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UNIVERSITA’ degli STUDI di MILANO Facoltà di Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali Corso di Laurea in Scienze Biologiche...
CICLO  delle  PROTEINE  Ras
<ul><li>Topi  knock out  sono vitali e fertili e non mostrano difetti morfologici </li></ul><ul><li>Mostrano però alcune p...
Confronto del pattern proteico da estratti di cervelletto di topi wt verso topi ko per Ras GRF1 <ul><li>Frazionamento cell...
 
 
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PROTEINE CITOSOLICHE ANALIZZATE MEDIANTE MALDI-TOF
<ul><li>Conclusioni : </li></ul><ul><li>Analisi qualitativa mostra un numero molto ridotto di proteine  </li></ul><ul><li>...
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Tesi di Laurea*Facoltà di Scienze Matematiche Fisiche e Naturali*Corso di Laurea Scienze Biologiche

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Studio dell"espressione proteica in cervelletto di topo wild type e knock out per Ras-GRF1, uno scambiatore neuronale di Ras

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Tesi di Laurea*Facoltà di Scienze Matematiche Fisiche e Naturali*Corso di Laurea Scienze Biologiche

  1. 1. UNIVERSITA’ degli STUDI di MILANO Facoltà di Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali Corso di Laurea in Scienze Biologiche DIPARTIMENTO DI SCIENZE BIOMOLECOLARI E BIOTECNOLOGIE Studio dell’ espressione proteica in cervelletto di topo wild type e knock out per Ras-GRF1, uno scambiatore neuronale di Ras
  2. 2. CICLO delle PROTEINE Ras
  3. 3. <ul><li>Topi knock out sono vitali e fertili e non mostrano difetti morfologici </li></ul><ul><li>Mostrano però alcune peculiarità: </li></ul><ul><li>Difetti nei fenomeni di plasticità sinaptica e nei meccanismi di formazione </li></ul><ul><li>della memoria a lungo termine </li></ul><ul><li>2. Cellule ippocampali di topi knock out mostrano un’aumentata eccitabilità neuronale intrinseca </li></ul><ul><li>3. Topi knock out sono maggiormente suscettibili a trattamenti con agenti </li></ul><ul><li>convulsivanti </li></ul><ul><li>Topi knock out sottoposti a trattamento cronico con cannabinoidi non </li></ul><ul><li>sviluppano tolleranza nei fenomeni analgesici e locomotori </li></ul>TOPI KNOCK OUT PER Ras-GRF1
  4. 4. Confronto del pattern proteico da estratti di cervelletto di topi wt verso topi ko per Ras GRF1 <ul><li>Frazionamento cellulare attraverso centrifugazioni differenziali in tre estratti: </li></ul><ul><li>- citosol  S1 </li></ul><ul><li>- mitocondri  P1 </li></ul><ul><li>- Microsomi/membrane  P2 </li></ul><ul><li>Mediante frazionamento è possibile arricchire l’estratto in proteine </li></ul><ul><li>specifiche per una determinata frazione </li></ul><ul><li>Prima dimensione: IsoElettroFocalizzazione (IEF) pH 3-10 NL </li></ul><ul><li>Seconda dimensione : Elettroforesi su Gel di PoliAcrilammide </li></ul><ul><li>(SDS-PAGE) </li></ul><ul><li>Colorazione con nitrato d’argento (Silver Staining) </li></ul><ul><li>Acquisizione immagini (Image Master 2D Platinum) </li></ul><ul><li>Analisi dei dati. </li></ul>Scopo: <ul><li>Gli esperimenti sono stati eseguiti su tre topi per ogni singola condizione. </li></ul>
  5. 7. WT
  6. 8. KO
  7. 9. PROTEINE CITOSOLICHE ANALIZZATE MEDIANTE MALDI-TOF
  8. 10. <ul><li>Conclusioni : </li></ul><ul><li>Analisi qualitativa mostra un numero molto ridotto di proteine </li></ul><ul><li>presenti in un caso ed assenti nell’altro. </li></ul><ul><li>Una delle proteine identificate mediante MALDI-TOF risulta </li></ul><ul><li>essere l’ enzima amminoacilasi 1 </li></ul><ul><li>Per gli altri spot siamo ancora in attesa dell’analisi di </li></ul><ul><li>spettrometria di massa </li></ul><ul><li>Prospettive future: </li></ul><ul><li>Analisi quantitativa: cambiamento del livello di espressione </li></ul><ul><li>proteico </li></ul><ul><li>Analisi funzionale delle proteine identificate </li></ul><ul><li>Studiare le differenze di espressione proteica fra topi </li></ul><ul><li>trattati cronicamente con THC </li></ul>

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