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Effect of gliclazide on nucleotide excision repair

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Effect of gliclazide on nucleotide excision repair

  1. 1. EFFECT OF GLICLAZIDE ON NUCLEOTIDE EXCISION REPAIR AND NON-HOMOLOGOUS DNA END JOINING IN NORMAL AND CANCER CELLSA. SLIWINSKA<br />Maria Fernanda Sánchez Rico<br />UPB – Medicina<br />2010<br />
  2. 2. Introduction<br />When NER fails…<br />Cancer is caused by the malignant proliferation of abnormal cells.<br />Cancerous tissue can destroy the healthy tissues of the body<br />NER is one of the DNA repair mechanisms<br />It involves 6 steps.<br />
  3. 3. Introduction<br /> efflux of potassium<br />Oral anti-diabetic drug<br /> insulin secretion<br />
  4. 4. Introduction<br />Failure of NER mechanism<br />CANCER<br />(-)<br />(+)<br />GLICLAZIDE<br />
  5. 5. General objective<br />Show the effect of gliclazide on DNA repair mechanisms in normal and cancer cells.<br />¿<br />?<br />
  6. 6. Materiales y Métodos<br />Células usadas<br />Cultivo de células pancreáticas humanas con carcinoma<br />Hombres (18-31 años), no fumadores<br />
  7. 7. Materiales y Métodos<br />NER:<br />Preparación de células: se cultivaron ambos tipos de células en condiciones ideales.<br />Preparación de plásmidos y tratamiento con UV: pBR322 (no dañado) ypBluescriptII KS fue tratado con luz UV (240nm)<br />10 lesiones<br />
  8. 8. Materiales y Métodos<br />NER:<br />3. NER in vitro: detección de reparación por monitoreo de unión de material radioactivo a los fragmentos reparados.<br />
  9. 9. Materiales y Métodos<br />PCR-Q: segmento de DNA mediante amplificación enzimática in vitro. <br />Usos: análisis huellas genéticas (forense), diagnostico prenatal, variaciones alélicas…<br /><ul><li>Cuantifica el producto de la amplificación del DNA.</li></li></ul><li>Materiales y Métodos<br />Unión terminal no homologa: <br />Preparación de extractos celulares:<br />
  10. 10. Materiales y Métodos<br />Unión terminal no homologa:<br />2. Preparación DNA: digestión de pUC19 con EcoRI<br />DNA plasmidico conservado con TE.<br />
  11. 11. Materiales y Métodos<br />Unión terminal no homologa:<br />3. Ensayo de unión terminal: detección por fluorescencia de productos reparados.<br />
  12. 12. Resultados<br />ANALISIS DE<br />NER<br />Gris: tratadas<br />Negro: no tratadas<br />
  13. 13. Resultados<br />Blanco: tratada<br />Negro: no tratada<br />EFICACIA DE REPARACION EN GEN p53<br />
  14. 14. Resultados<br />EFICACIA DE REPARACION EN GEN p53<br />No irradiada<br />Gliclazida no irradiada<br />Después de irradiación<br />Gliclazida después de irradiación<br />Irradiada después de 2h incubación<br />Irradiada, gliclazida 2h después<br />Irradiada después de 4h<br />Irradiada, gliclazida 4h después<br />Irradiada después de8h<br />Irradiada, gliclazida 8h después<br />Irradiada después de 24h<br />Irradiada, gliclazida después de 24h<br />
  15. 15. Resultados<br />Gris: tratadas<br />Negro: no tratadas<br />UNION TERMINAL NO HOMOLOGA<br />Control (-)<br />Control (+)<br />DNA cortado + linfocitos<br />DNA cortado + linfocitos + gliclazida<br />DNA cortado + PANC1<br />DNA cortado + PANC1 + gliclazida<br />L: DNA lineal<br />D: dímero<br />T: trímero<br />HM: tetrámero y moléculas de alto peso<br />
  16. 16. Discussion <br />
  17. 17. Conclusions<br />Type 2 diabetes mellitus increases DNA damage and reduces the efficacy of DNA repair mechanisms.<br />Gliclazide decreases the risk of cancer in type 2 diabetic patients.<br />The effect of gliclazide is only shown on cancer cells.<br />Gliclazide has no effect on non homologous end joining repair mechanism.<br />
  18. 18. Mapa conceptual<br />
  19. 19. THANK YOU!<br />

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