayo de 2010
  38. 38. Vascular density sábado 29 de mayo de 2010
  39. 39. Vascular density sábado 29 de mayo de 2010
  40. 40. Vascular density 50,0 46 46 37,5 38 35 31 30 29 25,0 26 26 27 12,5 0 18 dpn PBS aVEGF VEGF 25 dpn 18 dpn PBS aVEGF VEGF 25 dpn Ipsilateral cortex Contralateral cortex sábado 29 de mayo de 2010
  41. 41. Neuronal density sábado 29 de mayo de 2010
  42. 42. Neuronal Density sábado 29 de mayo de 2010 (Optical dissector)
  43. 43. Neuronal Density sábado 29 de mayo de 2010 (Optical dissector)
  44. 44. Neuronal density 0.000 102.158 95.775 90.520 90.520 2.500 86.608 86.542 85.839 82.161 82.161 75.425 5.000 7.500 0 18 dpn PBS aVEGF VEGF 25 dpn 18 dpn PBS aVEGF VEGF 25 dpn Ipsilateral cortex Contralateral cortex sábado 29 de mayo de 2010
  45. 45. Estrategia sinergikoa? P0 P18 P25 SC-SC  VEGF  PBS SC-EE  Kontrolak EE-SC EE-EE sábado 29 de mayo de 2010
  46. 46. sábado 29 de mayo de 2010
  47. 47. Caspase-3 sábado 29 de mayo de 2010
  48. 48. Caspase-3 sábado 29 de mayo de 2010
  49. 49. Material y Métodos Histoquimia - Butiril Colinesterasa Inmunohistoquimia Microscopia óptica - NeuN - Caspasa-3 activa Microscopia confocal - Glutamina sintetasa/Caspasa-3 activa - MAP-2/Caspasa-3 activa sábado 29 de mayo de 2010
  50. 50. Material y Métodos Morfometría Cuantificación de la densidad vascular (a), densidad neuronal (b) y la densidad de células Caspasa-3 activa (c). sábado 29 de mayo de 2010
  51. 51. Resultados Cualitativos Glutamina sintetasa/Caspasa-3 activa MAP-2/Caspasa-3 activa sábado 29 de mayo de 2010
  52. 52. Resultados Densidad vascular Ipsilateral Ipsilateral 25000 22500 nº vasos/mm3 control 20000 VEGF PBS 17500 15000 SC-SC SC-EE EE-SC EE-EE Contralateral Contralateral 25000 22500 nº vasos/mm3 control 20000 VEGF PBS 17500 15000 SC-SC SC-EE EE-SC EE-EE sábado 29 de mayo de 2010
  53. 53. Resultados Densidad neuronal Densidad neuronal (IL) 120000 Ipsilateral 102500 nº neuronas/mm3 85000 control VEGF PBS 67500 50000 SC-SC SC-EE EE-SC EE-EE Densidad neuronal (CL) Contralateral 120000 110000 100000 nº neuronas/mm3 90000 control 80000 VEGF PBS 70000 60000 50000 SC-SC SC-EE EE-SC EE-EE sábado 29 de mayo de 2010
  54. 54. Resultados Densidad células Caspasa-3 activa Densidad Caspasa-3 activa (IL) 23000 Ipsilateral nº células caspasa-3/mm3 21167 19333 17500 control 15667 VEGF PBS 13833 12000 SC-SC SC-EE EE-SC EE-EE Densidad Caspasa-3 activa (CL) Contralateral 25000 nº células caspasa-3/mm3 21750 18500 control VEGF PBS 15250 12000 SC-SC SC-EE EE-SC EE-EE sábado 29 de mayo de 2010
  55. 55. www.slideshare.net/nfpguare www.ehu.es/ehusfera/lance eg.argandona@ehu.es 50 sábado 29 de mayo de 2010

×