Una presentación realizada a manera de introducción antes de abordar el tema de linfomas. Donde se tratan aspectos básicos de histología, de la toma de biopsia y el manejo adecuado de esta, y los conceptos básicos de inmunohistoquímica y su utilidad en el diagnóstico de linfomas

1. Ganglio linfático
Histología,biopsia e
inmunohistoquímica básica
Dr. Luis Humberto Cruz Contreras
Hospital General
Morelia, Mich

2. Ganglio linfático - anatomía

3. Ganglio
linfático
Centro
germinal
Manto

4. Centro
germinal
• Blastos (centroblastos y
centrocitos)
• Macrófagos de cuerpos
teñibles
• Células dendríticas
foliculares (capturar y
preservar antígenos para
presentación)
Zona del Manto
• Linfocitos pequeños NO
estimulados (folículos
primarios)
Zona Marginal

5. Paracorteza
LinfocitosT
Células
interdigitantes
reticulares
Vénulas de
endotelio
ALTO

6. Ganglio
linfático
Manejo
Toma de biopsia y manejo SUBOPTIMO
• Diagnóstico correcto
• Diagnóstico oportuno
• MANEJO -
Toma de Biopsia
• Selección
• Disección COMPLETA
• NO fragmentos

7. Ganglio
linfático
BAAF
UTILIDAD BAAF
•Separar carcinoma vs Linfoma
•Detectar recurrencias
•Estadificación
•Diagnóstico de LINFOMA …
NO!!

8. Ganglio
linfático
MANEJO
PATOLOGÍA
Fijación
• 10 veces el volumen en formol
• REBANAR
• FIJACIÓN 24 HRS
• Se puede realizar citología por
impronta
• Tejido fresco sin fijar para biología
molecular, citometría de flujo

9. Ganglio
linfático
PROCESO
HISTOLÓGICO
CORTES 3-5 MICRAS
•Tinción HE
•Giemsa –Wright
•PAS - Inmunoglobulinas
•Reticulina

10. Gangio
linfático
IHQ
INMUNOHISTOQUÍMICA
• Estándar en muchas partes
• CONFIRMATORIA, No Dx
• Diagnóstico PRECISO
• ¿ Costo?
Trivial, ante la necesidad de Dx
preciso y los costos deTratamiento

11. Gangio
linfático
IHQ
INMUNOHISTOQUÍMICA
• Control de Calidad –Testigos
• Buscar testigos internos…
UN CORTE UNIFORMEMENTE
AZUL…. NO SIRVE

12. Ganglio linfático
PREGUNTAS
INICIALESY
GENERALIDADES
¿Es un linfoma?
• CD45, EMA, PS100, HMB45
CD45, LCA (Leucocyte common antigen)
• Presente en casi todos los linfocitos
• AUSENTE,
• Precursores de linfocitos (linfomas linfoblástico)
• Linfoma anaplásico (Puede ser positivo para
EMA, pero no otras citoqueratinas)
• Células Reed Stenberg / Hodgkin

13. ¿Linfoma B?

14. ¿Linfoma B?
Inmunoglobulinas
• Células B = Capacidad de secretar Ig
• Retículo endoplásmico –
Paranuclear (Golgi positivo)
• Clonalidad –Monotípico
• Solo un tipo de cadena ligera
(RESTRICCIÓN DE CADENAS
LIGERAS)

15. CD20 (L26)
Fosfoproteína
NO glucosilada
de Membrana
Membrana de células B
• NO ES PERFECTO
• No se expresa en etapas tempranas
• NO se expresa cuando comienzan la
diferenciación a cél. plasmática
MEMBRANA
• Núcleo, nucléolo, citoplasma =
NEGATIVO

16. CD79a
Glicoproteínade
membranaque
se asocia con las
Ig
CITOPLASMA DE
células B
• SE UNE A CADENA alfa de Ig
• Marcador casi perfecto
• Todas las etapas de
Diferenciación
• 50% Linfomas linfoblásticosT

17. Otros marcadores…

18. CD5
Glicoproteina
de membrana
cél.T
Expresado en célulasT
• De manera más débil en
LINFOMA LINFOCÍTICO DE
CÉLULAS PEQUEÑAS
• LEUCEMIA LINFOCÍTICA
CRÓNICA
• LINFOMA DE CÉLULAS DEL
MANTO

20. • COMMON ACUTE LINFOBLASTIC
LEUKEMIAANTIGEN
• CENTRO GERMINAL
• Linfomas con origen en centro
germinal : FOLICULAR, DIFUSO
DE CÉL. GRANDES, BURKITT
• Linfomas / Leucemias
linfoblásticos B yT
CALLA
CD10
Endopeptidasa
Neutralde
superficie(Zinc
Dep)

21. CD23
Glicoproteína
de membrana
Células B activadas
• Ganglios reactivos centro germinal y
zona del manto
• CÉLULAS DENDRITICAS FOLICULARES
LINFOMA linfocítico de cél.
Pequeña / LLC
• Marcador útil de este linfoma

22. CiclinaD1
Ch 11q13
Reg.Ciclo celular
Translocada en
• LINFOMA DE CÉL. DEL MANTO
• Leucemia de cél. peludas
• Tinción NUCLEAR, en citoplasma
es negativa
Control Interno
• CÉLULAS ENDOTELIALES

23. Bcl-2
Proteína de
membrana
mitocondrial
Regula apoptosis
• Ch18q21
• Translocación 14:18
• LINFOMA FOLICULAR
Utilidad
• Tej. Reactivos : Linfocitos B yT pequeños
• Negativa en centro germinal normal
• POSITIVA EN LINFOMA FOLICULAR!!!!
• Reactivo vs folicular

24. Bcl-6
Factor represor
transcripción
dep.ZINC
Expresa centro germinales reactivos
• Ch3q27
• LINFOMA FOLICULAR, LINFOMA
DIFUSO, LINFOMA BURKITT
• Tinción NUCLEAR
Utilidad
Origen de centro germinal

25. CD3
glicoproteína
asociadaa
receptor de cél.T
Marcador de célulasT
• Pérdida de este marcador
• SOLO 25% de linfomasT
• Tinción membrana
Utilidad LIMITADA
• No es el marcador ideal

26. CD5 Marcador EXCELENTE DE CÉL.
T!!
• Casi todos los linfomasT
• Tinción Membrana FUERTE
CUIDADO!!!
• Linfoma linfocítico de cel. Pequeña / LLC
y MANTO
• Tinción débil
• Diferencial: CD20 y CD79a

27. Otros
CD1a
• Timocitos corticales y CÉL. LANGERHANS
CD4
• LinfocitosT Cooperadores
CD8
• LinfocitosT citotóxicos
CD45RO
• Marcador LinfocitosT (Sustituido actualmente por CD3 y CD5)
CD43
• Sialophorina de Membrana, célulasT, B
• NEOPLASIA GRANULOCÍTICAS INDIFERENCIADAS

28. CD56
células NK
CD56 / NCAM
• Neural cell adhesión molecule ….
Identificada en cerebro
• Tumores neuroectodérmicos
• Células Natural Killer (2 tipos)
• CélulaT NK
• Célula NK-
CD57
• Algunos linfocitos normales periféricos y
algunas células NK

29. TdT
Terminal
dioxynucleotidyl
transferasa
PRECURSORES LINFOIDES
BYT
• DNA polimerasa intranuclear que
cataliza la unión de
dioxidonucleótidos
• Linfoma / Leucemias linfoblásticas
• NO Leucemia mieloide
TINCIÓN NUCLEAR
• Presente en 1-2% linfocitos MO
• Timocitos corticales

30. CD30 Familia de factor de necrosis tumoral =
activación
• Tinción membranosa y paranuclear
• Tinción difusa = NEGATIVO
Expresión
• Células reactivas parafoliculares (blastoides)
• LINFOMA ANAPLÁSICO
• CÉLULAS DE REED-STENBERG

31. CD15
Reconoce
sequencia de
azúcar
(haptenoX)
FINAL de diferenciación MIELOIDE
• NEUTRÓFILOS…Testigo interno
• MEMBRANAY CITOPLASMA
Células Reed-Sternberg / Hodgkin
• 70-80% Linfomas Hodgkin
• Débil : algunos linfomas B yT, Carcinomas
y células epiteliales normales

32. CD21
Receptor de
C3d y para EBV
Células dendríticas
foliculares
• EXCELENTE
MARCADOR
• Algunos linfocitos B

33. CD21
Receptor de
C3d y para EBV

34. CD68
proteína
transmembrana
• TRÁFICO DE LISOSOMAS
Expresada en histiocitos
normales y neoplásicos

35. Proteína S 100
proteína de
unión a calcio
¿S100?
• Solubles en SULFATO de amonio
neutral al 100%
• Identificadas por PRIMERA vez en
cerebro
Expresion
• Células interdigitantes
reticulares
• Células de Langerhans
• Tumores neurales, Melanomas

37. Ki67
Nucleoproteína
NO histona
¿Ki67?
• Kiel, Alemania, clona número 67
• MIB-1 (Otro anticuerpo misma molécula)
Nucleoproteína que se expresa
casi en todo el ciclo celular
• EXCEPTO G0
• Máximo en mitosis
• Índice de proliferación
• Valor pronóstico
• Ayuda diagnóstica

38. Ki67
Ayuda
diagnóstica
Linfoma de
células
pequeñas
Linfoma B
Difuso de
células grandes
Linfoma Burkitt
1-15% 45-95% 100%
Índice de proliferación

39. ALK-1
Anaplastic
lymphoma
kinase
Tirosina cinasa 85% LINFOMAS
ANAPLÁSICOS
• ResultadoTranslocación 2:5
• Citoplasma, núcleo y nucléolo
• Algunos linfomas difusos
También tumor miofibroblástico
inflamatorio
• Misma translocación

40. Diagnósticar lo
imposible
•Ganglios demasiado
pequeños
•Artificios
•Necrosis extensa
•MALA FIJACIÓN
NO diagnosticar

41. Diagnóstico
Categorías
Reactivo
Neoplásico
• Linfoma
• Cél. Grande
• Cél. pequeñas

42. Divisiones
iniciales
Linfomas
• NO Hodgkin
• Hodgkin
Linfomas
• Cél. Madura
• Células precursoras
Linfomas
• Células B
• CélulasT

45. Denis Parson
Burkitt
1911-1993
Médico Irlandés
• Enniskillen Irlanda
• Padre ingeniero y ornitólogo
• Familia protestante evangelista- papel activo en religión
• Inicialmente entró a la escuela de ingeniería y por la
influencia de un tío médico cambió
• Perdió un ojo cuando era pequeño
Colegio real de cirujanos –EDINBURGO
(Escocia)
• Trabajo como cirujano en varios hospitales

46. Denis Parson
Burkitt
1911-1993
Quiso ayudar a los más desprotegidos
• Se unió al ejercito en la segunda guerra mundial
(Kenia, Somalia, Uganda)
• Solicitó quedarse en Uganda
• Interés en epidemiología
• RELACIONÓ HIDROCELE CON FILARIASIS
• Inició una fábrica de prótesis para enfermos amputados por
elefantiasis
1957- Encontró su primer caso de Linfoma de
Burkitt,
• Reunío datos y pacientes y encontró 51 pacientes
• Sarcoma indiferenciado

47. Denis Parson
Burkitt
Continuó su investigación
• Posteriormente lo relacionó con los
ganglios linfáticos (lymphoma
syndrome in Uganda, Burkitt y Grez
O’Connor)
• Causa del linfoma (Mosquitos??)
• 1961 Michael Anthony Epstein le pidió
muestras para buscar virus
• Se aisló 1ª vezVirus Epstein Barr