Ejemplo Utilidad Enzimas

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Ejemplo Utilidad Enzimas

  1. 1. Querales Marvin Isaac Torres Jesús D. Universidad de Carabobo Facultad de Ciencias de la Salud Escuela de Bioanálisis Departamento de Estudios Clínicos Prácticas profesionales Especiales Trabajo de Investigación sobre metabolismo de Trypanosoma cruzi
  2. 2. Differential energetic metabolism during Trypanosoma cruzi differentiation. II. Hexokinase, phosphofructokinase and piruvate kinase. Francisco- Javier Androher, Antonio Osuna and José A. Lupiáñez Molecular and cellular Biochemestry 94: 71-82, 1990
  3. 3. Ciclo Evolutivo de Trypanosoma cruzi Orificio de la picada o lesión Prosbócide Piel o Mucosa Insecto Reduviidae Epimastigota Tripomastigotas metacíclicos en orina Penetración en célula Tripomastigota Amastigota Lisis celular Colonización de tejido muscular o neural Torrente saguíneo Nido de amastigotas Célula sanguínea Célula
  4. 4. Morfogénesis de Trypanosoma cruzi Proceso de transformación del Trypanosoma cruzi , el cual pasa de un estadio a otro con cambios morfológicos acentuados. Tripomastigota sanguícola Epimastigota Tripomastigota metacíclico Amastigota Epimastigogénesis Amastigogénesis Tripomastigogénesis Metaciclogénesis
  5. 5. Morfología de Trypanosoma cruzi Epimastigota Tripomastigota Amastigota
  6. 6. Metabolismo de Trypanosoma cruzi
  7. 7. Objetivos de la Investigación <ul><li>Investigar el desarrollo de la vía glicolítica tanto en Epimastigotas como en tripomastigotas metacíclicos </li></ul><ul><li>Determinación de pH, producción de amoníaco y consumo de glucosa durante la cinética de crecimiento. </li></ul><ul><li>Determinar la actividad enzimática de las enzimas reguladoras de la glicólisis: Hexokinasa, Fosfofructokinasa y Piruvato Kinasa. </li></ul>
  8. 8. Fase experimental Cepa de T. cruzi mantenida en medio NNN y MEM Epimastigotas Tripomastigotas Metacíclicos Medio Líquido libre de células de Boné y parent (8vo día) 9no día de crecimiento en el medio Grace’s insect (86%)
  9. 9. Fase experimental Masas Celulares Sobrenadante Resuspensión y homogeneizado Hexokinasa Fosfofructokinasa Piruvato Kinasa
  10. 10. Fase experimental Determinación de las concentraciones de glucosa, amoníaco y valores de pH Nota: se usó medio Grace’s Insect suplementado con 100 mM de NaCl y 10 % suero fetal bovino, obtienedo un (50-55% metacíclicos) pH Glucosa Amoníaco
  11. 11. Resultados Metaciclogénesis. Variaciones de Glucosa y Amoníaco en el medio de cultivo
  12. 12. Resultados Enzimas glicolíticas en Epimastigotas y tripomastigotas metacíclicos Hexokinasa
  13. 13. Resultados Cambios en los Parámetros Cinéticos Hexokinasa
  14. 14. Resultados Enzimas glicolíticas en Epimastigotas y tripomastigotas metacíclicos Fosfofructokinasa
  15. 15. Resultados Cambios en los Parámetros Cinéticos Fosfofructokinasa
  16. 16. Resultados Enzimas glicolíticas en Epimastigotas y tripomastigotas metacíclicos Piruvato kinasa
  17. 17. Resultados Cambios en los Parámetros Cinéticos Piruvato kinasa
  18. 18. Discusión <ul><li>La gran actividad de las enzimas glicosomales (hexokinasa y fosfofructokinasa) en los Epimastigotas pudiera deberse a la necesidad acelerada que tiene el parásito de obtener altas concentraciones de ATP en respuesta a la división Celular. </li></ul><ul><li>Los resultados sugieren la aparente existencia de una mecanismo de regulación coordinada por el cual se modula el metabolismo proteico </li></ul><ul><li>El número de glicosomas afecta la actividad de las enzimas hexokinasa y fosfofructokinasa, pero no de piruvato Kinasa </li></ul>
  19. 19. Discusión <ul><li>Los cambios en las actividades metabólicas durante la metaciclogénesis se pudieran deber a un fenómeno enzimático de inducción-represión en los organelos subcelullares dependiendo de las condiciones ambientales. </li></ul><ul><li>El conocimiento profundo de las enzimas glicosomales en el estado de tripomastigota metacíclico de T. cruzi , constituye una base fundamental para el diseño de nuevas drogas tripanosidas. </li></ul>
  20. 20. Muchas Gracias….

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