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Recombinaci ón  artificial – ingeniería genética : - Marcadores Genéticos de tipo “ Moleculares “  - ADN recombinante - en...
Enzima de Restricci ón : mecanismo de acción corta corta Sitio de restricción Secuencia palindrómo
 
Visualización de productos de la restricción:   ADN de virus / endonucleasa de restricción  Psi I  M: marcador de peso mol...
ADN del organismo 1 ADN del organismo 2 Importancia :  Enzima de restricción :  Eco RI
Mutaciones en sitios de restricción  ADN de virus, con la endonucleasa de restricción  Psi I  M: marcador de peso molecula...
Mutación en el sitio de restricción : Marcador genético Normal Enfermo
Mutación en el sitio de restricción : Marcador genético Gen normal Gen mutado
Huellas…….   Huellitas ……. Marcas …… Marcadores…..
Gen de inter és agronómico Locus “marcador” *   Marcadores genéticos
Loci heredables asociados ( ligados ) a un carácter de interés agronómico y  se heredan juntos. Utilidad  :  Agronómicamen...
En cebada sex1  1cM  ms 9 Maíz Androesterilidad Endosperma blanco Androesterilidad Endosperma blanco Marcadores Morfológic...
*Marcadores isoenzimáticos -  Polimorfismo  a nivel del producto génico (polipéptido o proteína) MARCADORES GENÉTICOS
REPLICACIÓN NATURAL DEL DNA   MARCADORES GENÉTICOS “ MOLECULARES “ BASADOS EN LA PCR ( Replicación “in vitro” del DNA  )
Replicación del DNA
Replicación  “in vivo” del DNA   *  Helicasa *  P roteínas de unión a cadena sencilla (SSBP)  *  T opoisomerasa ADN girasa...
R eacción en  C adena de la  P olimerasa ( PCR ) Los pasos 2 a 4 se repiten 30-35 veces e  incrementan más de 10 6  veces ...
Etapas para la reacción de PCR
Hibridación de oligonucleótidos (cebadores)
4 Reacción de PCR
MARCADORES GENÉTICOS “ MOLECULARES “ BASADOS EN LA PCR ( Replicación “in vitro” del DNA  ) <ul><li>Microsatélites  ó SSR (...
Marcadores tipo SSR (Microsatélites)
Fingerprinting de la Variedad Arbequina de Olivo MPM (pb) 500 400 300 200 100 oli 11  oli 12  oli 17  oli 22 1  2  3  4  1...
Fig ura 3:  Electroforesis en gel de agarosa 3%  (A)  IAS  oli 12 (B)   IAS  oli 17 1-   Empeltre de refer.   (CSIC, Españ...
Utilidad de los Marcadores genéticos 1- FINGERPRINTING (huella genética)  2-  BANCOS DE GERMOPLASMA  3- MAPAS GENÉTICOS  4...
Selección Asistida por Marcadores (MAS)
 
Marcadores Genéticos 1- Basados en la  PCR  ( R eacción en  C adena de la  P olimerasa)  2- Basados en la digestión con en...
Técnica de RFLP
Nla III Rsa I Tsp 509I Taq I Mse I
Desnaturalización del DNA
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)  Ciclo 3
Marcadores moleculares basados en el:  P olimorfismo de  L ongitud de  F ragmentos de  R estricción (RFLP)
 
 
Marcadores morfológicos : controlados por un solo loci y presentan expresión temprana a) En  Brassica : primera hoja vello...
Selección asistida por marcadores (MAS)
Marcadores tipo SSR´s (Microsatélites – STR´s- VNTR´s)
e.g. 5' overhang EcoRI G'AATTC BamHI G'GATCC   3' overhang PstI CTGCA'G   (2) When the ends of the restriction fragments a...
 
Figure 3.3.     b. Blunt ends ADN del organismo 1 ADN del organismo 2
 
Marcador Isoenzimático Enzima monomérica Enzima dimérica
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PCR MARCADORES MOLECULARES

  1. 2. Recombinaci ón artificial – ingeniería genética : - Marcadores Genéticos de tipo “ Moleculares “ - ADN recombinante - enzimas de restricción - Técnicas básicas de ingeniería genética. - R eacción en C adena de la P olimerasa ( PCR ) –
  2. 3. Enzima de Restricci ón : mecanismo de acción corta corta Sitio de restricción Secuencia palindrómo
  3. 5. Visualización de productos de la restricción: ADN de virus / endonucleasa de restricción Psi I M: marcador de peso molecular (fragmentos del DNA de virus lambda /enzima Bme I8I). 1-2-3: ADN de diferentes virus
  4. 6. ADN del organismo 1 ADN del organismo 2 Importancia : Enzima de restricción : Eco RI
  5. 7. Mutaciones en sitios de restricción ADN de virus, con la endonucleasa de restricción Psi I M: marcador de peso molecular (fragmentos del DNA de virus lambda /enzima BmeI8I). 1-2-3: ADN de diferentes virus
  6. 8. Mutación en el sitio de restricción : Marcador genético Normal Enfermo
  7. 9. Mutación en el sitio de restricción : Marcador genético Gen normal Gen mutado
  8. 10. Huellas……. Huellitas ……. Marcas …… Marcadores…..
  9. 11. Gen de inter és agronómico Locus “marcador” * Marcadores genéticos
  10. 12. Loci heredables asociados ( ligados ) a un carácter de interés agronómico y se heredan juntos. Utilidad : Agronómicamente : asisten al mejorador en el proceso de selección artificial temprana de un fenotipo superior. * Morfológicos * Isoenzimáticos 2- Secuencias nucleotídicas no codificantes * Moleculares (ácidos nucleicos) MARCADORES GENÉTICOS 1- Secuencias nucleotídicas codificantes
  11. 13. En cebada sex1 1cM ms 9 Maíz Androesterilidad Endosperma blanco Androesterilidad Endosperma blanco Marcadores Morfológicos sex1 1cM ms 9 Y 5 cM ms1 Y 5 cM ms1
  12. 14. *Marcadores isoenzimáticos - Polimorfismo a nivel del producto génico (polipéptido o proteína) MARCADORES GENÉTICOS
  13. 15. REPLICACIÓN NATURAL DEL DNA MARCADORES GENÉTICOS “ MOLECULARES “ BASADOS EN LA PCR ( Replicación “in vitro” del DNA )
  14. 16. Replicación del DNA
  15. 17. Replicación “in vivo” del DNA * Helicasa * P roteínas de unión a cadena sencilla (SSBP) * T opoisomerasa ADN girasa * Iniciación de la síntesis * ADN polimerasa III * P rimasa, ARN polimerasa * ADN polimerasa III * ADN ligasa. * Corrección : polimerasas I y III
  16. 18. R eacción en C adena de la P olimerasa ( PCR ) Los pasos 2 a 4 se repiten 30-35 veces e incrementan más de 10 6 veces el fragmento de DNA de interés
  17. 19. Etapas para la reacción de PCR
  18. 20. Hibridación de oligonucleótidos (cebadores)
  19. 21. 4 Reacción de PCR
  20. 22. MARCADORES GENÉTICOS “ MOLECULARES “ BASADOS EN LA PCR ( Replicación “in vitro” del DNA ) <ul><li>Microsatélites ó SSR (Single Sequence Repeat) </li></ul><ul><li>5´- AT AT AT AT AT AT AT – 3´ </li></ul><ul><li>5´- GTC GTC GTC GTC GTC – 3´ </li></ul><ul><li>5´- CGAT CGAT CGAT CGAT – 3´ </li></ul>
  21. 23. Marcadores tipo SSR (Microsatélites)
  22. 24. Fingerprinting de la Variedad Arbequina de Olivo MPM (pb) 500 400 300 200 100 oli 11 oli 12 oli 17 oli 22 1 2 3 4 1 2 3 4 M 1 2 3 4 1 2 3 4
  23. 25. Fig ura 3: Electroforesis en gel de agarosa 3% (A) IAS oli 12 (B) IAS oli 17 1- Empeltre de refer. (CSIC, España) ; 2- Empeltre LP ; 3- Manzanilla de refer. (CSIC, España) ; 4- Manzanilla EC ; 5- Manzanilla 4S ; 6- Manzanilla gigante 4S ; 7- Picual de refer. 8- Nevadillo EC ; 9- Nevadillo 4S ; M: 100 pb. DNA ladder (Sigma) . Microsatélites en Olivo (Diversidad ) A MPM (pb) 200 1 2 3 4 5 6 7 8 9 M B
  24. 26. Utilidad de los Marcadores genéticos 1- FINGERPRINTING (huella genética) 2- BANCOS DE GERMOPLASMA 3- MAPAS GENÉTICOS 4- LOCI LIGADOS 5- DIVERSIDAD Y ESTRUCTURA GENÉTICA 6- FORMA DE REPRODUCCIÓN 7- EVOLUCIÓN Y FILOGENIA
  25. 27. Selección Asistida por Marcadores (MAS)
  26. 29. Marcadores Genéticos 1- Basados en la PCR ( R eacción en C adena de la P olimerasa) 2- Basados en la digestión con endonucleasas (enzimas de restricción) a) RFLP : ( P olimorfismo en la L ongitud de los Fragmentos de Restricciòn) *MARCADORES MOLECULARES: - Polimorfismo genético directamente a nivel del DNA Enzimas de restricción <ul><li>Enzimas de tipo II : </li></ul><ul><li>Corte simétrico exacto en secuencias específicas palindrómicas </li></ul><ul><li>- Origen : diferentes organismos </li></ul><ul><li>D enomina ción : sistema alfa numérico, ( EcoR I proviene de Escherichia coli </li></ul><ul><li>- Generan extremos cohesivos ó romos </li></ul>
  27. 30. Técnica de RFLP
  28. 31. Nla III Rsa I Tsp 509I Taq I Mse I
  29. 32. Desnaturalización del DNA
  30. 33. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Ciclo 3
  31. 34. Marcadores moleculares basados en el: P olimorfismo de L ongitud de F ragmentos de R estricción (RFLP)
  32. 37. Marcadores morfológicos : controlados por un solo loci y presentan expresión temprana a) En Brassica : primera hoja vellosa b) En maíz : raíz primaria púrpura ó coleoptilo púrpura Asociados a la H aploidía
  33. 38. Selección asistida por marcadores (MAS)
  34. 39. Marcadores tipo SSR´s (Microsatélites – STR´s- VNTR´s)
  35. 40. e.g. 5' overhang EcoRI G'AATTC BamHI G'GATCC   3' overhang PstI CTGCA'G   (2) When the ends of the restriction fragments are complementary,   e.g. for EcoRI 5'‑‑‑G AATTC‑‑‑3' 3'‑‑‑CTTAA G‑‑‑5'
  36. 42. Figure 3.3.     b. Blunt ends ADN del organismo 1 ADN del organismo 2
  37. 44. Marcador Isoenzimático Enzima monomérica Enzima dimérica
  • LoFSilva

    Apr. 25, 2015
  • polimeraza

    Apr. 10, 2015
  • LuceritoYalta

    Dec. 8, 2011
  • JANGEL87

    Jun. 25, 2010
  • jamarquet

    Jul. 29, 2008

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