1. HEPATITE C
Virus & Marqueurs
Stéphane Chevaliez
Centre National de Référence
Des Hépatites B, C et delta
Laboratoire de Virologie & INSERM U955
Hôpital Henri Mondor
Université Paris-Est
Créteil
2. Hépatite C : virus et marqueurs
Virus de l’Hépatite C
• Découvert par Houghton en 1989
• 1ère cause d’hépatite chronique et de cirrhose
en Europe et en Amérique du Nord
• 1ère indication de transplantation hépatique
dans les pays industrialisés
Afdhal, NH. 2004; Sem Liv Dis, 24(Supp 2): 3‐8
3. Hépatite C : virus et marqueurs
Virus de l’Hépatite C
• Famille : Flaviviridae
• Genre : Hepacivirus
Phylogénie de la région codant la protéine NS5B
Adapted from Simmonds et al., 1999; 2001.
4. Hépatite C : virus et marqueurs
Virus de l’Hépatite C
• Famille : Flaviviridae
• Genre : Hepacivirus
• Hôte naturel : Homme
• Tropisme : Hépatocyte
5. Hépatite C : virus et marqueurs
Organisation Structurale
6. Hépatite C : virus et marqueurs
Organisation Génomique des
Flaviviridae
0 1800 3600 5400 7200 9000 10800
Hepatitis C virus
5’UTR 3’UTR
C E1 E2 NS2 NS3 NS4B NS5A NS5B
p7
4A
Pestivirus
5’UTR 3’UTR
C E0 E1 E2 NS2 NS3 NS4B NS5A NS5B
Npro
4A
p7
Yellow fever virus
5’UTR 3’UTR
prM
Cap C E NS1 2A 2B NS3 NS4A 4B NS5
7. Hépatite C : virus et marqueurs
Organisation Génomique
Protéines structurales Protéines non structurales
Popescu and Dubuisson, Bio. Cell 2010, 102(1): 63‐74.
8. Hépatite C : virus et marqueurs
Organisation Génomique
Bartenschlager et al, Trends Microbiol, in press.
9. Hépatite C : virus et marqueurs
IRES et Traduction
From Department of Structural Biology, Stanford University Medical School, USA.
10. Hépatite C : virus et marqueurs
Réseaux d’Interactions
Park et al, BMC Bioinformatics 2010, 11(Suppl 1): S23.
11. Hépatite C : virus et marqueurs
Protéine de Capside
Boulant et al, J Virol 2005, 79(17): 11353‐11365.
13. Hépatite C : virus et marqueurs
Capside et Lipides
Bartenschalger et al., Tends Microbiol, in press.
14. Hépatite C : virus et marqueurs
Interaction entre la Capside et
DGAT-1
*Diacylglycérol diacyltransférase-1
Herker et al., Nat Med 2010, 16(11): 1295‐1298.
15. Hépatite C : virus et marqueurs
Glycoprotéine E2
• Hétérodimère avec E1
• Régions hypervariables
– HVR1
– HVR2
– igVR
• Rôles
– HVR2 et igVR
indispensables au “folding“
E1-E2
– Étapes précoces
(interaction avec CD81,
peptide de fusion)
Krey et al., PLoS Pathog. 2010, 6(2): e1000762; McCaffrey et al., J Gen Virol 2011, 92: 112‐121.
16. Hépatite C : virus et marqueurs
Étape Précoce : Entrée du VHC
Popescu et al., Bio Cell 2010, 102: 63‐74.
17. Hépatite C : virus et marqueurs
HVR1
Région HVR1 (27 amino-acides)
80% de divergence nucléotidique entre génotypes
Epitope majeur de neutralisation
Timm et al., World J Gastroenterol 2007; 13(36)4808‐4817.
18. Hépatite C : virus et marqueurs
Transmission du VHC
20. Hépatite C : virus et marqueurs
Protéine p7
• Viroporine dont la
structure 3D a été
récemment déterminée
par ME
• Rôle(s) in vivo ?
• Cible thérapeutique
potentielle
Luik et al., Proc Natl Acad Sci 2009, 4;106(31): 12712‐6; Griffin S, Proc Natl Acad Sci 2009, 106(31): 12567‐68.
21. Hépatite C : virus et marqueurs
Activité Antivirale du BIT225
• IC50 de 314 nM dans le modèle du BVDV
• Activité synergique
Luscombe et al., Antiviral Res 2010 May;86(2):144‐53.
22. Hépatite C : virus et marqueurs
Protéine NS2
• NS2 (région N-ter)
– Rôle dans l’organisation
de la formation des
nucléocapsides
• NS2pro (région C-ter)
Jirasko et al., PLoS pathog 2010 Dec 16;6(12): e1001233; Ivo et al., Nature 2006, 442: 831‐835.
23. Hépatite C : virus et marqueurs
Protéine NS3-4A
Raney et al., J Biol Chem 2010, 285(30): 22725‐731.
24. Hépatite C : Nouvelles Hepatite C : virus et marqueurs
Inhibition de la Production d’IFN
par NS3
25. Hépatite C : virus et marqueurs
Protéase NS3
Raney et al., J Biol Chem 2010, 285(30): 22725‐731.
26. Hépatite C : virus et marqueurs
Etudes de Phase III Présentées à
l’AASLD™ 2010
• SPRINT-2
BOCEPREVIR (BOC)
• RESPOND-2
• ADVANCE
• ILLUMINATE TELAPREVIR (TVR)
• REALIZE
27. Hépatite C : virus et marqueurs
SPRINT-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : Design de l’Etude
S4 S28 S48 S72
48 PR PR
PR + placebo Suivi
n = 363 Lead-in
ARN-VHC indétectable à S8-24
Suivi S24
BOC/TGR PR
PR + boceprevir ARN-VHC détectable à S8-24
n = 368 Lead-in
P/R + placebo Suivi
BOC/PR48 PR
PR + boceprevir Suivi
n = 366 Lead-in
*BOC 800 mg q8h; pegIFN alfa-2b 1,5 µg/kg/s; RBV 600-1400 mg/j adaptée au poids.
Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB4.
28. Hépatite C : virus et marqueurs
SPRINT-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : Caractéristiques
des Patients
Cohorte 1 (caucasiens) [n=938]
PR48 BOC/RGT BOC/PR48
n=311 n=316 n=311
Sexe masculin [n(%)] 171 (55) 198 (63) 187 (60)
Age (années) [moyenne] 48 49 49
IMC (kg/m2) [moyenne (±DS)] 27 (±5) 28 (±5) 27 (±5)
ARN du VHC >400,000 UI/mL [n(%)] 286 (92) 287 (91) 289 (93)
Type/sous-type du VHC [n(%)]*
1a 186 (60) 196 (62) 196 (63)
1b 112 (36) 110 (35) 102 (33)
Fibrose sévère/Cirrhose
22 (7) 25 (8) 37 (12)
(METAVIR F3/F4) [n(%)]
*La détermination du type et du sous-type a été réalisée par séquençage d’une portion de la région NS5B codant l’ARNpol (méthode de référence)
Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB4.
29. Hépatite C : virus et marqueurs
SPRINT-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : RVS et Taux de
Rechute
p <0,0001
p <0,0001
Taux de RVS
Proportion de patients (%)
Taux de rechute
Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB4.
30. Hépatite C : virus et marqueurs
SPRINT-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : RVS et Taux de
Rechute
p <0,0001
p <0,0001
Taux de RVS
Proportion de patients (%)
Taux de rechute
➜ Le BOC améliore significativement les chances de guérison par rapport au SOC
➜ L’adaptation de la durée du traitement à la réponse (TGR) ne semble pas diminuer les
chances de guérison
Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB4.
31. Hépatite C : virus et marqueurs
ADVANCE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : Design de l’Etude
S8 S12 S24 S36 S48 S72
PR48 Placebo
PR Suivi
(n = 361) + P/R
eRVR+
Suivi
T12PR
(n = 363) TVR + PR PR
PR Suivi
eRVR+
Suivi
T8PR Pbo
TVR +
(n = 364) PR
+ PR PR
PR Suivi
eRVR-
*TVR 750 mg q8h; pegIFN alfa-2a 180 µg/s; RBV 1000-1200 mg/j adaptée au poids.
eRVR : réponse virologique rapide étendue (ARN indétectable à S4 et à S12)
Jacobson et al., AASLD 2010, Abstract 211.
32. Hépatite C : virus et marqueurs
ADVANCE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : Caractéristiques
des Patients
T12PR (n = 363) T8PR (n = 364) PR (n = 361)
Sexe masculin [n (%)] 214 (59) 211 (58) 211 (58)
Origine ethnique
Caucasiens [n (%)] 325 (90) 315 (87) 318 (88)
Afro-Américains 26 (7) 40 (11) 28 (8)
Hispaniques 35 (10) 44 (12) 38 (11)
Âge (années) [médiane (intervalle)] 49 (19-69) 49 (19-68) 49 (18-69)
IMC (kg/m2) [médiane (intervalle)] 26 (18-47) 26 (17-46) 26 (17-48)
ARN du VHC > 800 000 UI/ml* [n (%)] 281 (77) 279 (77) 279 (77)
Type/sous-type du VHC** [n (%)]
1a 213 (59) 210 (58) 208 (58)
1b 149 (41) 151 (41) 151 (42)
1 non sous-typable 1 (< 1) 3 (1) 2 (1)
Stade de fibrose, n (%)
Fibrose en ponts 52 (14) 59 (16) 52 (14)
Cirrhose 21 (6) 26 (7) 21 (6)
*La charge virale (ARN du VHC, UI/ml) a été déterminée par PCR en temps réel (TaqMan® Roche), avec une limite de quantification de 25 UI/mL
**La détermination du génotype viral a été réalisée par hybridation inverse, INNO-LiPA v1.0
Jacobson et al., AASLD 2010, Abstract 211.
33. Hépatite C : virus et marqueurs
ADVANCE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : RVS
p <0,0001
p <0,0001
Proportion de patients ayant
développé une RVS (%)
Jacobson et al., AASLD 2010, Abstract 211.
34. Hépatite C : virus et marqueurs
ADVANCE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients Naïfs de Génotype 1 : RVS
p <0,0001
p <0,0001
Proportion de patients ayant
développé une RVS (%)
➜ Le TVR améliore significativement les chances de guérison par rapport à la
bithérapie standard
➜ Le traitement par TVR 8 ou 12 semaines donne des taux de RVS comparables
(différence NS)
Jacobson et al., AASLD 2010, Abstract 211.
35. Hépatite C : virus et marqueurs
RESPOND-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients en échec Thérapeutique de G1 : Design
de l’Etude
S4 S28 S48 S72
PR48 PR
PR + placebo Suivi
n = 80 Lead-in
ARN-VHC indétectable à S8
Suivi S24
BOC/TGR PR
PR + boceprevir S32 ARN-VHC détectable à S8
n = 162 Lead-in
PR +
Suivi
placebo
BOC/PR48 PR
PR + boceprevir Suivi
n = 162 Lead-in
*BOC 800 mg q8h; pegIFN alfa-2b 1,5 µg/kg/s; RBV 600-1400 mg/j adaptée au poids.
Bacon et al., AASLD 2010, Abstract 216.
36. Hépatite C : virus et marqueurs
RESPOND-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients en échec Thérapeutique de G1 : RVS et
Taux de Rechute
p <0,0001
p <0,0001
Taux de RVS
Proportion de patients (%)
Taux de rechute
17/60 8/25 95/162 17/111 107/161 14/121
Lead‐in +
32 BOC/PR ± PR12
Bacon et al., AASLD 2010, Abstract 216.
37. Hépatite C : virus et marqueurs
RESPOND-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients en échec Thérapeutique de G1 : RVS et
Taux de Rechute
p <0,0001
p <0,0001
Taux de RVS
Proportion de patients (%)
Taux de rechute
17/60 8/25 95/162 17/111 107/161 14/121
Lead‐in +
32 BOC/PR ± PR12
➜ Le BOC améliore significativement les chances de guérison par rapport au
retraitement par SOC
Bacon et al., AASLD 2010, Abstract 216.
38. Hépatite C : virus et marqueurs
RESPOND-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients en échec Thérapeutique de G1 : RVS
Selon la Réponse Antérieure
Répondeurs partiels
RR
Proportion de patients (%)
2/29 15/51 23/57 72/105 30/58 77/103
Lead‐in +
32 BOC/PR ± PR12
Bacon et al., AASLD 2010, Abstract 216.
39. Hépatite C : virus et marqueurs
RESPOND-2—BOC + PegIFN + RBV chez des
Patients en échec Thérapeutique de G1 : RVS
Selon la Réponse à S4
p <0,0001
p <0,0001
Proportion de patients (%)
Diminution de l’ARN <1 Log10
Diminution de l’ARN ≥1 Log10
17/66 15/46 80/110 15/44 17/66
Lead‐in +
32 BOC/PR ± PR12
➜ Intérêt de la phase de Lead-in comme facteur prédictif de la RVS
Bacon et al., AASLD 2010, Abstract 216.
40. Hépatite C : virus et marqueurs
REALIZE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients en Echec Thérapeutique de G1 : Design
de l’Etude
S4 S8 S12 S16 S48 S72
48 PR PR + placebo PR Suivi
n = 130
PR
n = 260 PR + TVR (Ll) PR Suivi
PR
n = 260
(LI) PR + TVR PR Suivi
*TVR 750 mg q8h; pegIFN alfa-2a 180 µg/s; RBV 1000-1200 mg/j adaptée au poids.
Press release, Sept 2010.
41. Hépatite C : virus et marqueurs
REALIZE—TVR + PegIFN + RBV chez des
Patients en Echec Thérapeutique de G1 : RVS
Proportion de patients
PR48 (n=130)
ayant une RVS (%)
T12/PR48* (n=520)
*Bras poolés
Press release, Sept 2010.
42. Hépatite C : virus et marqueurs
TMC435 Administré en Monothérapie chez
des Patients de Génotype 2, 3, 4, 5 et 6
Diminution moyenne de l’ARN
du VHC (Log UI/mL)
J3
J7
Manns et al., AASLD 2010, Abstract 82.
43. Nouvelles Hépatite C : virus et marqueurs
Protéine NS5B: RdRp
Lesburg et al., Nat struct Biol 1999, 6: 937‐943; Bressanelli et al., Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96: 13034‐13039; Ago et al., Srructure Fold Des 1999, 7:
1417‐1426.
44. Hépatite C : virus et marqueurs
Réplication Virale
– Modèle du poliovirus
. Virus à ARN monocaténaire
de polarité positive
Réplication
De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001‐18
45. Hépatite C : virus et marqueurs
Variabilité Génétique
• Erreurs au cours de la réplication
– Fréquentes
• 10-4-10-4 mutations par nucléotide copié au cours de la réplication du VHC
– Spontanées
– Au hasard
• Absence d’activité exonucléasique 3’⇒5’
("proofreading")
– Accumulation de mutations
• A l’origine de :
– La diversification des types et des sous-types
– La distribution en quasi-espèces
46. Hépatite C : virus et marqueurs
Diversification des Génotypes
Simmonds et al., Hepatology 2005, 42(4):962‐73.
47. Hépatite C : virus et marqueurs
Distribution des Génotypes
1a,
Adapted from Fang J., et al. J. Clin Liver Dis. 1997.
48. Hépatite C : virus et marqueurs
Distribution en Quasi-espèce
Weiner et al., Virology 1991; 180:842‐848; Martell et al., J Virol 1992;66:3225‐36.
55. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Marqueurs Virologiques
Marqueurs indirects
Anticorps anti-VHC totaux
Marqueurs directs
Ag de capside (AgC)
ARN VHC
Génotype VHC
Profil de résistance
56. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Tests Sérologiques
• Détection et quantification de l’Ag de
capside
• Test “Combo”
– Détection simultanée de l’Ag de capside et des
anticorps anti-VHC
• Détection des anticorps anti-VHC à l’aide
d’une trousse de 3ème génération
57. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Antigène de Capside : un
Marqueur de la Réplication
r = 0.92; p < 0.0001
Bouvier‐Alias et al., Hepatology 2002, 36(1): 211‐218.
58. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Performances Analytiques de la
Trousse Architect (Abbott)
• Spécificité
– 99,2% à 100%
• Sensitivité
– ≤10 fmol/L (i.e 500 to 3 000 UI/mL d’ARN VHC)
– Tous les génotypes (excepté génotype 2)
• Intervalle de quantification
– 10 à 20 000 fmol/L (≤ 7,8 Log10 UI/mL d’ARN
VHC)
• Stable à 37°C pendant 96 heures
Ross et al., J Clin Micribiol 2010, 48(4): 1161‐8; Mederacke et al., J Clin Virol 2009, 46(3): 210‐5; Miedouge et al., J Clin Virol 2010, 48(1):18‐21.
59. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Trousse Architect : Monitoring
des Cinétiques Virales
RVR (G1b) SVR (G1b)
Relapser (G1b) NR (G1a)
Core Ag
RNA
Ross et al., J Clin Microbiol 2010, 48(4): 1161‐8.
60. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Intérêts Cliniques de la
Quantification de l’AgC
• Diagnostic de l’infection
– Trousses commerciales
– Facile à utiliser, automatisée, peu couteux (20% par
rapport à une charge virale VHC)
• Décision de traiter et suivi de l’efficacité des
traitements antiviraux
– Quantitatif (≤20,000 fmol/L*)
– Alternative aux techniques de détection quantification
de l’ARN du VHC
(*Abbott Architect HCV Ag Assay)
61. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Tests Virologiques Moléculaires
Tests qualitatifs Tests quantitatifs
Très sensibles Seuil de détection ≥ qualitatifs
(≤ 50 IU/mL)
Quelle quantité est présente ?
Est-ce que le VHC est présent ?
Détermination Détection de la résistance
du Génotype
Quel est le génotype du virus ? Quel type de VHC est présent ?
62. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Tests Virologiques Moléculaires
Tests Qualitatifs-Quantitatifs
Est-ce que le VHC est présent et en quelle quantité ?
Détermination Détection de la résistance
du Génotype
Quel est le génotype du virus ? Quel type de VHC est présent ?
64. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Avantages Techniques de la PCR
en Temps Réel
- Diminution du risque de contamination
- Amélioration de la sensibilité
- Augmentation de l’intervalle de
quantification linéaire
- Amélioration précision et reproductibilité
- Augmentation de débit à travers
l’automatisation
67. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Avantages Cliniques de la PCR
en Temps Réel
• Remplace les techniques qualitatives de
détection de l’ARN VHC
• Quantifie l’ensemble des charges virales
observées en pratique clinique
– Charges élevées préthérapeutiques
– Faibles charges virales au cours du traitement
• Surveille efficacement les cinétiques
virales (évaluation précoce des réponses
virologiques au traitement)
72. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Quantification ARN du VHC
(kPCR, Siemens)
132 clinical samples
David Sherman., Molecular Symposium, September 2007 (source: Siemens Medical Solutions Diagnostics).
73. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Résumé
• En pratique clinique, la quantification
de l’ARN du VHC doit être réalisée à
l’aide d’une technique de PCR en
temps réel
– Avec une limite de détection de l’ordre de
10 à 15 UI/mL
75. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Répartition des Génotypes
1a,
Adapted from Fang J., et al. J. Clin Liver Dis., 1997.
76. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Détermination du Génotype
• Méthodes moléculaires (genotyping)
– Analyse de la séquence après séquençage direct
– Hybridation inverse des produits d’amplification sur
des supports solides comportant des sondes
génotype sépcifique : Line Probe Assay (INNO-LiPA
HCV, Innogenetics)
– PCR en temps réel à l’aide d’amorces et de sondes
génotype spécifique
• Méthodes sérologiques (“serotyping”)
– ELISA compétitif
Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29; Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; Lareu et al., 1997; Le Pogam et al., 1998; J Clin
Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15.
77. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Détermination du Génotype
• Méthodes moléculaires (genotyping)
– Analyse de la séquence après séquençage direct
– Hybridation inverse des produits d’amplification sur
des supports solides comportant des sondes
génotype sépcifique : Line Probe Assay (INNO-LiPA
HCV, Innogenetics)
– PCR en temps réel à l’aide d’amorces et de sondes
génotype spécifique
• Méthodes sérologiques (“serotyping”)
– ELISA compétitif
Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11‐29; Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197‐204; Lareu et al., 1997; Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36:
1461‐3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810‐15.
79. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Intérêt de la Détermination du
Sous-Type ?
• Direct Acting Antivirals (DAAs) pourraient
avoir des efficacités antivirales différentes
selon les sous-types de VHC de génotype 1
in vitro et in vivo
• Le traitement par DAAs pourrait être associé
à des profiles de résistance différents selon
les sous-types de VHV de génotype 1 in vitro
et in vivo
81. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Profils de Résistance du Telaprevir
(PROVE-2 trial), in vivo
Génotype 1a Génotype 1b
Pt-1 Pt-2 Pt-3 Pt-4 Pt-5 Pt-6
R26K
V36L/M V36A V36A
T42S
A40T A40T
T54S T54S T54A
Y56F
T91A
R155K R155K R155K/E R155T/A
G174S
Chevaliez et al. International HIV&HEPATITIS VIRUS Drug Resistance Workshop and Curative Strategies 2010.
82. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Détermination du Sous-Type par
une Méthode de Référence*
*HCV genotype determination by means of phylogenetic analysis of a
portion of the gene encoding the NS5B region was used as the reference
method
Chevaliez et al., PLoS One 2009, 4(12): e820.
83. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Détermination du Sous-Type
1st Generation of Line 2nd Generation of Line
Sequence Analysis of RealTime HCV
Probe Assay Probe Assay
the 5’NCR Genotype II
(LiPA 1.0) (LiPA 2.0)
GT 1a 77.6% 70.5% 97.5% 93.2%
(n=237) (n=184) (n=167) (n=231) (n=220)
GT 1b 90.5% 91.3% 96.2% 88.6%
(n=263) (n=238) (n=240) (n=253) (n=233)
Chevaliez et al., PLoS One 2009, 4(12): e820.
84. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Résumé
- Dans les essais cliniques évaluant les DAAs et
probablement en pratique clinique, le détermination du
sous-type des souches de génotype 1 est nécessaire
pour la stratification et l’interprétation des profils de
résistance
- La détermination du génotype sur la seule région 5’NC
doit être proscrite
- La 2nd génération de Line Probe Assay qui utilise des
sondes dirigées contre la région core en plus de la
région 5’NC est la meilleure méthode permettant de
distinguer les sous-types 1a et 1b
85. Stratégie diagnostique & suivi virologique
IL28B “Single Nucleotide
Polymorphism” (SNP)
En amont du géne de l’IL28B, codant l’IFN-λ3
rs12979860
Ge et al., Nature 2009; 461: 399‐401.
86. Stratégie diagnostique & suivi virologique
RVS à la Bithérapie Standard en
Fonction du Génotype IL28B
Réponse virologique soutenue (%)
Caucasians African-Americans Hispanics Combined
(n=1171) (n=300) (n=116) (n=1587)
12 14
37% 37% 22% 29%
51% 49% 48%
Thompson et al., Gastroenterology 2010; 139(1): 120‐129.
87. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Résumé
- En pratique clinique, SNPs en amont du gène de
l’IL28B (rs12979860 et rs8099917) sont les facteurs
prédictifs les plus robustes de la RVS à la bithérapie
- Cependant, leur valeur prédictive à l’échelon
individuel n’est pas suffisante pour la prise en compte
dans les décisions thérapeutiques
- La détermination du génotype IL28B en association à
d’autre paramètres, comme la réponse virologique à
S4, pourrait être utile pour adapter le traitement,
éventuellement des patients sous triple combinaison
Ge et al., Nature 2009; 461: 399‐401; Tanaka et al., Nat Genet 2009; 41(10): 1105‐9; Afdhal et al, Hepatology in press.
88. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Intérêts des Tests Virologiques
en Thérapeutique
• Décision de traiter
• Optimisation du schéma
thérapeutique
• Etude de la réponse virologique au
traitement
Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303‐20
89. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Traitement de l’Hépatite
Chronique C
• Traitement standard
– Interféron pégylé alpha-2a or alpha-2b et
ribavirine à doses fixe ou adaptée au poids
• Durée de traitement
– 16 à 72 semaines en fonction du génotype et
de la réponse virologique
90. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Intérêts de la Détermination du
Génotype
• Détermination systématique du
génotype
– Facteur prédictif de la réponse au
traitement
– Conditionne
. La dose de ribavirine
. La durée du traitement
91. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Dose de Ribavirine
Proportion de patients avec RVS (%)
Ribavirine 0,8 g/j
Ribavirin 1,0 – 1,2 g/j
Hadziyannis et al., Ann Intern Med 2004;140: 346-355.
92. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Durée de Traitement
Proportion de patients avec RVS (%)
24 semaines
48 semaines
Hadziyannis et al., Ann Intern Med 2004;140: 346‐355.
93. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Intérêts de la Détection -
Quantification de l’ARN VHC
• Evaluation de la réplication virale chez des
patients anticorps anti-VHC positifs
• Evaluation de la réponse virologique au
cours du traitement pegIFN - RBV
– Réponse virologique rapide (semaine 4)
– Réponse virologique précoce (semaine 12)
– Réponse fin de traitement (EoT)
– Réponse virologique soutenue (semaine 24 post-Rx)
94. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Réponses au Traitement en
Fonction des Cinétiques Virales
SOC
+1
0
HCV RNA reduction from
baseline (Log10 IU/mL)
-1
-2
Diminution ≥ 2 Log
-3
-4
-5
Detection cut-off
-6 (10-15 IU/mL)
0 4 8 12
Semaines
95. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Réponse Virologique Précoce :
Facteur Prédictif de la RVS
EoT
RVS
Rechute
Diminution >2 Log ou Diminution <2 Log à S12
ARN indétectable à S12
Adapted from Ferenci et al., J Hepatol 2005, 43: 425‐433.
96. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Réponses au Traitement en
Fonction des Cinétiques Virales
SOC
+1
0
HCV RNA reduction from
baseline (Log10 IU/mL)
-1
-2 Diminution ≥ 2 Log
-3
-4
Slow VR
-5 RVR
RVP Detection cut-off
-6 (10-15 IU/mL)
0 2 4 8 12
Semaines
97. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Taux de RVS
ViraferonPeg 1.5µg/kg/w + RBV 1000-1400 mg/d
ViraferonPeg 1.0µg/kg/w + RBV 1000-1400 mg/d
PegIFN alpha-2a 180µg/w + RBV 1000-1200 mg/d
SVR
542/1019
667/1035
406/1019
386/1016
500/1016
423/1035
227/300
234/292
250/355
68/156
72/203
77/157
38/42
33/41
62/83
43/45
37/44
64/72
Week to first undetectable HCV RNA
Semaines avec un ARN du VHC indétectable
McHutchinson et al., New Engl J Med 2009, 361(6): 580‐593.
99. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Longer Treatment Duration
Genotype 1 and 4, Slow virological responders
>2 Log drop at week 12, but detectable HCV RNA
48 weeks
72 weeks
Rate of relapse (%)
p<0.01
p<0.05
16/72 11/81 20/35 9/29
HCV RNA <50 IU/mL HCV RNA >50 IU/mL
Ferenci et al., Gastroenterology 2010, 138: 503‐512.
100. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Shorter Treatment Duration
• A recent meta-analysis suggested that
– In patients infected with HCV genotype 1 with
an RVR, 24 weeks of therapy with SOC
should be considered only in subjects with
low baseline viral loads
– The optimal cut-off defining low baseline HCV
RNA level (400,000-800,000 IU/mL) is not
clearly defined
Moreno et al., J Hepatol 2010; 52: 25‐31.
102. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Shorter Treatment Duration
Genotype 2 and 3, Rapid virological responders
with a low baseline viral load (<400,000 IU/mL)
16 weeks
p=0.20 24 weeks
Rate of SVR (%)
111/122 95/100
Diago et al., Hepatology. 2010; 51(6): 1897‐903.
103. HCV genotype
HCV-1 (4,5,6) HCV-2,3
RNA quantification
SOC SOC
48 weeks 24 weeks
Ribavirin (1000-1400 mg.d-1) Ribavirin (800 mg.d-1)
RNA quantification at W4
HCV RNA HCV RNA RNA quantification at W4
undetectable detectable
Consider HCV RNA HCV RNA
24 weeks RNA quantification at undetectable detectable
of therapy1 W12
Decrease ≥ 2 Log Decrease ≥ 2 Log
Decrease < 2 Log
HCV RNA detectable HCV RNA
undetectable
Continue Rx until
W24
If HCV RNA
Consider
Stop antiviral undetetectable Continue Rx
Continue Rx until 16 weeks
treatment Continue Rx Until until W24
W48 of therapy2
W72
1In patients with a low viral load at baseline (<400,000 IU/mL); 2In patients with a low viral load at baseline (400,000-600,000 IU/mL)
104. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Future HCV Therapy
• Future standard treatment
– Pegylated interferon alpha-2a or alpha-2b
– Ribavirin
– Specific inhibitor of the NS3/4A protease
. Telaprevir
. Boceprevir
105. Stratégie diagnostique & suivi virologique
ADVANCE Trial
Telaprevir, Naïve, Genotype 1
T12PR Follow‐up
TVR+PR PR
no eRVR
N = 363 PR Follow‐up
T8PR TVR Follow‐up
PR
no eRVR
N = 364 +PR PR Follow‐up
PR48 PR Follow‐up
N = 350
*eRVR = undetectable HCV RNA at week 4 and week 12
0 8 12 24 36 48 60 72
Jacobson et al., AASLD 2010, Abstract 211. Weeks on therapy
106. Stratégie diagnostique & suivi virologique
SVR Rates
p <0.0001
p <0.0001
Proportion of Patients
with SVR (%)
Jacobson et al., AASLD 2010, Abstract 211.
107. Stratégie diagnostique & suivi virologique
SPRINT-2 Trial
Boceprevir, Naïve, Genotype 1
BOC/RGT Follow‐up
VR
LI BOC+ PR
N = 368 PR Follow‐up
no VR
BOC/PR48 LI BOC + PR Follow‐up
N = 366
PR48 PR Follow‐up
N = 363
*VR = HCV RNA undetectable between weeks 8 and 24
0 4 12 24 28 36 48 60 72
Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB‐4. Weeks on therapy
108. How to use molecular techniques to optimize management of chronic heptitis C
Taux de RVS
p <0.0001
p <0.0001
Proportion of Patients
with SVR (%)
Poordad et al., AASLD 2010, Abstract LB-4.
109. Stratégie diagnostique & suivi virologique
Résumé
- Duration of triple therapy with pegylated IFN,
ribavirin and a protease inhibitor will be tailored
to the virological response at week 4 or earlier
- Response-guided therapy is associated with
high rates of SVR in genotype-1 treatment naïve
patients
- The ideal time points, frequency, and the
feasibility in real-life practice need to be further
evaluated
