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Se estima que los organismos del reino de los protistas pertenecientes al superfilo protozoa(protozoarios) [reino protista...
Figura No. 4.5 Morfología de un ciliado        Phylum: Apicomplexa        Clase Sporozoa: son protozoarios que carecen de ...
Se tomarán dos gotas del cultivo de amoebas proporcionado por el catedrático con la ayuda de una pipetaPasteur o un gotero...
Dado que esta es una preparación permanente, el cultivo ha sido coloreado y fijado, por lo que la          apariencia de l...
d.2 Realiza el dibujo de los especímenes encontrados en una de las preparaciones permanentes.Anotará la observación y la e...
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  1. 1. PRACTICA No. 4 “OBSERVACIÓN Y ESTUDIO DE PROTOZOARIOS”.A. OBJETIVOS ESPECIFICOS a.1.- El alumno conocerá y aplicará diversas técnicas para el estudio, observación e identificación deprotozoarios, con el propósito de desarrollar habilidades destinadas al reconocimiento de protozoarios parásitosde los animales domésticos.B.- MATERIAL Y EQUIPO A UTILIZAR b.1. Microscopio compuesto b.2. Cultivo de Paramecium sp. b.3. Cultivo de Amoeba de vida libre b.5. Aceite de inmersión b.6. Pipetas Pasteur y goteros de vidrio b.7. Porta objetos y cubre objetos de vidrio b.8. Papel tisú para limpieza de objetivos b.9. Láminas de ilustración de protozoarios b.10. Catálogo de hemoprotozoarios b.11. Laminillas permanentes de protozoarios b.12. Estuche de colores y material de dibujo b.13. Recuperación del conocimiento sobre protozoariosC.- PROCEDIMIENTOS c.1. INTRODUCCION Los Protozoarios son organismos unicelulares del reino protista. Normalmente son microscópicos ymuestran semejanzas en la mayoría de los casos con estructuras fundamentales de las células eucarióticas,pero también tiene muchas características fisiológicas y morfológicas, tanto individuales como colectivas, quele son propias y que generalmente no se encuentran en células de metazoos y metafitos. A pasar de susimplicidad los protozoarios han tenido un notable éxito en la naturaleza, sus adaptaciones les han permitido lainvasión de muy diversos hábitats. Los protozoarios se encuentran en el suelo y en todas clases de agua, tantodulce como marina, en todas las regiones climáticas donde haya temperaturas superiores al punto decongelación. Contribuyen a todos los niveles tróficos de las comunidades que habitan. Figura No. 4.1 Protozoarios diversos Algunos son productores fotosintéticos, enriqueciendo el medio con compuestos orgánicos, algunosabsorben alimento a través de la superficie del cuerpo, contribuyen a la reducción de los retos de plantas yanimales; otros se alimentan de microorganismos microscópicos o descomponedores, actúan como 22
  2. 2. consumidores primarios y colaborando a evitar el aumento de estas poblaciones. Algunas especies deprotozoarios viven parasitando y causando graves enfermedades en el hombre, así como en los animalesdomésticos y silvestres, desde las abejas hasta el ganado vacuno. Los protozoarios son eucarióticos es decir con un núcleo encerrado en una membrana, el cual seencuentra en el interior del citoplasma. La porción más interna de los protozoarios es el endoplasma y es laparte que rodea al núcleo, está compuesto de protoplasma que es un coloide en el que se puede encontrar;lisosomas, vacuolas con material alimenticio sin digerir, mitocondrias, aparato de Golgi, ribosomas y retículoendoplásmico. Cubriendo el endoplasma se encuentra el ectoplasma, el cual es menos granuloso y máshomogéneo. El ectoplasma funciona como aparato locomotor, sirve para la presión o captura e ingestión de losalimentos y como órgano respiratorio, elimina los productos de catabolismo expulsándolos y protege alprotozoario. Cubriendo al ectoplasma se encuentra la membrana plasmática, la cual controla la entrada y salidade alimento, excreciones y secreciones, mantiene una concentración normal de la sustancia citoplásmica,tornándose permeable a ciertas sustancias. En algunos protozoarios como Histomona meleagridis o lasamibas no tienen una forma constante y cambian frecuente. En otros su contorno es más o menos constante. Los protozoarios presentan tres tipos de organelos locomotores. La clasificación de los protozoarios sedebe en gran parte a la clase y distribución de estas partes locomotoras. Los seudópodos son proyeccionesprotoplasmicas transitorias de la superficie del cuerpo. Los flagelos son estructuras como látigos que batenimpulsando a los flagelos en el seno del agua. La envoltura externa del flagelo es una continuación de lamembrana plasmática, en su interior presentan 11 fibrillas. El flagelo se origina del blefaroplasto, que tiene lamisma estructura fina que el centríolo de las células animales. En algunos flagelados, el blefaroplasto actúacomo centro organizador del huso mitótico del núcleo en división, funcionando así como centríolo y como basede los flagelos, además tienen cerca el DNA de una mitocondria que se tiñe basofilamente y recibe el nombre decuerpo parabasal. El blefaroblasto y el cuerpo parabasal forman el Kinetoplasto. Los cilios se presentan engrandes cantidades en la superficie de algunos protozoarios y presentan la misma estructura básica del flagelo,únicamente son más pequeños y no se originan de blefaroplastos. Figura No. 4.2 Tipos estructurales de los protozoarios En ciertos flagelos como Tripanosoma y tritrichomonas, existe una membrana muy delicada que seextiende hacia fuera del cuerpo y un flagelo que bordea su margen exterior, cuando esta membrana vibra,muestra un movimiento ondulante característico llamada membrana ondulante. El complejo apical es unorganelo que presentan los protozoarios del phylum apicoplexa en al menos alguno de sus estadios. Esteorganelo se encuentra en la parte anterior del cuerpo, esta formado por un conoide, anillos polares, roperías,toxonemas, micronemas y fibras subpeliculares. Los protozoarios usan tres métodos principales para obtener alimento, algunos son autótrofos,sintetizando compuestos orgánicos a partir de compuestos inorgánicos obtenidos del medio externo. Otros sonheterótrofos, requiriendo para nutrirse alimento orgánico disuelto en el medio externo. Por ultimo otros sonholozoicos alimentándose de productos orgánicos sólidos. 23
  3. 3. Se estima que los organismos del reino de los protistas pertenecientes al superfilo protozoa(protozoarios) [reino protista] suman aproximadamente unas 25000 especies. Por razones prácticas se utilizarala clasificación antigua de acuerdo al Código Internacional de Nomenclatura Zoológica: Phylum: Sarcomastigophora Clase: Rizopoda: sus movimientos y alimentación es por medio de seudópodos, se reproducen porfusión binaria y por multiplicación en las especies que presentan fase quístita. Las especies parásitas ycomensales pertenecen al orden Amoebina y a la familia Amoebidae. Figura No. 4.3 Morfología de una amoeba Clase: mastigophora o Flagellata; sus movimientos son por medio de uno o dos flagelos, algunasespecies presentan fase quistica y otros estadios evolutivos deferentes incluso con localizaciones muy variadas,en esta clase se concentran mas las especies parásitas y comensales. Figura No. 4.4 Morfología de un flagelado Phylum: Ciliophora Clase: Ciliata; estos se mueven por medio de cilios se caracterizan por poseer un núcleo vegetativo ómacronúcleo y un micronúcleo que es germinativo. Se multiplica por fusión binaria transversal. La mayoría de lasespecies tienen vida libre y solo existe una parásita la cual coincide con que es la mas grande especie deprotozoario que parásita al hombre y a los animales. 24
  4. 4. Figura No. 4.5 Morfología de un ciliado Phylum: Apicomplexa Clase Sporozoa: son protozoarios que carecen de órganos de locomoción, viven dentro y fuera de lascélulas del huésped, se alimentan por medio de la absorción y su reproducción implica fenómenos más o menoscomplicados. Entre ellos existen especies mucho muy patógenas para los animales y el hombre. Figura No. 4.6 Morfología de esporozoarios Para el estudio e investigación experimental de estos protozoarios y de muchos otros parásitos, seutilizan diversas técnicas, que en su mayoría apoyan el diagnostico de las parasitosis, lo cual se estudiará en7mo. Semestre, y si bien en la generalidad de los laboratorios de diagnóstico no se utilizan con frecuencia, estasson importantes para incrementar el conocimiento sobre el comportamiento de los parásitos. En el presentecurso, solo se abordarán las técnicas de observación para estimular el proceso educativo significativo de losprotozoarios. c.2. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS RIZOPODOSCon la recuperación del conocimiento de lo aprendido en la práctica No. 1 referente al manejo del microscopio, yel estudio sobre los rizópodos, se observarán preparaciones vitales de amoebas en cultivos de arroz. Dichocultivo ha sido desarrollado previamente a la presente práctica y forma parte del acervo cultural del catedrático;sin embargo, el alumno interesado en el desarrollo extraclase de estas técnicas, deberá seguir la bibliografíaconsultada, consultar con el catedrático de ésta materia o en su defecto, consultar la páginahttp://faunatec.spaces.live.com 25
  5. 5. Se tomarán dos gotas del cultivo de amoebas proporcionado por el catedrático con la ayuda de una pipetaPasteur o un gotero, procurando tomar muestras del líquido de las paredes o el fondo del recipiente del cultivo,ya que hay que recordar que las amoebas se encuentran sobre el sustrato y no “nadando”.Estas gotas del cultivo se colocan en el centro de un portaobjetos, al cual se le dejará caer un cubreobjetoscomo se ilustra en la figura No. 4.7 Figura No. 4.7 Colocación del cubre objeto sobre la muestra de cultivo de amoebasEl estudiante iniciará la observación con el objetivo de 10x siguiendo una ruta sobre el cubreobjetos similar a laindicada en la figura No. 4.8, hasta encontrar alguna estructura parecida a la figura 4.3 y manipulará el revolverdel microscopio para observar con el objetivo de 40x los movimientos amiboideos. Se debe tener en cuenta quelos especimenes observados son ejemplares vivos y que no se han coloreado, por lo que las estructurasparecerán semitransparentes. Deberá identificar el núcleo y los seudópodos principalmente y buscará laposibilidad de ver quistes amiboideos. Figura No. 4.8 Trayectoria a seguir en la búsqueda de especímenes en la laminilla c.3. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS FLAGELADOS Con la recuperación del conocimiento previo sobre los flagelados, el alumno realizara la observación de una preparación permanente de Trichomona sp. obtenidas de un cultivo sanguíneo de ratón, lo que es de considerar, ya que se observarán eritrocitos, y entre estos: las Trichomonas que suelen ser mas grandes. 26
  6. 6. Dado que esta es una preparación permanente, el cultivo ha sido coloreado y fijado, por lo que la apariencia de los especímenes puede estar alterada; no obstante, los protozoarios podrán verse transparentes en un medio azuloso de contraste (los protozoarios no se tiñen, solo sus núcleos), destacándose la membrana ondulante, el axostilo y algunas trazas de los flagelos (estos suelen ser destruidos por el proceso de fijación). Una vez localizado el espécimen con el objetivo de 10x, se deberá girar al de 40x para la identificación de las estructuras básicas. En todo momento se podrá consultar con el catedrático o auxiliar del laboratorio. c.4. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS CILIADOS Con la recuperación del conocimiento previo sobre los ciliados, el alumno procederá a realizar la observación de una preparación vital de Paramecium sp. obtenido de un cultivo de infusión de chícharo o equivalente. El procedimiento es similar a la observación de amoebas. c.5. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS ESPOROZOARIOS Con la recuperación del conocimiento previo sobre los esporozoarios, el alumno procederá a realizar la observación de preparaciones permanentes de Toxoplasma gondii, Haemoproteus columbae y Eimeria tenella. El procedimiento es similar a la observación de Trichomona sp., con la diferencia de que en estos casos se podrá utilizar el objetivo de inmersión (100x), con el consecuente uso de aceite de inmersión, toda ves de que se trata de parásitos intracelulares.D.- EJERCICIOS. d.1 Realiza el dibujo de especímenes encontrados en una de las preparaciones vitales. Anotará lo observado y las experiencias. 27
  7. 7. d.2 Realiza el dibujo de los especímenes encontrados en una de las preparaciones permanentes.Anotará la observación y la experiencia. 28

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