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Extraccion de ADN

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Laboratorio realizado en la universidad popular del Cesar sobre extraccion de ADN

Published in: Education

Extraccion de ADN

  1. 1. EXTRACCION DEL ADN
  2. 2. La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la celula. Se empieza por lisar (romper) la célula mediante un detergente. Lisis celular por medio de detergentes es una manera más suave de romper la membrana celular.
  3. 3. El detergente hace que la célula vacié su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN en ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas mas pequeñas y separadas de el por acción del detergente. Solo queda, por tanto, extraer el ADN de esa muestra de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico
  4. 4. Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar sobre la simpleza de su composición con sencillas técnicas. Observar la estructura fibrilar del ADN. Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quimico-fisicas del ADN.
  5. 5. REACTIVOS. MATERIAL BIOLÓGICO Agua destilada Sal común Bicarbonato sodico Detergente liquido o champú Alcohol isoamilico a 0°C Alcohol de 96° (isopropanol) Alcohol de 90° (etanol) Cebolla grandes frescas Kiwis Sumo de piña o de papaya Ajos tomate
  6. 6. Preparar el tampón. Mantener en un baño de hielo. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN. Cortar en cuadritos Triturar la muestra con un poco de agua . Mezclar en un recipiente limpio 5 ml de triturado celular con 10 ml del tampón frio y agitar vigorosamente durante 2mn. Filtrar el liquido. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN.
  7. 7. Añadir media cucharada pequeña de sal en medio vaso de agua. Añadir un chorro de líquido lavaplatos. Incorpore con cuidado una cucharada pequeña de etanol (alcohol 96º para las heridas) helado en el vaso. El alcohol se debe de echar de forma que vaya resbalando por las paredes del vaso. Una vez cogido el ADN trasládelo a un vaso con alcohol para verlo mejor y para mantenerlo. Añadir al vaso entre media y una cucharada (2,5 ml) pequeña de la solución de sal y líquido de lavaplatos. Mueva la solución con una cucharilla despacio para que no se forme espuma. Observe el punto en que se juntan las dos capas. Atrapar los hilos de ADN con un gancho de vidrio cucharilla) sumergiéndolo con cuidado a través de las dos capas. Poner aproximadamente una cucharada grande (20 – 25 ml) de agua clara en la boca. Enjuagar la boca con fuerza moviendo el agua de una mejilla a otra unos 30 segundos. Escupe el agua en un vaso de agua limpio.
  8. 8. Se pudo comprobar mediante la técnica de extracción y purificación el contenido de ADN, que las células animales como vegetales contienen dentro de su estructura una cantidad de información genética o ADN.
  9. 9. El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN. El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. ADN alcohol
  10. 10.  Zumo de piña y de papaya (contienen una enzima, la papaína, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN), está es una enzima que corta las proteínas se trata de romper lo que hay dentro de la célula dejando intacto el ADN al añadir el alcohol se consigue separar el ADN, que tiene mas afinidad con el alcohol que con el agua.  La saliva arrastra las células del epitelio que recubre las paredes internas de la boca y que se están desprendiendo constantemente. La sal común (NaCl), con esa concentración, es un medio hipertónico que provoca el estallido de las células y los núcleos, quedando libre las fibras de cromatina. El detergente cumple la misión de formar un complejo con las proteínas histonas y separarlas del ADN
  11. 11. Al realizar adecuadamente el procedimiento sobre extracción del ADN pudimos observar la estructura fibrilar del ADN. A través de este experimento pudimos analizar que cada uno de los ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El detergente elimina las proteínas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN.

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