Sexado Molecular Aves

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La ausencia de dimorfismo sexual en la mayoría de las aves, sobre todo las exóticas,
o su manifestación sólo en estadío adulto, hace necesario algún método
alternativo para determinar el sexo de las mismas. A veces no es necesario, puesto
que sólo tenemos dichas aves como animales de compañía. Para los criadores
sin embargo, conocer el sexo de sus animales lo antes posible es una condición
imprescindible para el buen andar del negocio y la cría de nuevos pichones.

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Sexado Molecular Aves

  1. 1. Sexado molecular de avesElena Quesada HernándezDra. en Ciencias BiológicasLa ausencia de dimorfismo sexual en la mayoría de las aves, sobre todo las exó-ticas, o su manifestación sólo en estadío adulto, hace necesario algún métodoalternativo para determinar el sexo de las mismas. A veces no es necesario, pues-to que sólo tenemos dichas aves como animales de compañía. Para los criadoressin embargo, conocer el sexo de sus animales lo antes posible es una condiciónimprescindible para el buen andar del negocio y la cría de nuevos pichones.Tradicionalmente se ha determinado el sexo mediante endoscopia, ya que losórganos sexuales en las aves son internos. Esta técnica, aunque muy fiable, estambién muy invasiva con nuestras aves, por lo que muchos criadores la rechazan.Además, es muy difícil de realizar sobre pequeños ejemplares.El ADN al rescateActualmente existe un método extremadamente fiable y rápido, y que además noentraña ningún tipo de riesgo para el animal. Se trata del sexado molecular deaves. El sexo de todo ser vivo, además de toda la información que lo convierte ental, se halla codificado en su ADN. En las aves, el sexo femenino viene dado poruna pareja de cromosomas ZW, y el masculino por una pareja de cromosomas ZZ.Analizando un gen específico del cromosoma W, el gen chd, podemos determinarel sexo de nuestras aves.Mediante la técnica de la PCR (Polymerase Chain Reaction), obtenemos muchascopias de una región del gen chd. Esta región tiene una longitud de unas 400paresde bases (pb). En esa misma reacción también obtenemos muchas copias de unaregión muy parecida que se halla en otro gen específico del cromosoma Z, y quetiene una longitud de 600pb. Es decir, si analizamos el ADN de una hembra obten-dremos dos grupos de moléculas, uno de 400pb y otro de 600pb. En el caso de losmachos, sólo habrá un grupo de moléculas, el de 600pb.Así, cuando separamos esos dos grupos de moléculas usando la técnica de la elec-troforesis, obtenemos un patrón similar al que aparece en la foto de la siguientepágina. Aviornis Internacional - Abril 2012 - nº 122 - pág. 58
  2. 2. 642-658 son muestras de aves. C+ son los controles positivos de hembra y macho, y la muestra cen-tral es una “regla” que se usa para medir la longitud de las moléculas que se analizan.Como se puede observar, son claramente distinguibles los dos grupos de molécu-las y por regla general, las muestras que presentan dos bandas corresponden ahembras, y las que sólo presentan una banda corresponden a machos.¿Cómo funciona?El resultado final es muy bonito, pero para llegar hasta ahí hay que dar variospasos previos, el primero de los cuales (y uno de los más importantes) ocurre ensu aviario, cuando usted toma las muestras de sus aves.Toma de muestras: Lo que Newbiotechnic necesita para extraer ADN analizableson células, que se encuentran en las plumas o en la sangre. La muestra con la quemejor trabajamos es la sangre, y sólo necesitamos un par de gotas. Con una agujahipodérmica, dé un pinchazo en la vena del ala y deje caer un par de gotas sobreun papel normal. Deje secar y listo. Si prefiere enviarnos plumas, las mejores sonplumas en crecimiento, con un cañón gordo a ser posible irrigado y con muchascélulas epiteliales. De ahí es de donde extraemos el ADN.Es importante que cambie de aguja o laesterilice para cada ave, y que use guan-tes o se lave las manos entre la toma deplumas de un ave y otro. Así evitaremoscontaminaciones y ayudaremos a que elproceso sea aún más fiable.También es muy importante que al pegarlas plumas en la solicitud, la cinta adhe-siva no toque el cañón de la pluma, yaque éste se contamina muy fácilmente. Extracción de plumas en crecimiento de la zona de la cloaca. Nótese el uso de guantes desecha- bles para el proceso. Aviornis Internacional - Abril 2012 - nº 122 - pág. 59
  3. 3. Deposición de la muestra: Realizamos el análisis en placas de 96 pocillos, así que cuando reunimos 91 muestras (más 5 controles), nuestra técnico corta un pequeño trozo de cada cañón o recorta un poquito de papel con sangre y lo deposita en un pequeño pocillo de la placa. Este proceso es laborioso y debe ser realizado concienzudamente. Por ejemplo, si introducimos la muestra correspondiente al pocillo A6 en el poci- llo A7 y a partir de ahí las desplazamos todas un pocillo, todos los resultadosPega de las plumas en la solicitud de NBT. Hay que demos corresponderán a otra mues-que ser cuidadoso para que la cinta adhesiva no tra.toque el cañón de la pluma. Extracción de ADN: Sometemos las muestras a choques térmicos con un reactivo para romper las paredes celula- res y extraer el ADN de su interior. Realización de la PCR. La PCR es conocida familiarmente como la “foto- copiadora de ADN”. Mediante esta téc- nica conseguimos muchas copias de una región específica del ADN, en este casoPlaca de 96 pocillos para el análisis de muestras. un trozo del gen chd del cromosoma WCada pocillo corresponde a una muestra distinta. y una región muy parecida del cromoso- ma Z. Estos dos tipos de copias sóloaparecerán si el ADN original era el de una hembra. Si era el de un macho, sóloconseguiremos muchas copias de la región del cromosoma Z.Electroforesis. El ADN está cargado negativamente, así que si lo depositamos enuna matriz y aplicamos corriente, las moléculas se desplazarán hacia el polo posi-tivo. Las moléculas más pequeñas (las del cromosoma W) “correrán” más rápidoy las más grandes (las del cromosoma Z) lo harán más despacio. Por eso veremosuna diferencia entre ambas y podremos distinguir si el ADN original era de unmacho o de una hembra. Aviornis Internacional - Abril 2012 - nº 122 - pág. 60
  4. 4. NBT, un equipo de profesionales a su servicioNewbiotechnic (NBT) ha sido la empresa pionera en España en ofrecer el servi-cio de sexado molecular de aves y somos líderes en este mercado. Hemos realiza-do alrededor de 13000 sexados en casi dos años, y actualmente venimos realizan-do unos 900 análisis al mes. Tenemos un equipo de profesionales (5 Doctores enBiología, 2 Licenciados y 2 técnicos superiores de laboratorio) a su disposiciónpara atender cualquierduda o sugerencia quetenga, y para asegurar lamayor calidad en el trata-miento de las muestras ylos resultados. Ofrecemosuna atención personaliza-da a cada caso, y graciasal constructivismo denuestros clientes y a ungran esfuerzo humano einvestigador, somos capa-ces de ofrecer el sexadode más de 300 especies deaves. Los socios deAVIORNIS se puedenbeneficiar de un precioespecial de 4€ en el sexa- Vista general del laboratorio de Biología Molecular de NBT.do de sus aves*.En nuestra página web www.sexadodeaves.com encontrarás toda la informaciónnecesaria para sexar a tus aves así como las últimas noticias del laboratorio, víde-os explicativos y mucho más.Además, puedes seguirnos en Facebook: www.facebook.com/newbiotechnic, y enTwitter: @newbiotechnic.*Excepto aves del género Tauraco que precisan de un análisis adicional y cuyo precio de sexado es 12.96€ Aviornis Internacional - Abril 2012 - nº 122 - pág. 61

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