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Seminario final de biologia molecular!!

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Seminario final de biologia molecular!!

  1. 1. Cristina Cruz Agudelo Laura Fandiño Gaviria Estudiantes medicina III semestre UPB
  2. 2. <ul><li>INTRODUCTION </li></ul>ANGIOGENESIS: the sprouting of new capillaries from preexisting blood vessels.
  3. 3. <ul><li>INTRODUCTION </li></ul>
  4. 4. <ul><li>The angiogenesis is essential for tumor growth and progression, because the tumor growth is angiogenesis – dependent. </li></ul><ul><li>One experimental avenue to understad the control of tumor angiogenesis is to identify and study molecules that have regulatory activity on endothelial cells. </li></ul><ul><li>In this article they have discovered an angiogenesis inhibitor from the conditioned medium of pancreatic β tumor cells and refer to it as </li></ul><ul><li>Beta 35. This protein have a gene segment of bovine transferrin. </li></ul><ul><li>They reported the purification, characterization and anti- tumor activity of this protein. </li></ul>INTRODUCTION
  5. 5. OBJETIVE <ul><li>Prove that Beta-35 is a transferrin-derived inhibitor of angiogenesis and tumor growth </li></ul>
  6. 6. <ul><li>PREPARACIÓN DEL MEDIO CONDICIONADO </li></ul><ul><li>ENSAYO DE INCORPORACIÓN CON TIMIDINA </li></ul><ul><li>ENSAYO DE MEMBRANA CORIOALANTOIDEA DE POLLO (CAM) </li></ul><ul><li>PURIFICACIÓN DE BETA-35 </li></ul>
  7. 7. MATERIALES Y MÉTODOS <ul><li>5. MICROSECUENCIACIÓN DE PROTEÍNAS Y DETERMINACIÓN DE LA MASA : </li></ul><ul><ul><li>Degradación automatizada de Edman: </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Pehr Edman. </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Secuenciación de aminoácidos en un péptido. </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>NO en péptidos con N-terminal bloqueado. </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>50% de proteínas lo tienen bloqueado. </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><ul><ul><li>Rendimiento no es de 100%. Se obtienen muchos errores. </li></ul></ul></ul></ul><ul><ul><li>Espectrometría de masas en tándem de cromatografía líquida. </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Miden el peso electrónicamente. </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Resultados en espectro de masas . Gráfica de cada molécula, peso y cantidad. </li></ul></ul></ul>
  8. 8. <ul><li>6. CLONACIÓN, EXPRESIÓN Y PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES HUMANAS BETA – 35. </li></ul><ul><ul><li>Clonaron y expresaron esta proteína en  Escherichia coli  utilizando el segmento del gen correspondiente de Beta-35 contenida en el cDNA de humanos de la transferrina . </li></ul></ul>
  9. 9. <ul><li>7. ESTUDIOS EN ANIMALES. </li></ul><ul><ul><li>Se realizaron en las instalaciones del hospital infantil de Boston. </li></ul></ul><ul><ul><li>Ratones SCID hembra de 24 – 27 g , inmunocomprometidos. </li></ul></ul><ul><ul><ul><li>Condiciones . </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Alimentación. </li></ul></ul></ul><ul><ul><ul><li>Anestesia. (metoxyflurano). </li></ul></ul></ul>
  10. 10. <ul><li>8. TRATAMIENTO DE RATONES PORTADORES DE TUMOR CON BETA 35 INSOLUBLE. </li></ul>Las células pancreáticas se implantaron Tumor 100 – 200 mm3, se separaron en 2 grupos Beta 35 recombinante 5mg/kg/día 16 días Inyecciones similares Se determinó el volumen del tumor
  11. 11. RESULTADOS <ul><li>Identificación y purificación de Beta-35 del medio condicionado de las células tumorales del páncreas de ratón: </li></ul><ul><li>Se cuantificó la inhibición de la Timidina [3H] en el ADN de las células BCE </li></ul>
  12. 14. RESULTADOS <ul><li>2. Secuencia N-terminal y el análisis de espectrometría de masas Beta-35: </li></ul><ul><li>Secuencia DPERTVRWCTISTHEANK(X)ASFREN de Beta-35 es idéntica a la secuencia N-terminal de aminoácido de la transferrina </li></ul>
  13. 15. <ul><li>3. La construcción y purificación de proteínas recombinantes humanas Beta-35 en el  sistema de expresión de E. coli : </li></ul><ul><li>Con el fin de obtener cantidades suficientes de Beta-35 para iniciar experimentos contra el tumor, clonaron esta molécula mediante la inserción de un segmento de gen humano de Beta-35 en el vector sin secuencia del péptido señal. </li></ul>RESULTADOS
  14. 16. <ul><li>4. Tratamiento de tumor pancreático y melanoma humano en ratones SCDI con Beta 35 humana recombinante: </li></ul><ul><li>La administración sistémica de 5 mg / kg / día de Beta-35 inhibe significativamente el crecimiento de dos tipos diferentes de tumores primarios. </li></ul><ul><li>64% </li></ul>RESULTADOS
  15. 17. DISCUSSION DISCUSSION AUTOR REPORTS AGREE / DESAGREE M.S. O’Reilly et al The potent angiogenesis inhibitor, Angiostatin is a proteolytic product of endogenous proteins which in his intact form isn´t anti-angiogenic AGREE M.S. O’Reilly et al The potent angiogenesis inhibitor, Endostatin is a proteolytic product of endogenous proteins which in his intact form isn´t anti-angiogenic AGREE
  16. 18. DISCUSSION AUTOR REPORTS AGREE / DESAGREE M.S. O’Reilly et al The potent angiogenesis inhibitor, cleaved antithrombin III is a proteolytic product of endogenous proteins which in his intact form isn´t anti-angiogenic AGREE M.F. Carlevaro The intact form of the transferrin has been reported to be angiogenic DISAGREE
  17. 19. CONCLUSIONES <ul><li>This study opens a new window to cancer therapy. </li></ul><ul><li>This type of study encourages us to research on the subject and move toward cure of the disease. </li></ul><ul><li>The tumors have multiple causes and we need to know about these to intervene effectively. </li></ul><ul><li>The reason of medicine is unstoppable search for patient welfare </li></ul>
  18. 22. GRACIAS

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