Tecnicas histologicas

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Para los alumnos de Ciencias Veterinarias de UCASAL

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Tecnicas histologicas

  1. 1. Facultad de Ciencias Agrarias y Veterinarias Universidad Católica de Salta.
  2. 2. MODULO I° METODOS DE ESTUDIOMETODOS HISTOLOGICOS:1-Examen inmediato o in vivo: a) En fresco: b) Coloración vital:2- Examen mediato o post-morten: Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie depasos, la Técnica Histológica TECNICAS HISTOLOGICAS DEFINICION: Es el conjunto de operaciones que se somete un material organizado para hacer posible su estudio por medio del microscopio, posibilitando la observación de las estructuras no visibles al ojo humano.
  3. 3. Técnica histológicaPasos de la técnica:1- Obtención del material.2- Fijación.3- Inclusión.4- Obtención del corte.5- Coloración.6- Montaje final.
  4. 4. 1- Obtención del material
  5. 5. 2 FijaciónCualidades de un buen fijador:1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolíticos.2) Buen poder de penetración.4) Conservar lo mas fielmente la estructura del tejido.4) No interferir y facilitar los procesos posteriores.5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia.6) Insolubilizar los componentes de los tejidos.7) No producir estructuras artificiales.Clasificación de los fijadores1- Fijadores químicos: son los más empleados y pueden ser: a) Simples: constituido por una sola sustancia. b) Compuestos o mezclas fijadoras: constituidas por varias sustancias.
  6. 6. 10 cc
  7. 7. 3
  8. 8. 4- Obtención del corte:Para obtener cortes finos se utilizan aparatosdenominados micrótomos, hay varios tipos.Tipo Minot tiene dos partes fundamentales:1- El carril de la cuchilla, que es una pieza fija,2- La platina, que es una pieza de metal excavado, en donde se fija la pieza. La platina se desliza verticalmente sobre el filo de la cuchilla, y se obtiene un corte de un espesor previamente elegido.
  9. 9. El Minot dispone de 4 posiciones de ajuste,según el corte sea de 1-10 µm, 11-20 µm,21-30 µm o 31-40 µm así como ajuste delángulo de la cuchilla graduado,inmovilización de la rueda y mecanismo deavance de gran precisión.
  10. 10. Montaje del corte:
  11. 11. Los colorantes se pueden clasificar de diferente manera:1-Colorantes naturales: a) animales: carmín. b) vegetales: hematoxilina, orceina.2-Colorantes artificiales o sintéticos: (colorantes de anilina). a) ácidos: Son colorantes citoplasmáticos. b) básicos: Son colorantes nucleares. c) neutros: Tiñen citoplasma y núcleo de diferente color3-Colorantes indiferentes: no forman sales. Sudan III, rojo escarlata, etc.Sustancias basofilas se tiñen con los colorantes básicosSustancias acidofilas se tiñen con los colorantes ácidosSustancias neutrofilas se tiñen con los colorantes neutros.
  12. 12. Los pasos de la coloración son:b) Desparafinización: Se elimina la parafina con solventes como el benzol, xilol o toluolb) Hidratación: El agregado de agua se realiza mediante un pasaje por alcoholes decrecientes, alcohol de 100°, 96°, 80° ,70° y agua destilada.c) Coloración propiamente dicha: Se comienza con la hematoxilina, virando con agua corriente que es débilmente alcalina (sales alcalinotérreas). Y luego la Eosina con la cual se sobre colorea y luego se elimina el exceso.
  13. 13. C o l o r a c ió n :
  14. 14. 6) Montaje finalLas fases del montaje final son:• Deshidratación:b) Homogenización o aclaración:c) Colocación del cubreobjeto: con el objeto de proteger el preparado, se la recubre con una laminilla de vidrio de 0,2 mm de espesor, o cubreobjeto. Para adherir el cubreobjeto al portaobjeto, se emplea una resina, el Bálsamo de Canadá.

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