Reporte de practicas y servicio (1) kristian

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Reporte de practicas y servicio (1) kristian

  1. 1. 1ObjetivoEl presente documento se elaboró para describir las técnicas de análisis clínicosrealizadas durante el periodo de prácticas profesionales y servicio social que se llevaron acavo con la finalidad de poner en práctica todo lo aprendido durante la preparaciónescolar, de tal modo que se pudiesen reafirmar habilidades así como destrezas en laformación del técnico laboratorista clínico.Además, el servicio social sirve para fomentar valores como la solidaridad alrealizar el servicio social en la comunidad al desempeñarse profesionalmente en el áreadel sector salud. Esto es parte de los requisitos que por normatividad exige eldepartamento de Servicio Social y Titulación de la D.G.T.I. como parte del trámite para lacertificación profesional.JustificaciónLa presente experiencia de prácticas profesionales tuvo lugar en el área delaboratorio clínico del Hospital General ISSSTE de Torreón colonia Centro, ubicado enlas calles Allende y Donato Guerra en la ciudad de Torreón, Coahuila.El mencionado hospital ofrece servicios de salud diversos, de carácter privado yasistencial, tales como consulta externa, consulta de especialidad, área de urgencias,cirugía, medicina interna, hemodiálisis, hemodinamia, pediatría, neonatología, ginecologíay obstetricia, tococirugía, radiología y radiodiagnóstico, salud pública, laboratorio clínico ybanco de sangre.El laboratorio clínico de dicha institución se divide en áreas para ofrecer losdiversos servicios que lo conforman entre ellas área de Hematología (Biometríahemática, recuento de plaquetas, recuento de reticulocitos, velocidad de sedimentaciónglobular, grupo y Rh, prueba de Coombs directa e indirecta), Química clínica ( Químicasanguínea (glucosa, urea, creatinina, acido úrico), electrolitos séricos (Na, Cl, K, Ca, Mg,PO), perfil hepático (TGO, TGP, fosfatasa alcalina, Bilirrubina total, Bilirrubina directa,Bilirrubina indirecta, LDH, FA), perfil de lípidos (Colesterol total, HDL, LDL, VLDL,triglicéridos), proteínas, enzimas cardiacas (CK, CK-MB) ), Serología (reacciones febriles,ASTO, Proteína C reactiva, VDRL) Microbiología ( examen general de orina,coproparasitoscopico , parasitoscopico, diversidad de cultivos, BAAR, etc...) Banco desangre (pruebas cruzadas) entre otros.
  2. 2. 2Aquí se maneja una gran diversidad de muestras en las diferentes áreas,destacando como muestra principal sangre venosa periférica en sus diferentes derivadosdel fraccionamiento (suero, plasma, elementos formes).En México la cifra de enfermedades que necesitan de un análisis clínico aaumentado considerablemente por lo que la nación necesita tanto de químicos comotécnicos laboratoristas capaces de realizar su trabajo en tiempo y forma; demostrandosus capacidades y aptitudes, no solo laborales sino humanísticas, ya que se tiene quetrabajar con honradez, tolerancia, empatía y gusto por el trabajo que se realiza.Realicé mis prácticas profesionales y servicio social con la finalidad de poderaplicar las bases teóricas adquiridas en clases al ámbito práctico y laboral. También esimportante mencionar el deseo de obtener la experiencia suficiente en esta área detrabajo para que al momento de competir por un puesto a nivel privado o institucionaltener las armas necesarias para esto. Otras razones importantes es el introducirme en elambiente con los compañeros de trabajo, conocer las bases administrativas y sindicalesde los laboratorios clínicos, conocer el grado de responsabilidad y compromiso que serequieren en el área de servicios de la salud.Tal periodo de trabajo consistió en la realización de diferentes procedimientos, análisis ymediciones clínicas que se enlistan a continuación:o Toma de muestra de sangre periférica venosaHematología:o Biometría hemática en aparato automatizado que permite obtener resultadosde formula roja (Hemoglobina, Hematocrito), así como el cálculo de los índiceseritrocitarios (VGM, HGM, CHGM); fórmula blanca (recuento leucocitario,recuento diferencial); y plaquetas.o Velocidad de sedimentación globular (VSG), Recuento de Reticulocitos, Grupoy Rh.o Tiempos de coagulación.o Coombs directo e indirectoo Pruebas cruzadasQuímica Clínicao Medición de electrolitos en suero y orina.o PFHo Perfil de lípidoso Enzimas cardiacaso Proteínas urinariaso Química SanguíneaSerología
  3. 3. 3o Reacciones febrileso VDRLo Factor Reumatoideo Prueba Inmunológica de Embarazo (PIE)o HIV, VHC y VHbMicrobiologíao Examen general de Orina (EGO)A continuación explicaré en qué consisten las técnicas de toma de muestra y análisis querealicé durante mi estancia en dicho laboratorio.IntroducciónEl laboratorio clínico es el lugar donde los técnicos y profesionales en análisisclínicos, analizan muestras biológicas humanas que contribuyen al estudio,prevención, diagnóstico y tratamiento de las enfermedades. Utiliza las metodologías dediversas disciplinas como la química clínica, hematología, inmunología y microbiología. Enel laboratorio clínico se obtienen y se estudian muestras biológicas diversas, comosangre, orina, heces, líquido sinovial (articulaciones), líquido cefalorraquídeo, exudadosfaríngeos y vaginales, entre otros tipos de muestras.Los laboratorios son de gran ayuda tanto para pacientes que se encuentranhospitalizados como para los pacientes externos, es por eso que su ubicación debe ser enla planta baja, con fácil acceso a la sección de recepción del Archivo Clínico y en menorgrado con el departamento de Consulta Externa.Las áreas que componen al laboratorio clínico son: Sala de Espera y Recepción.Donde los pacientes esperarán cómodamente a ser atendidos; Cubículos de Toma deMuestras. En este punto se obtienen las muestras para luego ser distribuidas a lasdiversas secciones del laboratorio.
  4. 4. 4Secciones de Laboratorio:Hematología: En este sección se efectúa el Hemograma y diversas pruebas paraevaluar el sistema de CoagulaciónBioquímica clínica: Aquí se realizan análisis que se clasifican de la siguienteforma: Química sanguínea de rutina, lo que abarca multiples parámetroscomo la determinación de Glucosa, Colesterol, etc. Exámenes generales de orina Determinación de gases en sangre ( Presión parcial de oxígeno, deanhidrido carbónico, reserva de bicarbonato, pH, etc.)Microbiología: Las diversas labores que se realizan aquí pueden clasificarse en lasiguiente forma: Coproparasitología: Tiene por objeto investigar la presenciade parásitos en materias fecales. Bacteriología: Consiste en examinar directa o indirectamente lapresencia o actividad de organismos microscópicosen sangre, orina, materia fecal, jugo gástrico yexudados orgánicos.Inmunología: En esta sección se hacen determinaciones de Anticuerpos y otrasdeterminaciones con el fin de evaluar el Sistema inmunitario.En esencia, el laboratorio clínico es una herramienta fundamental para el sector salud,ayudando al diagnostico de enfermedades de un paciente afectado; los resultados de losanálisis clínicos van más allá del horizonte sintomatológico, y ayudan al médico a realizarun diagnostico acertado y por consecuencia un correcto tratamiento.
  5. 5. 51.- Departamento de hematologíaLa sangre es un tejido en circulación continua, que desempeña innumerablesfunciones vitales da su paso por todo el cuerpo. De máxima importancia es su capacidadde transportar oxigeno ligado a la hemoglobina de los eritrocitos, desde los pulmones alos tejidos corporales ,y devolver el bióxido de carbono que se genera en los tejidos ,hastalos pulmones .También produce y distribuye anticuerpos formados por los plasmacitos ylos linfocitos, transporta granulositos y monocitos que neutralizan y destruyen lospatógenos por medio de la fagocitosis, y suministra complemento. Otra función esconservar la hemostasia con plaquetas y factores de la coagulación, que permite lareparación de lesiones tisulares y evita hemorragia. Regular la temperatura corporal y elestado de equilibrio ácido-básico e hídrico; desplazar nutrimentos y hormonas regulatoriatejidos corporalesEl alcance de la hematología clínicaLa hematología clínica tiene por objeto el estudio de las perturbaciones yenfermedades de la sangre y de los órganos hematopoyéticos.Al señalar que los padecimientos de los órganos hematopoyéticos también conciernena la hematología clínica, debe quedar implícito que algunos de ellos no dan lugar acambios en la sangre propiamente dicha.Si se desea fijar de una vez por todas el alcance de la hematología, debe aclararseque ella incluye, además de las enfermedades del sistema hemático propiamente dicho,las de tejido linfático y las del llamado sistema reticuloendotelial, ya sea que lasalteraciones principales se observen en los elementos circulantes, o en los órganos ositios donde estos tienen origen .normalmente existe un estado de equilibrio entre laformación y la destrucción de los elementos figurados de la sangre, lo que se refleja en sucomposición celular, que es prácticamente constante .Si la producción de células esinsuficiente, o su destrucción excesiva, ello se traducirá por un cuadro hematológicotransitorio, o más o menos permanente .1.1 Sala de toma de muestraEste espacio es el que se brinda para obtener las muestras de sangre requeridasen el laboratorio para los análisis que posteriormente se realizaran. Si la muestra desangre no se recoge con una técnica perfecta hasta el menor detalle, la totalidad delexamen hematológico sufre.Para casi todos los análisis se necesita una muestra de sangre venosa. La punciónen una vena, aunque es un método bastante sencillo, debe hacerse con cuidado paraevitar hemólisis o hemoconcentración de la muestra, que se forme un hematoma, y quelas venas sufran lesión. Los hematomas o las equímosis suelen poner de manifiesto unatécnica o criterio deficiente de la persona que la efectúa. Unas palabras bien elegidasservirán para tranquilizar al paciente. La auto confianza y seguridad del técnico,contribuirían a establecer una relación adecuada. Es necesario mantener un buen controlde la identificación de las muestras para evitar confusiones que afecten gravemente lasituación.
  6. 6. 61.2 Punción venosaSignificado clínicoPara las técnicas hematológicas, es fundamental obtener muestras de sangreadecuadas, ateniéndose a una técnica muy precisa .si la muestra de sangre no se recogecon una técnica perfecta hasta el menor detalle, la totalidad del examen hematológicosufre. Casi todas las muestras de sangre se obtienen por punción venosa; es el métodomás fácil y adecuado para obtener volumen de sangre suficiente para llevar a cabo ungran número de pruebas.FundamentoLa muestra puede dividirse y tratarse conforme a las necesidades del caso; puedemezclarse con anticoagulante para obtener plasma, sangre completa; o pude dejarsecoagular para obtener suero.Muestra Tipo de tubo Anticoagulante PruebasSueroActivador decoagulo.Determinaciones en suero parabioquímica, microbiología,inmunología, TDM.Suero con gelActivador decoagulo y gelseparador.Determinaciones en suero parabioquímica, microbiología,inmunología, TDM.Suero congránulosActivador decoágulos ygránulosDeterminaciones en suero parabioquímica, microbiología,inmunología, TDM.Suero parapruebascruzadasActivador decoágulo.Determinaciones en suero paraanálisis de pruebas cruzadas dehistocompatibilidad.Plasma Heparina Sódica.Determinaciones en plasmaheparinizado para bioquímica.PlasmaHeparina de litioHeparina amónicaDeterminaciones en plasmaheparinizado para bioquímica.Plasma congelHeparina de litio ygel separador.Determinaciones en plasmaheparinizado para bioquímica.Sangre totalK2 EDTAK3 EDTADeterminación en sangre total conEDTA para hematología.Sangre total K3 EDTADeterminaciones en sangre totalcon EDTA para análisis depruebas cruzadas dehistocompatibilidad.Sangre totalEDTA K2 Y gelseparadorDeterminaciones en sangre totalcon EDTA para identificar virus,parásitos y bacterias en biologíamolecular.PlasmaCitrato sódico(3.2%)Citrato sódico(3.8%)Determinación en plasma concitrato para análisis de coagulo.
  7. 7. 7Plasma CTAD (3.2%)Determinación en plasma concitrato para análisis decoagulación cuando se intentaevitar la aparición de factoresplaquetarios en la sangre.Sangre totalAnticoagulanteinhibidor deglicolisis.Determinación en sangre totalanticoagulada y estabilizada oplasma para determinación deglucosa y lactato.Suero/PlasmaActivador decoaguloHeparina sódicaDeterminación en suero/plasmaheparinizado para análisis detraza de metales.Sangre totalACD-AACD-BCPDADeterminación en sangre total conACD/CPDA para análisis delgrupo sanguíneo.Procedimiento: Sistema de tubos al vacío7.-Desechar el material punzo cortante y el infeccioso en sus respectivos depósitos.
  8. 8. 81.3 Biometría hemática o hemogramaEl hemograma consiste, básicamente, en el conteo de los diferentes tipos decélulas que se encuentran en sangre periférica. Bajo el nombre de hemograma seagrupan dos conceptos:(1) Cuantitativo, que comprende los recuentos de eritrocitos, leucocitos yplaquetas, cuantificación de hemoglobina, medición de hematocrito y en cálculo deíndices eritrocitarios,(2) otro cualitativo (fórmula leucocitaria), que es la identificación microscópica oautomatizada de los diferentes tipos de leucocitos y su expresión en valores porcentualesy absolutos.Este examen, en la actualidad, constituye uno de los más ampliamente utilizados,en el reconocimiento inicial de pacientes que consultan por patologías diversas. Ademásrepresenta una herramienta insustituible, en el monitoreo de evolución de patologíahematológica y control terapéutico.En este contexto, la automatización del hemograma, una combinación demetodologías de colorimetría, impedancia eléctrica e informática (Celldyn 1400) hapermitido obtener un método confiable y rápido para enfrentar la demanda creciente por elperfil hematológico.Analizador hematológico CELLDYN 1400El analizador hematológico CELLDYN 1400 proporciona información de 12parámetros obtenidos, a partir de muestra de sangre total anticoagulada con EDTA, de lamanera siguiente:Medición directa de: Glóbulos rojos (RBC). Glóbulos blancos (RBC). Plaquetas (PLT). Concentración de hemoglobina (HGB).Parámetros derivados, obtenidos de histogramas: Porcentaje de Linfocitos (% L) Porcentaje de Granulocitos (%G) Volumen corpuscular medio (MCV)Parámetros calculados de los datos medidos y derivados: Número total de Linfocitos (LYN) Número total de Granulocitos (GRAN) Hematocrito (HCT) Hemoglobina corpuscular media (MCH) Concentración de Hb corpuscular media (MCHC)
  9. 9. 9Principio del métodoEl CELLDYN 1400 utiliza el principio de la IMPEDANCIA O RESISTENCIA ELECTRICApara el recuento y clasificación por tamaño de las células sanguíneas.La célula, al pasar a través de un orificio en el que hay una diferencia de potencialconocida, induce un pulso eléctrico que es directamente proporcional al volumen celular,lo que es aprovechado (por la diferencia de tamaño de los linfocitos, y granulocitos), pararealizar una fórmula de dos parámetros.Para esto la muestra es diluida, automáticamente, con una solución deconductividad fija.Luego esta muestra es conducida, unidireccionalmente, a través de una apertura uorificio de tamaño determinado.La no devolución de la muestra está asegurada por el transductor de Von Behrensque impide la recirculación de la misma.Una corriente eléctrica constante pasa entre electrodos ubicados a cada lado de laapertura determinando una zona de censado a lo largo de toda la pertura.Durante el ciclo de medición, cada célula que atraviesa la zona de censado,interrumpe el flujo de corriente constante generando un pulso eléctrico cuya amplitud esdirectamente proporcional al tamaño de la célula.El número de pulsos generados durante cada medición corresponde al número decélulas censadas.Los pulsos eléctricos generados son primero amplificados y luego comparados convoltajes en canales de referencia que han sido previamente calibrados para aceptar sóloseñales con una amplitud predeterminada.Dos o más células pueden coincidir simultáneamente en la zona de censadodurante el ciclo de medición. En cuyo caso se obtiene un pulso de gran amplitud, el cuales reconocido y rechazado, produciéndose una pérdida de pulsos aceptables. Estapérdida se puede predecir estadísticamente, de manera que los recuentos celulares soncorregidos automáticamente.El CELLDYN 1400 realiza MEDICION DE HEMOGLOBINA utilizando elmétodo de la formación de cianometahemoglobina, que se determina conespectrofotómetro a 540 nm.Para esto, a una muestra diluida 1:250 se le adiciona un agente lisante, cuyafunción es romper los glóbulos rojos y liberar la hemoglobina.Después de la medición el instrumento se lava con el reactivo detergentequedando listo para otro ciclo de medición.
  10. 10. 10Especificaciones de ejecuciónSENSIBILIDADLas lecturas son confiables en el siguiente rangoLeucocitos 1.000 - 100.000 mm3 (1 - 100 K/uLHematíes 1.0 - 7.0 millones/mm3 (1 - 7 M/uL)Hemoglobina 2.5 - 24,0 g/dlPlaquetas 10 - 999 k/ULBACKGROUND NORMAL (RECUENTO DE FONDO)Una vez realizado el ciclo de limpieza (mantenimiento diario) los recuentos delbackgraund no deben exceder los siguientes limites:Leucocitos menor o igual a 500 /mm3 (0.5 K/uL)Hematíes menor o igual a 0.05 millones/mm3 (0.05 M/uLHemoglobina menor o igual a 0.2 g/dlPlaquetas menor o igual a 10.000 /mm3 (10 K/uL)IMPRESIÓN DE LISTADO DE RESULTADOS (RESUMEN)El equipo almacena, en memoria constantemente, los registros de las últimas 320muestras procesadas.Por lo tanto, antes de alcanzar esta cifra, se debe imprimir y archivar el listado deresultados a modo de registro de resultados de examen:TIPO Y RECOLECCION DE MUESTRALa muestra corresponde a sangre venosa, obtenida por venopunción, recogida entubos con anticoagulante EDTA/ K3EQUIPO REACTIVOS REQUERIDOSContador hematológico CELL DYN1400.Agitador de muestras mecánico.Reactivo Detergente para Celldyn1400.Reactivo Diluyente para Celldyn 1400.Reactivo Lisante para Celldyn 1400.Estos reactivos no deben exponerse a la luz directa del sol.
  11. 11. 11No deben mezclarse.No adicionar restos de uno en otro nuevo.Estos reactivos deben mantenerse y utilizarse dentro de un rango de temperatura entrelos 15 y 30 ° C para asegurar su conductividad.PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACION.El funcionamiento del equipo se chequea diariamente, en base al programa decontrol de calidad interno del laboratorio.Cuando el control aconseje calibrar el instrumento, se puede seguir una de las tresformas de calibración siguientes:Calibración con calibrador comercial.Calibración con sangre fresca.Calibración mediante entrada de factor.Procedimiento de calibración.1. Presionar MAIN.2. Presionar CALIBRATION.3. Seleccionar FRESH BLOOD o CALIBRATOR.4. Seleccionar el o los parámetros a calibrar e ingrese los valores de referencia de lamuestra o calibrador.Si se utiliza muestra de sangre fresca, esta debe tener menos de 4 horas derecolectada.Nota: Los valores de referencia aceptables, para calibración con sangre fresca, debenajustarse a límites establecidos para el equipo.Calibración mediante entrada de factor:1. Presionar Calibration.2. Presionar ENTER FACTOR3. Con el cursor posicionarse en la entrada de factor correspondiente e ingresarnuevo factor.Esta opción permite ingresar directamente los valores de factores de calibración.La calibración es programable cuando se introduce un factor de 1.00Ejemplo: Si los recuentos de leucocitos estás aumentados en un 2%, el operador puedeingresar como factor 0,98 para disminuir los recuentos en un 2%.PASOS DEL PROCEDIMIENTOComo muestra se utiliza sangre venosa recogida en EDTA (tubo tapa Lila).La muestra debe agitarse por inversión, cuidando no someterla a excesiva agitación quepueda destrozar los elementos o alterar el volumen celular.La muestra debe invertirse de 10 a 15 minutos si se hace a mano.En agitador mecánico: de 5 a 15 minutos.Nunca agitarlas más de 30 minutos.
  12. 12. 12Muestras procesadas hasta 8 horas de la recolección dan resultados confiables.La muestra puede diluirse, previo a la medición, utilizando diluyente paraCELLDYN o suero fisiológico. La dilución 1:10 es suficiente en la mayoría de lassituaciones de parámetros elevados más allá del limite superior de lectura.1. Para su proceso, colocar el tubo con la muestra debajo de la sonda de aspiración.2. Precionar la palanca que está detrás. Automáticamente la sonda aspirará 30 ul demuestra. Espere el beep de término de aspiración del equipo antes de retirar eltubo. En este momento la muestra aspirada será automáticamente diluida,repartida en diferentes circuitos, incubada con reactivos específicos (lisis,hemoglobinometría) y leída por los dispositivos correspondientes.3. Ingresar identificación del examen (digitar número de folio del examen). PresionarENTER.PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDADEl programa de control de calidad del examen, se realiza en base a doselementos:-Verificación de Resultados en asociación con la sección de hematología del Lab.Central.-Verificación de constantes hematológicas con relación al programa de control interno delequipo. (Programa de la media X - B)Verificación de Resultados en asociación con la sección de hematología delLaboratorio Central.Consiste en analizar diariamente una muestra de sangre proporcionada por lasección de hematología del Laboratorio Central. Esta muestra es procesada como unamuestra más de la rutina. Los resultados son remitidos a la sección de hematología parasu análisis.Esta muestra de control es procesada, en sección hematología, en dos autoanalizadores hematológicos (Celldyn 3500 y Micros ABX) y comparados sus resultadosentre los tres analizadores y con la medición del hematocrito procesado manualmente.El análisis de calidad de los resultados de la muestra control, se relaciona con lareproducibilidad de resultados entre los distintos equipos, considerando el hematocritomanual y la verificación microscópica de la muestra.La comparación de resultados de muestras de control, con resultados de equipos desección de hematología, se basa en la calibración de estos con calibradores comercialesy controles comerciales.Verificación de constantes hematológicas con relación al programa de controlinterno del equipo. Programa de la media X – B.Permite revisar los valores para VCM, HCM y CHCM calculados según el métodoLevey-Jennings para grupos de 20 muestras. La impresión del reporte proporciona unagráfica de los resultados.
  13. 13. 13INTERFERENCIASLos resultados del examen pueden verse interferidos por la presencia dediferentes elementos de la siguiente forma:WBC: falso incremento por crioglobulinas, heparina, proteínasmonoclonales, eritroblastos, agregados plaquetarios, falso descenso porcoágulos, células atípicas, uremia + inmunosupresores.RBC: falso incremento por crioglobulinas, macroplaquetas, hemólisis, policitemia,falso descenso por crioaglutininas, microcoágulos, células microcíticas.HGB: falso incremento por crioglobulina, carboxihemoglobina, hemólisis,hiperbilirrubinemia, lipemia severa, falso descenso por microcoágulos.Hematocrito: falso incremento por crioglobulina, macroplaquetas, hiperglicemia(600 mg/dl), falso descenso por coágulos, hemólisis.PLT: falso incremento por crioglobulinas, hemólisis, hematíes microcíticos, falsodescenso por macroplaquetas, heparina, agregados plaquetarios.PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO PARA CALCULAR RESULTADOSEl equipo realiza la medición directa, por impedancia y colorimetría de:Glóbulos rojos (RBC).Glóbulos blancos (WBC).Plaquetas (PLT).Concentración de hemoglobina (HGB).Los resultados para Parámetros derivados, se obtienen de datos de distribución deelementos medidos (histogramas):Porcentaje de Linfocitos (% L)Porcentaje de Granulocitos (%G)Volumen corpuscular medio (MCV)Los Parámetros calculados de los datos medidos y derivados son:Número total de Linfocitos (LYN)Número total de Granulocitos (GRAN)Hematocrito (HCT)Hemoglobina corpuscular media (MCH)Concentración de Hb corpuscular media (MCHC)
  14. 14. 14Cálculo de Hematocrito: Es la razón de eritrocitos en un volumen de plasma y seexpresa como porcentaje del volumen de sangre total.HCT = RBC x VCM10Cálculo de hemoglobina corpuscular media: Expresa el contenido medio de Hb quehay los hematíes. Se expresa en picogramos.HCM = Hb (gr/lt ) x 10RBCCálculo de concentración de Hb corpuscular media: Es la razón entre la hemoglobinarespecto al hematocrito. Indica la concentración de Hb en el promedio de los eritrocitos.CHCM = Hb x 100HCTREPORTE E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOSEl reporte incluye los siguientes parámetros:1.- Número de hematíes: por medición directa se obtiene el número de GR por volumen.2.- Concentración de Hb: por medición directa por espectrofotometría (método de lacianmetahemoglobina). El valor puede estar falsamente aumentado en hiperleucocitosis.Se utiliza para la valoración de anemia.3.- Volumen corpuscular medio (VCM): derivado de histograma de distribución, representala media del volumen de los hematíes. Define la micro-normo-macrocitosis.4.- Hematocrito: es la relación entre el volumen de los hematíes respecto a la sangre total.Se obtiene de multiplicar el VCM por el número de hematíes. Es discretamente inferior alobtenido por centrifugación. Se utiliza como indicador de anemia, hemorragia,hemoconcentración, etc.5.- Hemoglobina corpuscular media (HCM): resulta de dividir la concentración de Hb por elnúmero de hematíes. Se usa como marcador hipocromía.6.- Concentración de Hb corpuscular media (CHCM): es la cantidad de hemoglobina quehay en un decilitro de hematíes. Su valor normal es 34 y la desviación standard de 2 %.La CHCM es el método más útil para detectar la deshidratación del eritrocito. En lamicroesferocitosis familiar está sobre 36 (mg/dl) en el 50% de los casos. La CHCM
  15. 15. 15disminuida bajo 30 %, se considera marcador de hipocromía y se ve en condiciones quellevan a una síntesis insuficiente de Hb.7.- Número de plaquetas: se mide directamente el número de plaquetas por volumen.8.- Número de leucocitos: es el conteo de células de determinado tamaño que resisten elprocedimiento de lisis específica para los hematíes. Se mide directamente.9.- Fórmula leucocitaria: Derivado de histograma, corresponde al porcentaje de linfocitos ygranulocitos.Neutrófilos elevados, acompañado de fiebre, indica probabilidad de infección porbacterias. Neutrófilos disminuidos pueden deberse a infección severa, reacción a drogas,irradiación o acompañar ciertos tipos de anemia.Linfocitos elevados se asocia más frecuentemente con infección viral. Perotambién esta elevación se observa en cuadros hematológicos como la Leucemia de tipolinfoide.Una correcta interpretación del examen, en función de los hallazgos clínicos,permite una orientación diagnóstica en muchos casos, también constituye en otros, unimportante elemento en el pronóstico y tratamiento.La concentración de eritrocitos, leucocitos y plaquetas en la sangre varía con laedad y sexo.En clínica pueden observarse aumentos o disminuciones patológicas de losniveles de estos elementos que no siempre obedecen a enfermedades del sistemahematopoyético. También se observan fluctuaciones de orden fisiológico como en elembarazo, el ejercicio, stress o ritmo circadiano.El aumento de la concentración de eritrocitos, de contenido hemoglobínico normal,suele acompañarse del aumento de la concentración de hemoglobina y se denominapoliglobulia. Cuando el aumento de la concentración de eritrocitos se acompaña dedisminución del contenido hemoglobínico, se habla de pseudo- poliglobulia. La pseudo-poliglobulia puede acompañarse de microcitosis e incluso anemia, como por ejemplo en latalasemia, anemia ferropénica (pseudopoliglobulia microcítica).El descenso de la concentración de eritrocitos en sangre se acompaña siempre dela disminución de la concentración de Hemoglobina (anemia) y puede obedecer a unapérdida por hemorragia, a hemólisis o a una falta en su formación a nivel de la médulaósea.El aumento de la concentración de leucocitos se denomina Leucocitosis y puedeobedecer a muchas causas, entre las que destacan los procesos infecciosos einflamatorios agudos y crónicos. Cuando se utilizan sistemas automatizados de recuento,debe tenerse presente que estos no diferencian entre eritroblastos y leucocitos (debido aque ambas células tienen núcleo), por lo que si en la observación microscópica del frotisse aprecia una cifra de eritroblastos superior al 10 % se debe proceder a una correccióndel recuento leucocitario:
  16. 16. 16Leucocitos reales = Leucocitos contados x 100Eb (por 100 leucocitos) + 100Donde Eb: eritroblastosLa disminución de concentración de leucocitos se denomina leucopenia y en casode insuficiencia medular grave (aplasia medular) se acompaña casi siempre de anemia ytrombocitopenia. La leucopenia afecta siempre la totalidad de los leucocitos circulantes,en especial los más abundantes (neutrófilos y linfocitos).La disminución selectiva de granulocitos neutrófilos se llama agranulocitosis oneutropenia y la de linfocitos, linfopenia. Debe descartarse que una leucopenia aislada deevolución prolongada sea el primer signo de una enfermedad hematológica grave(leucemia, linfoma o anemia refractaria).El aumento de la concentración de plaquetas se denomina trombocitosis, mientrasque su disminución se denomina trombopenia.Utilidad clínica de los índices eritrocitarios:Anemia microcítica: VCM < 80 fLAnemia macrocítica: VCM > 100 fLAnemia normocítica: VCM = 80 – 100 fLAnemia hipocrómica HCM < 30 pgCausas de anemia microcítica-hipocrómica:Ferropenia o carencia de hierro, talasemia.Causas de anemia macrocítica:Déficit de vitamina B12 o acido fólico, hepatopatías crónicas, alcoholismo,tabaquismo.La determinación de CHCM es útil para detectar aumentos de la concentraciónhemoglobínica intraeritrocitaria, ya que en este caso es siempre superior a 35 g/dL. Elaumento de la CHCM nunca obedece a un aumento de la síntesis de Hb, sino siempre auna alteración de la membrana o del contenido acuoso del eritrocito: disminución de larelación entre la superficie y volumen eritrocitario (esferocitosis) o pérdida de aguadeshidratación eritrocitaria (xerocitosis).
  17. 17. 17VALORES DE REFERENCIAEDADWBC(K/Ul)RBC(M/uL)HGB(g/dl)Hto(%)VCM(fL)HCM(pg)CHCM(g/dl)Plaq(K/uL)0-2 sem9.0-30.0 4.1-6.1 14.5-24.5 44-64 98-112 34-40 33-37 150-4502-8 sem 5.0-21.0 4.0-6.0 12.5-20.5 39-59 98-112 30-36 32-36 150-4502-6 mes5.0-19.0 3.8-5.6 10.7-17.3 35-49 83-97 27-33 31-35 150-4006m-1a5.0-19.0 3.8-5.2 9.9-14.5 29-43 73-87 24-30 32-36 150-4001- 6 a5.0-19.03.9-5.3 9.5-14.1 30-40 70-84 23-29 31-35 150-4006-16 a4.8-10.84.0-5.2 10.3-14.9 32-42 73-87 24-30 32-36 150-40016-18 a4.8-10.84.2-5.4 11.1-15.7 34-44 75-89 25-31 32-36 150-400>18 a h5.0-10.04.5-5.5 14.0-17.4 42-52 84-96 28-34 32-36 140-400>18 a m5.0-10.04.0-5.0 12.0-16.0 36-48 84-96 28-34 32-36 140-400FUENTES POTENCIALES DE VARIABILIDADTemperaturas sobre 30 grados Celsius pueden concentrar los reactivos,por evaporación alterando los resultados. Temperaturas menores de 15 grados puedenprecipitar o inactivar los reactivos.Voltaje red eléctrica. El equipo trabaja con 220 voltios y 50 Hertz. Grandesoscilaciones de voltaje de la red pueden alterar los recuentos.Equipos de rayos X. fotocopiadoras, computadoras, centrífugas no deben serinstaladas cerca del CELLDYN para prevenir interferencias.NOTAS ADICIONALESEn caso de pérdida de presión de vacío del sistema, descubrir el panel frontal yllenar manualmente la copa de dilución con reactivo diluyente (15 ml aprox.), luego pulsarRun.
  18. 18. 181.4 Frotis sanguíneo; recuento diferencial de leucocitosSignificado clínicoEvalúa la distribución y la morfología de los glóbulos blancos y, de este modo,aporta información más específica respecto al sistema inmunitario de los pacientes. Es elnúmero relativo de leucocitos de cada tipo, en la sangre. Al multiplicar la cifra porcentualde cada tipo por el recuento total, el investigador obtiene el número absoluto de leucocitosde cada especie celular. Preferentemente se utiliza el colorante de Wright y una soluciónamortiguadora un pH de 6.8.FundamentoConsiste en que el colorante de Wright, que tiene un carácter ácido base quepermite teñir todas las células blancas y distinguirlas mediante el color que toma cada unade ellas.Procedimiento
  19. 19. 191.5 Grupo sanguíneo y RhSignificado clínicoLos eritrocitos del hombre, poseen más de 100 antígenos que se encuentran en lamembrana celular, estos antígenos constituyen lo que se llama grupos sanguíneos, loscuales están determinados por numerosos loci genéticos.Los sistemas ABO y Rh tienen mayor importancia como causa de reaccionestransfucionales.Sistema ABO: El más importante de los diversos sistemas de clasificación de lasangre humana, basado en los componentes antigénicos de los hematíes. Fue el primeroen conocerse gracias a los trabajos de clásicos de Landesteiner quien definió los primerosisoantígenos .Los antígenos presentes en los eritrocitos se denominan aglutinógenos yson de los tipos Ay B ,los cuales se heredan de alguna manera que originan diferentesgrupos, esto es, una persona puede tener uno de ellos los dos simultáneamente ,oninguno. La expresión en el eritrocito de los antígenos ABO está constituida por un sologen con tres alelos (A, B y O).
  20. 20. 20Sistema Rh: Los antígenos Rh recibieron este nombre, por haberse identificadoinicialmente en los eritrocitos del mono Macacus Rhessius. Fisher y Race sugirieron quelos antígenos Rh están determinados por tres genes: C, D y E con pares de alelos quecodifican para cinco determinantes antigénicos .El más importante de estos loci sedenomino D: Antígeno D, este es el que determina que una persona sea Rh positivo o Rhnegativo, las personas con genotipo DD o Dd son del tipo Rh positivo, en tanto que losindividuos con genotipo dd pertenece al tipo Rh negativo.Fundamento: Los antígenos de los eritrocitos lavados de la muestra de sangrereaccionaran con los anticuerpos de los sueros tipificadores A, B, AB, D. Por medio deuna aglutinación visible.Procedimiento; método en tuboINTERPRETACIÓNGrupo Anti – A ANTI – B Anti AB - RhA + - + +/-B - + + +/AB + + + +/O - - - +/
  21. 21. 211.6 Determinación de la variedad DuSignificado clínicoDespués de los antígenos A y B del sistema de grupos sanguíneos el D es elantígeno de grupo sanguíneo más importante de la rutina de banco de sangre. La pruebade la antiglobulina fue introducida por Coombs, Mourant y Race en 1945 como métodopara detección de anticuerpos incompletos, denominado así porque no puede causaraglutinación en un medio salino, aún en presencia de sus antígenos eritrocitariosespecíficos .Este es el caso de anticuerpo Rh, que si une al antígeno Rh presente en lasuperficie del eritrocito, pero es incapaz de producir una reacción de aglutinación visible.El fenotipo D- negativo se presenta con una incidencia de aproximadamente 15%en la raza blanca y de 9 a 10% en raza negra .El término DUfue originalmente utilizadopara descubrir la reactividad variable de ciertas sangres con sueros que contienen Anti-Dsalino reactivo. Este término ha sido reemplazado por el término D débil para descubrir lasformas del antígeno D se determina mediante las pruebas de los glóbulos rojos y el Anti-D. En ocasiones, los hematíes de algunas personas Rh-positivas reaccionan débilmenteen la prueba de tipificación Rh estándar (D débil, o Du, positivo), pero siguenconsiderándose Rh-positivas.Fundamento: La albúmina funciona para detectar anticuerpos del sistema Rh (C,D,E,c,e)y el suero de coombs detecta anticuerpos incompletos IgG del sistema Rh .Esto sirvepara que sea visible la aglutinación en caso de que haya reacción de Ag-Ac.Procedimiento:
  22. 22. 22INTERPRETACIÓNSi hay aglutinación Rh + positivoSi no hay aglutinación Rh -negativo1.7 Tiempos de coagulaciónLa hemostasia (interrupción de la salida de sangre de un vaso) está regulada pormecanismos extravasculares (músculo, piel y tejido subcutáneo), vasculares (vasossanguíneos) e intravasculares (adhesión plaquetaria, retracción del coagulo y cuagulaciónde la sangre)La Comisión internacional para la Nomenclatura de los Factores de la Coagulaciónde la Sangre ha designado numéricamente los factores de la coagulación de la sangre;El fibrinógeno y los factores V y VII están ausentes en el suero sanguíneo normalcomo consecuencia del proceso de coagulación. La interacción de los factores de lacoagulación puede desencadenarse a través de las vías intrínseca o extrínseca.
  23. 23. 23En el sistema intrínseco se encuentran presentes todos los factores en la sangre,mientras que en el sistema extrínseco está activado por la liberación de tromboplastinatisular.Aunque la naturaleza exacta de las secuencias enzimáticas del proceso decoagulación no es clara, se trata sin duda de un proceso de amplificación biológica quecomienza a partir de la pequeña reacción que implica el contacto tisular a la rápidaconversión de fibrinógeno en fibrina.Las pruebas de coagulación de rutina efectuadas en el laboratorio son indicadoresde la función vascular (fase vascular y adhesión plaquetaria) o de mecanismos decoagulación intrínsecos.1.7.1 Tiempo de protrombinaSignificado clínicoEs una determinación analítica que se efectúa antes de una intervención quirúrgicapara determinar problemas hemorrágicos potenciales, el TP es la determinación másusada para controlar la terapia con anticoagulantes orales al ser sensible a los factores VIIy X. Las prolongaciones pueden deberse a deficiencias de los factores que integran la víaextrínseca clásica. Factores V, II, X, VII y fibrinógeno a una combinación de dichosfactores o a la presencia de un inhibidor.
  24. 24. 24Fundamento: Se realiza añadiendo una fuente de extracto hístico al plasma citrado,incorporando un exceso de calcio y midiendo el tiempo que tarda en producirse laformación del coágulo.ProcedimientoValores Normales: 8 - 15 segundos1.7.2 Tiempo parcial de tromboplastina activadaSignificado clínicoSe efectúa en plasma citratado mediante la activación de los factores de contacto;la incorporación de un preparado fosfolípido estándar como sustituto de las plaquetas y lamedición del tiempo de formación del coágulo tras la adición de un exceso de calcio. Seprolonga cuando existe una deficiencia de los factores que intervienen en la vía intrínsecaclásica – precalicreína, CEPM, factores XII, XI, IX, VIII, XV, II y fibrinógeno – o por lapresencia de inhibidores contra los factores o complejos de dicha vía.Fundamento: APTT es un reactivo de factor plaquetario 3, conteniendo unactivador particulado y un tampón apropiado. Al mezclarse APTT con el plasma, seobtiene un nivel óptimo de factor plaquetario 3 y una activación uniforme de la muestra.Después de un determinado periodo de incubación a 37 ° C, la reacción se iniciaañadiendo solución de cloruro de calcio, midiéndose el tiempo, en segundos, quetranscurre hasta la formación del coagulo.Procedimiento
  25. 25. 25Valores Normales: 25 – 43 segundos.
  26. 26. 261.8 Velocidad de sedimentación globular (VSG)La velocidad de sedimentación globular es la velocidad a la cual los eritrocitos seasientan de sangre coagulada en una hora.La velocidad de asentamiento depende de: La composición de proteínas del plasma. El tamaño y forma de los eritrocitos. La concentración de los eritrocitos.El incremento de los valores de las proteínas del plasma(principalmente fibrinógeno) resulta en una disminución del potencialzeta (carga negativa) que rodea a los eritrocitos pueden unirse enformación de pila de moneda y asentarse en el plasma a unavelocidad más rápida.De igual manera el tamaño y la forma de los eritrocitos afectan la velocidad desedimentación. Los macrocitos se asientan más rápidamente que los eritrocitosnormales y los microcitos de manera más lenta .Debido a su forma irregular, lospoiquilocitos no pueden formar pilas de monedas y se asientan a una velocidad máslenta.La concentración de eritrocitos afecta directamente a la VSG y mientras mayor seala concentración de eritrocitos menor es a VSG.El material que se utiliza para esta prueba es el siguiente: Tubo de Wintrobe,pipeta de Wintrobe o Pasteur.Procedimiento1.- Realizar toma demuestra en un tubo con EDTA.2.-Antes de empezar la determinación invierta el tubo con muestra suavemente 30 o 40veces para mezclar por completo la sangre y el anticoagulante.3.-Enseguida tome sangre del tubo con una pipeta Pasteur, transfiérela a un tubo deWintrobe y llénelo hasta la marca de “0” 0 “10”. Debe procurar que al vaciar la pipetala punta de ésta quede al fondo del tubo e ir vaciando la sangre suavemente, almismo tiempo que se va retirando la pipeta del fondo.4.-Lleve el tubo de Wintrobe a la gradilla e inicie el conteo de tiempo, dejando reposar lamuestra durante una hora.5.- Transcurrida una hora, mida el espacio que ocupa el sobrenadante desde la superficiehasta el borde superior de los eritrocitos sedimentados, haga la lectura en mm.6.- Reporte sus resultados mm/Hora.Valores de referencia Hombres menores de 50 años; 0 – 15 mm/hora Hombres mayores de 50 años; 0 – 20 mm/hora Mujeres menores de 50 años: 0 – 25 mm/hora Mujeres mayores de 50 años: 0 – 30 mm/hora
  27. 27. 271.9 Recuento de reticulocitosSignificado clínicoLa cuantificación de los reticulocitos presentes en sangre periférica proporciona unmétodo para evaluar la actividad eritropoyética de la medula ósea, la cual se usa en eldiagnostico diferencial de anemias y en la vigilancia de la respuesta eritropoyética de unpaciente en tratamiento.Fundamento: Los reticulocitos son eritrocitos, inmaduros nonucleados que contienen RNA residual, que en condicionesnormales se encuentran en menos del 1% en el torrentesanguíneo, incrementándose éste valor en procesos donde elaporte de oxígeno no es el adecuado.Este tipo de eritrocitos es evidenciado Con el uso de uncolorante supravital (nuevo azul de metileno o azul de crecilobrillante) se precipita el ARN ribosómico residual dentro de losreticulocitos.Un eritrocito que contiene dos o más partículas de material teñido de azul es unreticulocito.Procedimiento1.- Se obtiene la muestra de sangre con EDTA o sangre capilar.2.- Mezclar la muestra adecuadamente invirtiendo el tubo suavemente 30 o 40 vecespara mezclar por completo la sangre y el anticoagulante.3.- De la muestra se añaden dos o tres gotas de sangre en un tubo de ensaye seco ylimpio.4.- En el mismo tubo se le agregan de igual manera dos o tres gotas de colorante azul decresilo al 1%.5.- Se mezcla y se incuba a 37ºC durante 15 a 20 minutos .No se debe pasar de estetiempo.6.- Se vuelve a mezclar y de la suspensión se hacen dos frotis en portaobjetos en laforma habitual, quizá un poco más delgados.7.- Realizar el recuento de reticulocitos al microscopio de la siguiente manera:- Se escoge una zona del frotis en donde no haya superposición de glóbulos.- Es útil contar con un ocular provisto de diafragma ajustable.- Los reticulocitos son de color azul pálido y contienen un retículo o material granular azuloscuro, y los glóbulos rojos se tiñen de color azul pálido o verde azulado.- Contar el número de reticulocitos por 1,00 glóbulos y expréselo como el número dereticulocitos por 100 glóbulos rojos.Valores normalesDe 0.5 a 1.5 %Recién nacidos hasta 2.5 %
  28. 28. 281.10 Prueba de coombsEl Coombs directo se realiza a pacientes en los primeros momentos de unareacción hemolítica y en el diagnóstico de anemias hemolíticas autoinmunes, hemólisisinducidas por drogas, y enfermedad hemolítica del recién nacido.El Coombs indirecto se realiza a pacientes politransfundidos, embarazadas.El Coombs cruzado es una variante del Coombs indirecto y se realiza a pacientespolitransfundidos, pacientes con antecedentes de reacción post transfusionalhemolítica y a multíparas para escoger sangre compatible.Material ReactivosCentrífuga para tubos de mesa- Aglutinoscopio.- Tubos de ensayo de13x100- Gradillas para tubos de ensayo- Jeringuillas de 10 o 20 mL- Agujas 20 o 21- Torundas- Ligaduras- Aplicadores de madera.Anticoagulante EDTA o heparina- Alcohol al 70% o hibitane alcohólico- Suero de Coombs poliespecífico- Suero de Coombs monoespecífico antiIgG y anti C3d.-Solución salina1.10.1 Coombs indirecto y cruzado1. Centrifugue la muestra de sangre 10 min a 3 000 rpm para obtener el suero y decánteloen un tubo debidamente identificado.2. Prepare una suspensión al 2-5 % con la mezcla de hematíes O y en el caso delCoombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar lasuspensión.3. En un tubo debidamente rotulado añada dos gotas del suero y dos gotas de lasuspensión y mezcle bien.4. Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y añada en él dos gotas de lasuspensión de hematíes O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien5. Incube ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos6. Lave tres veces con solución salina escurriendo totalmente el sobrenadante del últimolavado.7. Añada dos gotas de suero de Coombs poliespecífico a cada tubo.8. Centrifugue 1minuto a 1000 rpm.9. Lea desprendiendo suavemente el botón en la lámpara aglutinoscopio.Interpretación de los resultados• Si en la prueba de Coombs directo observa aglutinación esto indica presencia deanticuerpos y /o complemento unidos a los hematíes in vivo, repita nuevamente elprocedimiento pero utilizando los reactivos monoespecíficos anti-IgG y anti-C3d.Patrones de reacciónReactivos monoespecíficos 1 2 3 4_____________________________________________________Anti Ig G + + - -Anti C3 - + + -
  29. 29. 291.10.2 Coombs directoPermite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de unsegundo anticuerpo, que es una antiglobulina. Se basa en el principio de losateroanticuerpos contra componentes del suero humano según la descrita por Mareschi ylos principios de la aglutinación publicados por Landsteiner. Los eritrocitos humanos enpresencia de un anticuerpos dirigido contra un antígeno que posean, pueden sersensibilizadas para no lograr la aglutinación por la naturaleza misma del anticuerpo o elantígeno en cuestión.El suero antihumano, reaccionará contra la gamma globulina que han sensibilizadoa componentes del complemente humano y propiciará la aglutinación de los eritrocitos.El suero antiglobulina humana (de Coombs) permite reconocer estos glóbulos rojossensibilizados al combinarse con los anticuerpos globulinicos que ya cubren su superficie,con lo cual se produce la aglutinación. Puesto que el suero contiene globulinas queneutralizan muy rápidamente los anticuerpos antigobulinas humanas (de Coombs), esevidente que para identificar los glóbulos sensibilizados es absolutamente necesarioremover la totalidad del suero de los glóbulos mediante lavados repetidos (tres cuandomenos) con grandes volúmenes (50 a 100 veces el volumen de los glóbulos rojos) desuero fisiológico estéril. ProcedimientoLa muestra empleada es suero del paciente.1. Preparar glóbulos rojos del grupo O Rh positivos, lavados y resuspendidos al 5%.2. Agregar en un tubo 2 gotas de suero del paciente y 1 gota de glóbulos rojos delgrupo O Rh positivos al 5%.3. Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm.4. Observar si hay o no aglutinación. Si no la hay proceder a la fase de albúmina.5. Agregar dos gotas de albúmina (potenciador) al tubo de la reacción negativa.6. Incubar 30 minutos a 37° C y centrifugar durante 15 segundos a 3400 rpm.li>Observar si hay o no aglutinación. Si no la hay proceder a la fase de Coombs.7. Lavar esta mezcla tres veces con solución salina.8. Agregar 2 gotas de suero de coombs a cada tubo. Centrifugar y leer.9. Comprobar las pruebas negativas con células control de coombs.Interpretación de los resultadosSi la prueba con las células control de coombs es positiva: Demuestra que la técnica de lavado fue correcta y que el reactivo de antiglobulinatiene actividad anti IgG y por lo tanto la prueba es válida. Si la prueba de control es negativa la prueba queda inválida y debe repetirse. Células control de coombs: 4 gotas de anti D + 4 gotas de solución salina + 4gotas de glóbulos rojos Grupo O Rh positivo. Incubar 1 hora a 37 ° C. Lavar 4veces con solución salina. Reconstituir con 2ml de solución salina
  30. 30. 302.- Departamento de serología e inmunologíaLa inmunología se inicio como una rama de la microbiología medica, relacionadacon el estudio de la resistencia a las enfermedades infecciosas. En la actualidad, empero,se le reconoce por meritos propios como un campo de la investigación biomédica, sinlimitarla de ninguna manera a la zona de las infecciones .En realidad el terminoinmunidad, tal como lo usan los inmunólogos, ya no implica necesariamente unarespuesta que resulte protectora para el individuo.Puede considerarse a la inmunidad como un estado de respuesta alterada anteuna sustancia especifica, a causa de un contacto anterior con dicha sustancia.El sistema inmunitario normal tiene como fusión la vigilancia fisiológicaininterrumpida. Protege al cuerpo de la invasión de microorganismos y conserva lahomeostasia al regir la degradación celular normal y la eliminación de células lesionadas.También identifica y elimina células anormales que surgen continuamente en el interiordel cuerpo.Los estudios de disfunción inmunitaria poseen enorme importancia clínica. Elnumero de estudios inmunológicos para estudiar reacciones antígeno-anticuerpo haaumentado rápidamente desde 1975, hasta nuestros días. Las pruebas existentes semodificaron o fueron substituidas por otras que reflejan nuevos datos y técnicas .Losestudios recientes de la respuesta inmunitaria mediada por células y sus componentes secrearon con base en la aplicación de la inmunopotenciación, inmunosupresión einmunomodulación, en la terapéutica clínica. Los mecanismos de defensa inespecíficos yespecíficos protegen al cuerpo contra el ataque de elementos “no propios”.La determinación de este tipo de pruebas son de utilidad para diagnostico deenfermedades de transmisión sexual, problemas de articulación, infecciones pormicroorganismos, y la detección de embarazo. Se cuenta con personal capacitado y conexperiencia para la realización de todas estas pruebas.
  31. 31. 312.1 Factor reumatoideSignificado clínicoEl factor reumatoide es el termino para describir el grupo de autoanticuerpos con actividadanti-IgG; aproximadamente, el 80%-90% de los pacientes con artritis reumatoide tienenanticuerpos IgG. Estos anticuerpos, llamados factor reumatoide (anti.IgG), también se venen la endocarditis bacteriana, quistosomiasis, lepra, osteomielitis, y otras infeccionescrónicas.- También se encuentra en algunos pacientes con otras enfermedades del tejidoconectivo.- Aunque la presencia de este anticuerpo en el suero no causa la enfermedad, elfactor reumatoide, locamente producido en las articulaciones, puede producirefectos y formación de complejos inmunes, pudiendo provocar una respuestainflamatoria.Un 80% de los pacientes con artritis reumatoide tiene un factor reumatoide en su sangre.Fundamento: el factor reumatoide es un anticuerpo circulante que reacciona con algunoscomponentes de inmunoglobulinas, generalmente es un anticuerpo IgM (19 S) quereacciona con inmunoglobulinas de origen animal, humano o autólogas (las propias IgGdel paciente). La prueba de aglutinación con partículas de latex es el método más común,en donde la gamma globulina agregada es absorbida sobre partículas de latex que seaglutinan en presencia de factor reumatoide; esta no es una prueba muy especifica perosi es muy sensible.Procedimiento; prueba cualitativa1. Utilizar reactivos y muestras a temperatura ambiente.2. Preparar una dilución 2:20 del suero problema, diluyendo 0.05 ml del suero con 1ml de solución amortiguadora.3. Poner una gota (aprox. 0.05 ml) del suero diluido en las áreas marcadas de lalaminilla.4. Añadir una gota del reactivo de látex al suero problema.5. Mezclar con un aplicador.6. Agitar durante 2 minutos.7. Observar inmediatamente la aglutinación utilizando una fuente de luz directa.Interpretación-Positivo; Aglutinacion visible de las partículas de latex.-Negativo; No aglutinación o una ligera granulosidad que no excede a laobservada en el control negativo.Nota;- Si hay aglutinación realizar las siguientes diluciones: 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:34 ymultiplicar (2.5) (Dilucion)=Resultado verificado por duplicado.- Si no hay aglutinación reportar: < 2.5 ul/ml
  32. 32. 322.2 Proteína C reactivaSignificado clínicoDurante las infecciones se incrementa la concentración sérica de ciertas proteínas,llamadas proteínas de fase aguda. Una de éstas es la proteína C reactiva (PCR) llamadaasí porque se une a la proteína C de los neumococos. La PCR fue descrita por primeravez en 1931 por Tillet y Francis, quienes reportaron una reacción de presipitacion quepodía ser demostrada en el suero de pacientes que padecían neumonía lobular por cepasde neumococos.El extracto de neumocóccico era un carbohidrato denominado C, y la proteínahumana selectiva capaz de precipitar se le denomino proteína C reactiva.Independientemente de le neumonía lobular, la PCR se ha asociado a una gran variedadde enfermedades infecciosas, a procesos inflamatorios no infecciosos y a ciertospadecimientos malignos.Fundamento: la prueba es usada frecuentemente para monitorear la actividad enpacientes con fiebre reumática y artritis reumatoide. La prueba de PCR látex consiste enusar moléculas inertes biológicamente de poliestireno látex que son sencibilizadas conanti-PCR de origen animal. La PCR presente en el suero del paciente sirve como antígenoy cuando se mezcla con el reactivo de látex sensibilizado se produce una aglutinacióndetectable macroscópicamente.Procedimiento; Método cualitativo en placa.1. Utilizar reactivos y muestras a temperatura ambiente.2. Depositar 0.95 ml de diluyente glicina salina diluido (de acuerdo a las instruccionesdel fabricante) en un tubo de ensaye.3. Añadir a este tubo 0.05 ml del suero problema para asi obtener una dilución 1:20 yestará lista para su uso.4. En un anillo de la placa depositar 0.05 ml del suero diluido.5. Mezclar el reactivo PCR látex hasta tener una suspensión homogénea y añadiruna gota del reactivo de látex a cada suero.6. Mezclar con un aplicador diferente para cada muestra.7. Agitar la placa durante dos minutos.8. Observar inmediatamente la aglutinación utilizando una fuente de luz directa.Interpretación-Positiva: aglutinación visible en las partículas de látex similar a la del suerocontrol positivo.-Negativo: No aglutinación o una ligera granulosidad que no exceda a laobservada e en el control negativo.2.3 Prueba de V.D.R.L.Significado clínicoLa prueba VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) es una reacción defloculación que utiliza cardiolipina para revelar la presencia de anticuerpos anti-Treponemas,y hacer el diagnóstico de la sífilis. Sin embargo, la prueba VDRL no esespecífica para demostrar la presencia de anticuerpos anti-Treponemas, puesto que lacardiolipina se obtiene del corazón de bovinos. A pesar de que la prueba solo permite el
  33. 33. 33diagnóstico de un 75% de los casos de sífilis primaria y de que puede dar reaccionesfalsas positivas con los anticuerpos anti-DNA, la cardiolipina continua siendo un reactivoútil para el diagnostico de la sífilis por las dificultades que existen para cultivar in vitro elTreponema Pallidum.Fundamento: Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum sedetectan en suero por la reacción con un antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado.Si la muestra contiene reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una floculaciónvisible en microscopio. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de antígenoaltamente purificado y el agregado de cloruro de colina característica de la técnica USR(Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la muestra.ProcedimientoTanto los reactivos como la muestra deben estar a temperatura ambiente antes derealizar la prueba.I- PRUEBA CUALITATIVA EN SUERO O PLASMA1. En cada uno de los sectores delimitados de la placa colocar: Muestra; 50 ulCon gotero provisto colocar: Antígeno; 1 gotaAgitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4 minutos. Observar inmediatamenteen microscopio con poco aumento (60 a 100 X).II- PRUEBA SEMICUANTITATIVA EN SUERO O PLASMA1. Preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32 con solución fisiológicay realizar para cada dilución la prueba como se describe en I.III- PRUEBA CUALITATIVA PARA LCR1. Diluir el Antígeno 1:2 con solución de cloruro de sodio 10 g/dl. Emplear dentro delas 2 horas de preparación.2. En cada sector delimitado de la placa colocar: Muestra 50 ulCon aguja calibre 6 agregar: Antígeno diluido 1 gota (10 ul)3. Mezclar bien y agitar horizontalmente la placa durante 8 minutos a 180 rpm.4. Leer los resultados en microscopio con poco aumento (60 a 100 X).Interpretación de los resultados-Reactivo: presencia de floculación.-No reactivo: ausencia completa de floculación.Prueba semicuantitativa: el título estará dado por la inversa de la última diluciónque se observe reactiva. Leer atentamente las LIMITACIONES DELPROCEDIMIENTO.METODO DE CONTROL DE CALIDADPara controlar la calidad del sistema procesar un Control Positivo (sueroseguramente reactivo) y un Control Negativo (suero seguramente no reactivo)utilizándolos de la misma forma que las muestras.
  34. 34. 34LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Resultados falsamentepositivos pueden ser observados en individuos con cuadros patológicos diversos comohepatitis, influenza, brucelosis, lepra, malaria, asma, tuberculosis, cáncer, diabetes yenfermedades autoinmunes.Estos casos no son muy comunes y generalmente presentan reacciones contítulos bajos y una historia clínica que no coincide con las características de sífilis. Esimprescindible por estos motivos ante toda prueba cualitativa reactiva realizar la pruebasemicuantitativa.Resultados falsamente negativos pueden observarse cuando se presenta elfenómeno de prozona. Por este motivo se recomienda repetir la prueba en suero diluido1:5 con solución fisiológica para verificar el resultado. Si en estas condiciones se observafloculación la muestra es reactiva.A pesar de las ventajas de este método, sus resultados al igual que los decualquier prueba serológica, sólo constituyen un dato auxiliar de diagnóstico que debecorroborarse con la historia clínica del paciente.2.4 Reacciones febrilesSignificado clínicoLa infección causada por microorganismos de diversas especies produce entreotros síntomas una marcada elevación de la temperatura, tal es el caso de la fiebretifoidea causada por Salmonella typhi, S. Enteritis, así como las paratifoideas causadaspor S. Paratyphi A y B; y el Tifo causado por el género Rickettsias .La infección por estosmicroorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la producción deanticuerpos que pueden ser detectados por el antígeno especifico.Fundamento: La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerposséricos y el antígeno correspondiente como lo son el Tífico “O” (somático), Tífico “H”(flagelar), Paratífico “A”, Paratífico “B”, Proteus OX-19; produciendo una reacción deaglutinación macroscópica.Procedimiento: Método Cuantitativo1.- Obtener la muestra de sangre sin anticoagulante y separar el sueroque este bien identificada.2.- Llevar los reactivos correspondientes a temperatura ambiente ymarcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno queeste usando (“O”, “H”, “A”, “B”, Proteus OX-19).3.- Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidadesde suero a probar: 0.04 ml, 0.02 ml ,0.01ml, 0.005 ml.4.- Agitar el antígeno a utilizar y añadir una gota de la suspensión acada una de las diferentes cantidades de suero.
  35. 35. 355.- Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de lascantidades de suero.6.- Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante dosminutos.7.- Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinaciónmacroscópica. Reportar de acuerdo a la dilución que haya llegado.Interpretación de los resultadosEl grado de aglutinación se registra como sigue:El titulo del suero será la inversa de la dilución más alta en donde se observa unaaglutinación del 50 % de organismos (2+)Valores Normales: Negativos2.5 Rosa de bengalaSignificado clínicoEs una prueba de aglutinación rápida en placa para la detección temprana deaglutininas especificas de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis).Fundamento: Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo 1 acidificado regulado yteñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininasespecificas de Brucella.Procedimiento:1.- Obtener la muestra de sangre y separar el suero.2.- Utilizando una pipeta automática adicione 30 l de la muestra del paciente en uncírculo de la placa.3.- Mezcle bien el antígeno después coloque una gota sobre el suero y mezcle con unaplicador.4+ Aglutinación del 100% de los organismos3+ Aglutinación del 75% de los organismos2+ Aglutinación del 50% de los organismos1+ Aglutinación del 25% de los organismos- Aglutinación del 0% de los organismosVolumen del suero Titulo0.08 ml 1:200.04 ml 1:400.02 ml 1:800.01 ml 1:1600.005 ml 1:320
  36. 36. 364.- Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos. Y con la ayuda de una fuentede luz directa lea el resultado.Interpretación de resultados.La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir deque se comenzó a mezclar. Este es un tiempo límite óptimo en el que se da un espaciopara la observación de ciertas aglutininas que se revelen lentamente y que de otramanera se pueden omitir.Si hay cualquier cantidad de aglutinación es positiva.Si no hay aglutinación es negativa.Valores Normales: Negativo2.6 Prueba inmunológica de embarazo por inmunoensayocromatográfico con partículas de oro coloidal para detección debeta hcg en orina o suero.Significado clínicoLa gonadotropina coriónoica humana (hCG) es secretada normalmente por laplacenta .En el embarazo, la secreción aumenta tiempo después .La hCG se excreta porla orina y se alcanzan niveles relativamente altos, lo que permite la utilización de técnicasrápidas y simples para la determinación del embarazoDurante el tiempo de atraso del último periodo menstrual, los niveles de hCG essuero son de 100mlU/ ml con niveles pico de 100,000 a 200,000 mlU/ ml observados alfinal del primer trimestre.Fundamento: El ensayo utiliza una combinación única de anticuerpos monoclonales ypoliclonales, reactivos que detectan selectivamente niveles bajos de hCG en la muestra.La prueba se lleva a cabo mediante la adición de muestra en la zona de prueba, seguidode la formación de líneas coloridas en las zonas de la muestra y de control. La muestramigra por acción capilar a lo largo de la membrana y reacciona con los conjugadoscoloridos.Procedimiento:1.- Obténgase la muestra de sangre y separe el suero. O también muestra de orina.2.- Remueva el dispositivo de prueba de su bolsa protectora ypóngalo sobre una superficie plana .Identifique el dispositivo con losdatos del paciente.3.- Sosteniendo el gotero desechable e forma vertical, vierta cinco gotas de suero u orina(aproximadamente 0.2 ml) dentro del orificio de muestra.
  37. 37. 374.- Lea a los 3 minutos muestras de orina y a los 5 minutos muestras de suero.NOTA: Dependiendo de la concentración de HCG, un resultado positivo pude serobservado en tan solo 40 segundos. Sin embargo, para confirmar un resultado negativo,se requiere de esperar 5 minutos.No se deben interpretar los resultados después de 5 minutos.INTERPRETACIÓNNegativo. Únicamente aparecerá una banda de color rosa en la zona de control (C).No aparece banda sobre la región del paciente (T).Positivo. En adición a la banda de control, deberá aparecer una segunda banda decolor rosa en la zona del test (T)No valido. Una total ausencia de color en ambas regiones.2.7 Determinación de HIV y HCVSignificado clínicoLa Prueba Rápida de Anticuerpos HIV y HCV detecta cualitativamente la presenciade anticuerpos VIH y HCV en muestras de suero, plasma o sangre completa. Cualquierpersona expuesta al VIH o HCV producirá los anticuerpos que son indicadores de lainfección. La detección de dichos anticuerpos, representa un resultado positivo (indicandoque el individuo está infectado). La ausencia de anticuerpos al momento de la prueba(indicando que el individuo no está infectado) es indicativo de un resultado negativo, sinembargo no descarta totalmente una infección de VIH o HCV. Puede llevar hasta tresmeses, tras la exposición al VIH o HCV, el desarrollo de estos anticuerpos.Fundamento. La prueba se basa en poner en contacto una muestra de suero con unconjugado de Ag viral-oro coloidal (VIH o HCV) embebido en el pocillo de muestra el cualreacciona con los Ac presentes en la muestra formando un complejo Ac-Ag-conjugado, lamezcla emigra a lo largo de la tira de prueba el cual es captado por un Ag de VIHrecombinante inmovilizado en una membrana y formando una banda colorida en la regiónde prueba.Una muestra negativa no produce una banda colorida debido a la ausencia delcomplejo conjugado de oro coloidal/anticuerpos (anti-VIH o anti-HCV).Los Ag utilizados en la prueba de conjugado son proteínas recombinantes altamenteinmunoreactivas de VIH-1 y VIH-2.
  38. 38. 38Una banda coloreada en la región control aparece al final de la prueba sinconsiderar el resultado de la prueba. Esta banda control es el resultado de la unión delconjugado de oro coloidal al anticuerpo viral (VIH o VIH) inmovilizado en la membrana. Labanda control indica que el conjugado de oro coloidal es funcional.Procedimiento1.- No abrir los sobres sellados hasta que se esté listo para la prueba.Dejar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente.2.- Sacar el cartucho de su sobre y colocarlo en una superficie seca.3.- Identificar los cartuchos para cada muestra o control.4.- Colocar una gota de muestra o control (con el gotero proporcionado) en el pocillo S.5.- Posteriormente agregar 1 gota del diluyente en el pocillo S (para prueba de VIH) y enel pocillo D (para prueba de HCV).INTERPRETACION: POSITIVO: Tanto la banda de prueba como la banda control se colorea de rojopúrpura. NEGATIVO: Solo la banda control aparece de color rojo púrpura en la membrana. INVALIDO: siempre tendrá que haber una banda color rojo púrpura en la regiónde control independientemente del resultado de la prueba. Si la banda control nose observa la prueba se considera inválida. Repetir la prueba empleando un nuevocartucho.C C C C CT T T T TPositivo Negativo Inválido
  39. 39. 393.- Departamento de orinasDesde hace mucho tiempo se reconoceque las propiedades físicas y químicas de la orinaconstituyen indicadores importantes del estado desalud.El análisis de orina incluye el examen delcolor, del aspecto, de la densidad, del pH, ladetección de proteínas, glucosa, cetonas, sangreoculta, bilirrubinas, nitrito urobilinógeno, así comoel examen microscópico del sedimento.Los principales constituyentes de la orina son agua, urea, ácido úrico, creatinina,sodio, potasio, cloro, calcio, magnesio, fosfatos, sulfatos y amoniaco. En 24 horas elorganismo excreta aproximadamente 60g de material disuelto, la mitad de la cual estaconstituida por urea. En algunos procesos patológicos aparecen en gran cantidad,sustancias tales como cuerpos cetónicos, proteínas, glucosa, porfirinas y bilirrubina. Laorina también puede contener estructuras como cilindros, cristales, células sanguíneas ycélulas epiteliales.Entre las enfermedades urológicas que el análisis de orina ayuda a diagnosticarpueden mencionarse la cistitis (inflamación de la vejiga), la nefritis (inflamación del riñónque puede presentarse con infección bacteriana, pielonefritis o sin ella, glomerulonefritis)y la nefrosis (degeneración del riñón sin inflamación).Significado clínicoLa orina es un material que permite obtener una considerable información, deforma rápida y económica. Los análisis de orina deben realizarse de forma cuidadosa yperfectamente controlada. El estudio de la orina puede plantearse desde dos puntos devista: diagnostico de enfermedades renales o de tracto urinario y para la detección deenfermedades metabólicas o sistémicas no directamente relacionadas con el sistemaurinario.Fundamento: La orina es una solución acuosa de sustancias orgánicas e inorgánicas, delas cuales la mayor parte, son de desecho del metabolismo celular .Las tiras reactivasAmes –Bayer para uroanalisis son bases plásticas en las que hay adheridas diversasáreas reactivas para determinar glucosa, bilirrubina, cetona, gravedad, pH, leucos, etc.Los resultados obtenidos proporcionan información referente al metabolismo decarbohidratos, función hepática, y renal, balance ácido base e infecciones del tractourinario.
  40. 40. 403.1 Recolección de la muestra de orinaLa muestra deberá recolectarse en un recipiente estéril, limpio y seco, depreferencia deberá ser la primera de la mañana por ser la más concentrada y amitad de chorro, a fin de evitar su contaminación por alguna descargahemorrágica.El análisis de la orina recolectada en 24 hrs. Y adecuadamente conservada,proporciona una medida cuantitativa más exacta de la excreción de proteína yotros constituyentes.La cateterización se considera como un procedimiento innecesariamentepeligroso, debido a riesgo de que cause infecciones genitourinarias y pielonefritis.A veces puede ser necesario taponar la vagina, pero las muestras de orinalibremente emitidas son preferibles.La orina debe examinarse siempre fresca, de ser posible, dentro de los 30minutos siguientes a su emisión y a una temperatura no menor de 20 ° C.Evitar la presencia de conservadores o diluyentes, rotular con los datoscompletos del paciente.3.2 Examen físico de la orinaEl examen físico se debe realizar en la muestra previamente agitada y sincentrifugar.ColorLa orina normal presenta una amplia gama de colores, lo cual está determinadopor su concentración. El color puede variar de un color amarillo pálido a un ámbar oscuro,según la concentración de los pigmentos urocrómicos.Sin embargo existen muchos factores y constituyentes que pueden alterar el colornormal de la orina, incluyendo medicamentos así como productos químicos. En elsiguiente cuadro se presentan algunas sustancias que pueden influir en el color.SUSTANCIAS QUE PUEDEN COLOREAR LA ORINACOLOR PATOLÓGICAS NO PATOLÓGICASBlanco QuiloPus (muchos leucocitos)FosfatosAmarillo a anaranjado BilirrubinaUrobilinaAcriflavinaAzo-GanstrisinColorantes de alimentosNitrofurantoninaOrina concentradaPyridiumQuinacrinaRiboflavinaRibarboSenaSerotonina
  41. 41. 41Rosado a rojo EritrocitosHemoglobinaMioglobinaPorfobilinaPorfirinasAminopirinaAntipirinaBromosulftaleinaCascaraColorantes de alimentosFenacetinaFenolftaleinaMetildopaRemolachaRojo a castaño a púrpura PorfobilinaPorfobilinogenoUroporfirinaCastaño a negro Ácido homogentisicoBilirrubinaFenolMelaninaMetahemoglobinaMioglobinaPorfirinasCompuestos de hierroCloroquinaHidroquinonaLevodopaMetildopaNitroforantoinaQuininaResorcinolAzul a verde BiliverdinaInfección por pseudomonasAcriflavinaAmitriptilinaAzul de EvansAzul de metilenoAzur AComplejo de vitamina BCreosotaFenil salicilatoTimolTolonioTriampirenoSi bien algunos laboratorios ya no informan mas sobre el color de la orina, nodeben subestimarse las pistas dadas por las características físicas. Debería informarsesiempre sobre todo color muy anormal, como negro o castaño, así como también lapresencia de orinas rojas con lectura negativa para sangre oculta.AspectoLa orina habitualmente es clara pero puede tornarse turbia por precipitación departículas de fosfato amorfo en orinas ácidas. La orina puede ser turbia por presencia deleucocitos o de células epiteliales. Las bacterias pueden causar turbidez. El moco puededar a la orina un aspecto brumoso.OlorExisten solo unas pocas sustancias donde el olor de la orina tiene importancia. Lascetonas pueden concebirle un olor dulce o a frutas. Una muestra contaminada conbacterias puede tener un olor picante. Se dice que la orina de un lactante confenilcetonuria tiene un olor “rancio” o “a ratón”. El olor de orina que se asemeja al de “piessudados” se encuentra en la acidemia isovalerica o en individuos que presentancantidades excesivas de ácido butírico o hexanoico. La hipermetioninemia a sido asociadacon un olor a “manteca rancia” o a “pescado”.
  42. 42. 42Peso especificoEl peso especifico es la relación o cociente entre el peso de un volumen de orina yel peso del mismo volumen de agua destilada medidos a una temperatura constante.Constituye un índice de la concentración del material disuelto en la orina. El pesoespecífico se utiliza para medir el poder concentrador y diluyente del riñón en su esfuerzopor mantener la homeostasis en el organismo.El intervalo normal para una muestra tomada al azar es de 1.003 – 1.035 aunqueen casos de hidratación excesiva la lectura puede llegar a 1.001 (el valor del agua es 1).El valor varía enormemente según el estado de hidratación y el volumen urinario. El rangopara la muestra de 24 hrs. es de 1.015 – 1.025.3.3 Examen químico de la orinaEl análisis de orina incluye pruebas químicas para pH, proteínas, glucosa, cetonas,sangre oculta, bilirrubinas, nitrito y urobilinógeno. Estos procedimientos pueden sermediciones cualitativas (positivos o negativos) o semicuantitativas (por ejemplo, de trazasde 4+).Desde la introducción de tiras reactivas simples y múltiples el examen químico dela orina se ha convertido en un procedimiento sensible y rápido. Actual mente es posibleanalizar hasta 9 pruebas diferentes en menos de 60 segundos.Una tira reactiva es esencialmente una banda angosta de plástico con pequeñostacos adheridos. Cada taco contiene reactivos para una reacción diferente.El procedimiento para usar las tiras reactivas es el siguiente:1) Sumergir completamente las áreas de prueba de la tira en orina fresca, bienmezclada y sin centrifugar y retirar la tira en forma inmediata.2) Eliminar el exceso de orina en la tira.3) Comparar las áreas reactiva con la correspondiente carta de colores del envase.pH URINARIOEl pH de la orina esta determinado por la concentración de H+libre.Como el pH es la reciproca de la concentración de ion hidrogeno (H+), a medidaque la concentración de este ion aumenta, el pH disminuye y viceversa. El pH de la orinapuede variar entre 4.6 y 8, pero en promedio se encuentra alrededor de 6.Tiras reactivasUtilizan dos indicadores, el rojo de metilo y el azul de bromotimol, que cubren laescala de pH entre 5 y 8, 5 o 9. Los colores van del anaranjado al amarillo y del verde alazul.PROTEINASEn el riñón normal solo una pequeña cantidad de proteínas de bajo peso molecularse filtra en el glomérulo. La mayor parte de la proteína filtrada se reabsorbe en lo túbulos;se excretan <150 mg/24h (o 20mg/dl) de proteína. En el niño la excreción normal es de100mg/m2/24h.Puede observarse que existen dos mecanismos principales que pueden dar lugara una proteinuria: el daño glomerular o un defecto en el proceso de reabsorcion a niveltubular.
  43. 43. 43Tiras reactivasEsta prueba está basada en el principio conocido como indicadores de error deproteína. A un pH constante, el desarrollo de cualquier color verde es debido a lapresencia de proteínas. Los colores formados van desde amarillo verdoso y verde hastaazul verdoso para las pruebas positivas.GLUCOSALa cantidad de glucosa que aparece en la orina depende del nivel de la glucemia,de la velocidad de filtración glomerular y del grado de reabsorción tubular. Por lo generalno existe glucosa en la orina hasta que en nivel de glucosa en sangre no supera los 160 –180 mg/dl cifra que es el umbral renal normal para la glucosa. Cuando el nivel de laglucemia supera el umbral renal, los túbulos no pueden reabsorber toda la glucosa filtraday se produce glucosuria.Tiras reactivasEsta prueba está basada en una reacción enzimática secuencial doble. Unaenzima, la glucosa oxidaza, cataliza la formación de ácido gluconico y peróxido dehidrogeno a partir de la oxidación de la glucosa. Una segunda enzima, la peroxidaza,cataliza la reacción entre él peróxido de hidrogeno y el cromógeno yoduro de potasio paraoxidar al cromógeno y producir colores que van de verde a café.CETONASLos cuerpos cetónicos se forman durante el catabolismo de los ácidos grasos.Cuando la capacidad de los tejidos para utilizar los cuerpos cetónicos es superada,el exceso se excreta en la orina.Tiras reactivasEsta prueba esta basada en la reacción que se produce entre el ácidoacetoacetico y el nitroprusido. Los colores formados van desde un rosa moderado, paralas lecturas negativas, hasta un color púrpura.SANGRE OCULTALos métodos químicos que se utilizan en el examen de orina para detección desangre (Hematuria: presencia d sangre o de hematíe intactos en la orina), tambiéndetectan hemoglobina libre (Hemoglobinuria: presencia de hemoglobina libre en la orinacomo consecuencia de hemolisis intravascular) y mioglobina (Mioglobinuria: aparece enprocesos en los cuales hay destrucción muscular).Los glóbulos rojos pueden entrar en la orina en cualquier sitio, desde el glomérulohasta la uretra.Tiras reactivasEsta prueba está basada en la acción de la hemoglobina, que mimetiza, la acciónde la peroxidaza, catalizando la reacción entre el hidroparoxido de cumeno y la 3, 3´,5, 5´tetrametilbenziolina. Los hematíes intactos de la orina se hemolisan al contacto con eltaco reactivo. La hemoglobina liberada reacciona con el reactivo dando puntos verdessobre el fondo amarillo o anaranjado. Entonces, la presencia de hematíes intactos da unareacción de color verde punteado, mientras que la hemoglobina libre y la mioglobina dauna coloración uniforme de color verde o del verde al azul oscuro.
  44. 44. 44BILIRRUBINA Y UROBILINOGENOLa bilirrubina se forma a partir de la degradación de la hemoglobina en el sistemareticuloendotelial; unida a la albumina, es transportada por la sangre hasta el hígado. Estabilirrubina libre o no conjugada es insoluble en agua y no puede filtrar a través delglomérulo. En el hígado es captada por las células parenquimatosas y conjugadas conácido glucurónico para formar diglucuronido de bilirrubina. Esta bilirrubina conjugada eshidrosoluble y se excreta por el hígado a través del conducto biliar hacia el duodeno.Normalmente, cantidades muy pequeñas de bilirrubina conjugada siguen el caminoinverso (regurgitación) desde el conducto biliar hacia el sistema sanguíneo. Enconsecuencia pueden encontrarse cantidades muy pequeñas de bilirrubina en plasma.Como la bilirrubina conjugada no esta unida a las proteínas filtra fácilmente a través de losglomérulos y es excretada en la orina toda vez que aumenta el nivel plasmático.En el intestino, las enzimas bacterianas, convierten la bilirrubina en diversoscompuestos relacionados que se denominan en forma colectiva “urobilinógeno”. La mayorparte del urobilinógeno se pierde con las heces. Aproximadamente el 10 – 15% delurobilinógeno es reabsorbido, pasa al torrente sanguíneo, retorna al hígado y esexcretado hacia el intestino. Una pequeña cantidad de este urobilinógeno se excretatambién por los riñones, y en la orina existe un nivel normal de aproximadamente 1 – 4mg/24h.Tiras reactivasBilirrubina: Esta prueba esta basada en el acoplamiento de la bilirrubina con ladicloroanilina diasotizada en un medio fuertemente ácido.Urobilinógeno: Esta prueba esta basada en la reacción de Ehrlich, el la cual elp-dimetilaminobenzaldeido reacciona con el urobilinógeno en un medio fuerte mente ácidopara producir un color rosa.NITRITOSLa prueba para detección de nitrito es un método rápido, indirecto, para eldiagnostico temprano de bacteriuria significativa y asintomática. Los organismos comunesque causan infección del tracto urinario, como la Escherichia Coli, el Citrobacter, laKlebsiella y las especies de Proteus, contienen enzimas que reducen el nitrato de la orinaa nitrito.Tiras reactivasEsta prueba depende de la conversión de nitrato a nitrito por la acción de bacteriasGram-negativas presentes en la orina. El nitrito reacciona con el ácido p-arsanilico en unmedio ácido para formar un compuesto de diazonio. El compuesto de diazonio a su vez seacopla con la 1, 2, 3, 4 - tetrahidrobenzoquinolina para producir un color rosa.3.4 Examen microscópico de la orinaEl examen microscópico del sedimento constituye una parte vital del análisis deorina. Es una herramienta diagnostica valiosa para detección y evaluación de trastornosrenales y del tracto urinario, así como de otras enfermedades sistémicas.
  45. 45. 45PREPARACIÓN DEL SEDIMENTOEl examen microscópico debe hacerse en una muestra centrifugada. Se mezcla lamuestra y se colocan aproximadamente 10 – 5ml de orina en un tubo de centrifugación.Se centrifuga a 2000 rpm durante 5 minutos. Se elimina el liquido sobrante y se suspendeel sedimento en la orina que baja por las caras del tubo. Se dan golpecitos en la parteinferior del tubo para mezclar el sedimento. Se coloca una gota de este en un portaobjetoslimpio. Se cubre con un cubreobjetos y se examina inmediatamente.CÉLULASEntre las células que pueden estar presentes en la orina se encuentran eritrocitos,leucocitos y células epiteliales provenientes de cualquier punto del tracto urinario, o comocontaminantes procedentes de vagina o vulva.Eritrocitos. Los hematíes presentes en la orina pueden provenir de cualquier punto deltracto urinario, desde el glomérulo hasta el meato urinario, y en la mujer constituyen aveces contaminación menstrual.Normalmente no aparecen hematíes en la orina; sin embargo, la presencia de 1 – 2hematíes/campo por lo general no se considera anormal. El mecanismo por el cual loshematíes entran en la orina no esta aclarado totalmente.Hematuria es una presencia de un numero elevado de hematíes en la orina.Leucocitos. Los glóbulos blancos pueden entrar en cualquier punto del tracto urinariodesde el glomérulo hasta la uretra. En promedio, la orina normal puede contener hasta 2glóbulos blancos / campo.Pueden aparecer en forma aislada o en acúmulos. La mayoría de los leucocitos de laorina son neutrofilos.El aumento de leucocitos en la orina esta asociado con procesos inflamatorios en eltracto urinario o en sus adyacencias.Células epiteliales. Las células epiteliales presentes en la orina pueden provenir decualquier sitio del tracto urinario, desde los túbulos contorneados proximales hasta lauretra, o de la vagina. Normalmente pueden encontrarse algunas células epiteliales en laorina como consecuencia del desprendimiento normal de células viejas. Un incrementomarcado indica una inflamación de la porción del tracto urinario de donde procedeCRISTALESPor lo general no se encuentran cristales en la orina recién emitida, pero aparecendejándola reposar durante un tiempo. Cuando la orina esta sobresaturada con uncompuesto cristalino particular, o cuando las propiedades de solubilidad de este seencuentran alteradas, el resultado es la formación de cristales.Cristales de ácido úrico. Pueden aparecer con muy diversas formas, como eldiamante o prisma romboico y la roseta. En ocasiones pueden tener seis caras. Tienencolor amarillo o rojo – castaño.Los estados patológicos en los cuales se observan cristales de ácido úrico en la orinason la gota, el metabolismo de las piurias aumentado, enfermedades febriles agudas,nefritis crónica y el síndrome de Lesch – Nyhan.
  46. 46. 46Cristales de oxalato de calcio. Son incoloros, de forma octaédrica o de “sobre”,parecen cuadrados pequeños cruzados por líneas diagonales que se interceptan. Alencontrar un típico cristal de oxalato de calcio el observador ve la “X” del cristalsobresaliendo en el campo.Pueden existir normalmente en la orina, en especial después de ingerir diferentesalimentos ricos en oxalato, como tomate, ruibarbo, ajo, naranjas y espárragos.Los estados patológicos en los que puede existir oxalato de calcio en la orina encantidad aumentada son la intoxicación con etilenglicol, diabetes mellitus, enfermedadhepática y enfermedad renal crónica grave.Urato amorfo.Con frecuencia hay en la orina sales de urato (de sodio, potasio,magnesio y calcio) en una forma no cristalina, amorfa. Estos uratos amorfos tienenaspecto granular y color amarillo-rojo. Carecen de significación clínica.Cristales de Ácido Hipúrico. Son prismas o placas enlongadas amarillo castaño oincoloras. Pueden ser tan delgadas que parecen agujas, y con frecuencia estaagrupados. Carecen de significación clínica.Uratos de sodio. Son agujas o prismas delgados, incoloros o amarillentos que sepresentan en grupos o racimos. Carecen de significación clínica.Cristales de Sulfato de calcio. Son agujas o prismas largas, delgadas e incoloras.Carecen de significación clínica.Cristales de Cistina. Son placas hexagonales, refringentes e incoloras, cuyos ladospueden ser iguales o no. Aparecen en pacientes con cistinosis o cistinuria congénita ypueden formar cálculos.Leucina. Son esferoides oleosos, altamente refractarios de color amarillo o castañocon estriaciones radiales y concéntricas. Se encuentran en orina de pacientes con laenfermedad de la orina en jarabe de arce, con síndrome de Smith y Strang y conenfermedades hepáticas graves como cirrosis terminal, hepatitis viral grave y atrofiaamarilla del hígado.Tirosina. Son agujas muy finas, altamente refringentes que aparecen en grupos oacúmulos. Los cúmulos de agujas con frecuencia aparecen de color negro, sobretodo enel centro, pero pueden tomar una coloración amarilla en presencia de bilirrubina.Los cristales de tirosina aparecen en enfermedades hepáticas graves, en la tirosinosisy en el síndrome de Smith y Strang.Colesterol. Son placas de gran tamaño, planas y transparentes, con ángulos mellados.La presencia de placas de colesterol en la orina es índice de una excesiva destruccióntisular; estos cristales se observan en cuadros nefríticos y nefróticos y también en caso dequiluria.Fosfato triple. Son prismas incoloros de tres o seis caras que con frecuencia tienenextremos oblicuos. Aparecen en pielitis crónica, cistitis crónica, hipertrofia de próstata.
  47. 47. 47Fosfato amorfo. Las sales de fosfato con frecuencia están presentes en la orina enforma no cristalina, es decir, como sustancias amorfas. Se distingue de urato amorfo porel pH. Carece de significación clínica.Biurato de amonio. Son cuerpos esféricos de color amarillo castaño, con espiculaslargas e irregulares. Constituyen una anormalidad solo si se encuentran en orinas reciénemitidas.CRISTALES OBSERVADOS EN SEDIMENTO URINARIOCILINDROSCilindros Hialinos. Son incoloros, homogéneos y transparentes y por lo general tienenextremos redondeados.Cilindros eritrocitarios. Los cilindros eritrocitarios pueden tener color castaño o sercasi incoloros. Pueden estar formados por unos pocos glóbulos rojos en una matrizproteica, o bien por muchas células aglomeradas sin matriz visible.Cilindros leucocitarios. La mayoría de los leucocitos que aparecen en los cilindrosson neutrofilos polimorfonucleares. En el cilindro puede haber unos pocos leucocitos obien puede estar formado por muchas células aglomeradas.Cilindros granulosos. Pueden formarse a partir de la degradación de cilindroscelulares, o bien por la agregación directa de proteínas séricas en una matriz demucoproteinas de Tamm-Horsfall.Cilindros de células epiteliales. Se forman como consecuencia de las estacasurinarias y de la descamación de células del epitelio tubular. Pueden estar ordenadas enhileras paralelas o carecer de ordenación.CILINDROS OBSERVADOS EN SEDIMENTO URINARIO
  48. 48. 48ESTRUCTURAS DIVERSASBacterias. Normal mente en la orina a nivel renal y vesical no existen bacterias, peropuede contaminarse por bacterias presentes en la uretra, en la vagina o procedentes defuentes externas. Cuando una muestra de orina correctamente recolectada contiene grannumero de bacterias, por lo general es índice de infección del tracto urinario.Hongos. Las células micóticas son uniformes, incoloras por lo general de forma ovoidecon pared de doble refringencia. Pueden tener diferente tamaño y con frecuenciamuestran gemación.Espermatozoides. Pueden existir espermatozoides en la orina masculina después deconvulsiones epilépticas, poluciones nocturnas, enfermedades de órganos genitales y enla espermatorrea. En ambos sexos después del coito.Filamento de moco. Son estructuras de forma acintada, largas, delgadas y ondulantesque pueden mostrar tenues estriaciones longitudinales.Parásitos. Ocasionalmente pueden encontrarse parásitos en la orina, sea porqueocupan el tracto urinario, sea como resultado de contaminación fecal o vaginal.La Trichomonas vaginalis es el parásito que más a menudo se observa en la orina.Pueden encontrarse huevos y en ocasiones el adulto o hembra de Enterobiusvermicularis.Valores Normales:Volumen: Variable (ml) Sedimento:Color: Amarillo I Leucocitos: Menos de10/campoAspecto: Transparente Eritrocitos: No se observanDensidad: 1.010- 1.025 Cilindros: No se observanPH: 4.5 –8.0 Filamento mucoso: NegativoGlucosa: Negativo Levaduras: NegativoCetona: Negativo Cristales: Negativo.Proteínas: NegativoBilirrubinas NegativoUrobilinogeno: NegativoNitritos: NegativoSangre: NegativoLeucocitos: Negativo
  49. 49. 494.- Departamento de Química clínicaEn este departamento se encarga deevaluar a los pacientes con síntomas de deficienciao alteración respecto a cantidades de las distintassustancias en el cuerpo humano normal,determinados mediante la evaluación de una granmuestra de sujetos supuestamente sanos. Losvalores normales se expresan en rangos numéricosy pueden variar de un laboratorio a otro. Aquí seevalúan las moléculas de carbohidratos, enzimas,proteínas y electrolitos.Los grupos principales que se evalúan son:química sanguínea, pruebas funcionales hepáticas,enzimas cardiacas, enzimas pancreáticas, yelectrolitos.Las enzimas son proteínas de uso repetitivo que catalizan las innumerablesreacciones químicas necesarias para conservar a las células vivas, y con sus funciones.Aceleran y controlan la rapidez de las reacciones sin ser destruidas por sí mismas en elproceso .Los diferentes tipos de células producen enzimas distintas, y casi todos lostejidos contienen sustancias de muy diversa índole d esta categoría. Los análisis puedenrevelar la magnitud del daño e indicar la evolución de la curación.Las proteínas del suero, que son los compuestos que más abundan en dicholíquido, tienen funciones muy diferentes de las proteínas tisulares. Poseen enormeimportancia en el diagnostico, por sus funciones vitales y heterogéneas, por su acciónneutralizadora, y servir como fuente de reserva de elementos nutritivos para los tejidos,entre otras cosas.
  50. 50. 504.1 Analizador de química clínica y electrolitos VITROS 250.Analizador de química clínica y electrolitos, que supera todas las expectativas delos laboratorios relativas a innovación, rapidez y eficiencia con la incorporación de latecnología de la química seca.Figura 5. Analizador de química clínica y electrolitos VITROS 250.Características del vitros 250.- 1 a 6 pruebas diferentes con 50 ul de muestra.- Procesamiento de 250 pruebas por hora.- Dos tipos de lectura en forma simultanea, reflectometria y potenciometria.- 7 a 30 pruebas diferentes con 150ul de muestra.- Mínimas instalaciones especiales, pues no requiere del suministro de agua tratada.- Amplio menú de pruebas; 43 directas y 14 calculadas, en un mismo analizador.- Mantenimiento diario mínimo de 5 &ndash; 10 minutos.- Mínimo espacio para el almacenamiento de los reactivos- Tres calibraciones al año para todas las pruebas incluidas los electrolitos y las pruebasespeciales, equivalente a menor gasto de reactivos.- Control de calidad una vez al día en un solo turno de trabajo, equivalente a optimizar losrecursos del laboratorio pormenor gasto de reactivo.- Eficiencia superior al 80%.- Capacidad de realizar determinaciones de Bilirrubina Neonatal.- Capacidad de realizar determinaciones de Bilirrubina Delta.- Identificación de pacientes y programación de pruebas por código de barras ya quepermite ser conectado en red.- Comunicación bidireccional.- Eliminación de cambio de electrodos.- Detección de coágulos de fibrina previo al dispensado de reactivos.- Reactivos listos para usar, no requiere de la preparación de soluciones de trabajo yelimina errores de reconstitución.- Eliminación de contaminación por arrastre de reactivo y/o muestras.- Capacidad de procesar perfiles de pruebas y programación de pacientes de urgencias(Stat).- Menor manejo de inventario de pruebas.- Almacenamiento en memoria de 5000 pacientes, con hasta 30 pruebas por paciente.- Capacidad de generar estadísticas de carga de trabajo por prueba.- Dilución Automatica con puntas individuales,listo multiplicado por factor de dilución.
  51. 51. 51MENU DE PRUEBASDROGASACETAMINOFENOALCOHOLAMONIOCARBAMAZEPINADIGOXINAFENOBARBITALFENITOINASALICILATOSTEOFILINARUTINAACIDO URICOALBUMINAALKPALTASTBILIRRUBINA TOTALBILIRRUBINA CONJUGADA Y NOCONJUGADABILIRRUBINA NEONATALBUN / UREACOLESTEROLCREATININAGLUCOSAHDLCPROTEIINA C REACTIVAPROTEINAS URINARIASPROTEINAS TOTALESPROTEINAS LCRTRIGLICERIDOSELECTROLITOSSODIOPOTASIOCLOROLITIOMAGNESIOESPECIALESACTIVIDAD CK-MBCKAMILASACALCIOCOLINESTERASADIOXIDO DE CARBONOFOSFOROGGTGLOBULINAHEMOGLOBINAHIERROTIBCLACTATOLDHLDL (DIRECTO)LIPASACOLINESTERASAFOSFATASA ALCALINADERIVADASALBUMINA / GLOBULINABUN / CREATININACK-MB / CKCOLESTROL / HDLOSMOLARIDADPORCENTAJE DE SATURACION ANIONGAP CON POTASIOANION GAP SIN POTASIOBILIRRUBINA DELTABILIRRUBINA DIRECTAVLDL
  52. 52. 52Valores de referencia.β Albúmina: 3.9 a 5.0 mg/dLβ Fosfatasa alcalina: 44 a 147 UI/Lβ ALT (alanina transaminasa): 8 a 37 UI/Lβ AST (aspartato de aminotransferasa): 10 a 34 UI/Lβ BUN (urea en la sangre): 7 a 20 mg/dLβ Calcio en suero: 8.5 a 10.9 mg/dLβ Cloruro en suero: 101 a 111 mmol/Lβ CO2 (dióxido de carbono): 20 a 29 mmol/Lβ Creatinina: 0.8 a 1.4 mg/dL **β Bilirrubina directa: 0.0 a 0.3 mg/dLβ Gama GT (gamma-glutamiltranspeptidasa): 0 a 51 UI/Lβ Examen de glucosa: 64 a 128 mg/dLβ DHL (lactato de deshidrogenasa): 105 a 333 UI/Lβ Fósforo en suero: 2.4 a 4.1 mg/dLβ Examen de potasio: 3.7 a 5.2 mEq/Lβ Sodio en suero: 136 a 144 mEq/Lβ Bilirrubina total: 0.2 a 1.9 mg/dLβ Colesterol total: 100 a 240 mg/dLβ Proteína total: 6.3 a 7.9 g/dLβ Ácido úrico: 4.1 a 8.8 mg/dL**Nota: los valores normales o "saludables" para la creatinina pueden variar con la edad.Puede haber disminución en la función renal y en la masa muscular con la edad o nivelesmuy altos de masa muscular en un atleta joven. El médico puede interpretar y explicarleestos valores a la persona.Clave para las abreviaciones:UI = unidades internacionalesL = litrodL = decilitro = 0.1 litrog/dL = gramos por decilitromg = miligramosmmol = milimolesmEq = miliequivalentesElectrolitos:Los iones cargados positivamente (cationes) son, entre otros, sodio, potasio, calcioy magnesio.Los iones cargados negativamente (aniones) son, entre otros, los iones de cloruro,bicarbonato (esencialmente el mismo del CO2), proteína, fósforo, SO4 y ácidosorgánicos.Cuando se hace un examen de electrolitos, los iones medidos por lo generalincluyen sodio, potasio, cloruro y bicarbonato; además, los niveles de calcio y magnesiose obtienen en muchas instituciones como parte de este examen.Consideraciones especialesLas venas y las arterias varían de tamaño de un paciente a otro y de una parte delcuerpo a otra, por tal razón obtener una muestra de sangre de una persona puede sermás difícil que de otras.

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