Successfully reported this slideshow.
We use your LinkedIn profile and activity data to personalize ads and to show you more relevant ads. You can change your ad preferences anytime.

Timelapse gr

1,002 views

Published on

Παρακολούθηση εμβρύων κατά χρονικές περιόδους (time-lapse)

PDF, presentation of Time Lapse Talk at Mitera, Athens in Greek

Published in: Health & Medicine
  • Be the first to comment

Timelapse gr

  1. 1. 23/11/2011 Μορφοκινητικές μελέτες σε in vitro έμβρυα και παράμετροι επιλογής εμβρύου για επιτυχή εγκυμοσύνη.Time lapse observations in pre-implantation embryos and factors effecting implantation potential ART Σήμερα• 1-4% παιδιά έχουν γεννηθεί στην Ευρώπη• 400,000 κύκλοι/έτος• 22% πολύδημες γεννήσεις• Ποσοστό επιτυχίας σχετικά χαμηλό• Τάση στην Β. Ευρώπη μείωσης των πολύδημων κυήσεων/ SET• Ανησυχία για τη δημόσια υγεία Andersen (ESHRE) 2009, Seli 2011 1
  2. 2. 23/11/2011 ART Σήμερα• 1-4% παιδιά έχουν γεννηθεί • Ανικανότητα επιλογής του στην Ευρώπη εμβρύου με την καλύτερη δυναμική• 400.000 κύκλοι/έτος • Μη παρεμβατικές τεχνικές• 22% πολύδημες γεννήσεις “omics” :πολλά υποσχόμενες δυνατότητες αλλά• Ποσοστό επιτυχίας σχετικά χρονοβόρες-τεχνικά χαμηλό απαιτητικές• Τάση στην Β. Ευρώπη μείωσης • Παρεμβατική-βιοψία των πολύδημων κυήσεων/ SET εμβρύου-FISH αντικαθιστάται από CGH• Ανησυχία για τη δημόσια • Ακόμα βασίζεται στην υγεία παρατήρηση Andersen (ESHRE) 2009, Seli 2011 Επιλέγοντας το καλύτερο έμβρυο Τα Στάδια της διαίρεσης του εμβρύου 19 ώρες 48 ώρες 72 ώρες 115 ώρες 2
  3. 3. 23/11/2011Elder, 2007 Μορφολογία Προπυρήνων * 3
  4. 4. 23/11/2011 Μορφολογία Προπυρήνων *Προσανατολισμός Προπυρήνων Balaban. Hum. Reprod. 16.11. (2001) 4
  5. 5. 23/11/2011Προσανατολισμός Προπυρήνων Τρέχουσα υπόθεση: οι προπυρήνες παράλληλοι στον πολικό άξονα Πρώτη διαίρεση Διαφορετικές στρατηγικές για την ημέρα της εμβρυομεταφοράς: ? Ημέρα 5 Μόνο στο στάδιο της βλαστοκύστης ‘Υψηλότερα ποσοστά …. ……..εμφύτευσης ? Ημέρα 2-3 ή 5 Όποια και αν είναι η προσέγγιση- βασίζεται στην μορφολογία- δύσκολη η πρόβλεψη 51% 5ης ημέρας έμβρυα προεπιλέγονται την 3η ημέρα (Rijenders, 1998 ) 5
  6. 6. 23/11/2011 2010 Σύστημα Βαθμολόγησης Μορφολογία προπυρήνα Πρώιμη 1η διαίρεση Παρουσία κυστιδίων, πολλαπλών πυρήνων Αριθμός βλαστομεριδίων /στάδιοFranscovits, 2006 6
  7. 7. 23/11/2011 Η εμφύτευση συνδέεται με ακριβή χρονικά γεγονότα Γεγονός Εμφάνιση Εξαφάνιση 1st διαίρεση 2nd διαίρεση 3rd διαίρεση προπυρήνων προπυρήνωνΔιακύμανση 7.8-11.1 Εκτός 22.3- Εκτός 24.4-28.2 Εκτός 35.3-40.6 Εκτός 36.0-41.6 Εκτός (h) διακύμαν 25.8 διακύμαν διακύμαν διακύμαν διακύμαν σης σης σης σης σης 100% 15 13 23 12 23 12 13 5 19 7εμφύτευση (54%) (46%) (66%) (34%) (66%) (34%) (72%) (28%) (73%) (27%) N (%) 0% 60 62% 55 67 57 67 43 52 45 56εμφύτευση (49%) (51%) (45%) (55%) (46%) (54%) (45%) (55%) (45%) (55%) N (%) Herrero, 2010 Η εμφύτευση συνδέεται με ακριβή χρονικά γεγονότα Γεγονός Εμφανιση Εξαφάνιση 1st διαίρεση* 2nd διαίρεση* 3rd διαίρεση* προπυρηνων προπυρήνων*Διακύμανση 7.8-11.1 Εκτός 22.3- Εκτός 24.4-28.2 Εκτός 35.3-40.6 Εκτός 36.0-41.6 Εκτός (h) διακύμαν 25.8 διακύμαν διακύμαν διακύμαν διακύμαν σης σης σης σης σης 100% 15 13 23 12 23 12 13 5 19 7εμφύτευση (54%) (46%) (66%) (34%) (66%) (34%) (72%) (28%) (73%) (27%) N (%) 0% 60 62% 55 67 57 67 43 52 45 56εμφύτευση (49%) (51%) (45%) (55%) (46%) (54%) (45%) (55%) (45%) (55%) N (%) Herrero, 2010 7
  8. 8. 23/11/2011Ακριβής χρόνος των ενδιάμεσων φάσεων ID2 ID3 ID4 3-4cc 5-8cc 9-16cc 10-20 30-50 40-70 min min min IP1 IP2 IP3 IP4 1-2cc 2-3cc 4-5cc 8-9cc20-26 hrs 10-12 14-16 22-24 hrs hrs hrs 1st cycle 2nd cycle 3rd cycle 4th cycle Hlinka 2010 Κυτταρικός κύκλος Οργάνωση πυρήνα και μίτωση Οργάνωση οργανιδίων Διαίρεση κυττάρου Συγχρονισμός κυττάρου 8
  9. 9. 23/11/2011 Κυτταρικός κύκλος Οργάνωση πυρήνα και μίτωση Οργάνωση οργανιδίων Διαίρεση κυττάρου Συγχρονισμός κυττάρου Μετάβαση ελέγχου: Aπό Μητρικό σε Ζυγωτικό γονιδίωμα Μητρικός έλεγχος Ζυγωτικός έλεγχοςΓονιμοποίηση Μορφολογικά κριτήρια επιλογής εμβρύων βάση ερευνών: Κυτταρική διαίρεση Κυτταρική συμμετρία Συγχρονισμός Μέγεθος βλαστομεριδίου και παρουσία θραυσμάτων Παρουσία πολλαπλών πυρήνων 9
  10. 10. 23/11/2011 t2 t3 t4 t5 Cc: cell cycle cc2 = t3-t2 cc3 = t5-t4 cc2 s2 cc3 s2 = t4-t3t2=25,6h (24,3-25,8h)t3=37,4h (35,4-37,8h)t4=38h (36,4-38,9h) cc2=11,8ht5=52,3h (48,8-56-6,h) s2 = <0.76h Time lapse • >4mm οπτικό πεδίο • 1 micron/pixel ανάλυση • Κατάλληλο πράσινο φώς • 1/10000 κανονικού φωτός • Αξιόπιστο, μικρό-μηχανική • Ανάλυση software 10
  11. 11. 23/11/2011Time lapse • >4mm οπτικό πεδίο • 1 micron/pixel ανάλυση • Κατάλληλο πράσινο φώς • 1/10000 κανονικού φωτός • Αξιόπιστο, μικρό-μηχανική • Ανάλυση software • Εντός του επωαστήTime lapse 11
  12. 12. 23/11/2011 Time lapse• Βελτιωμένο σύστημα καλλιέργειας• Καλλιέργεια εμβρύων σε ομάδες (“group effect”)• Τα έμβρυα αναπτύσσουν το δικό τους μικροπεριβάλλον• Επικοινωνία εμβρύων Vajta et al., 2008 12
  13. 13. 23/11/2011 13
  14. 14. 23/11/2011Time lapse Παράμετροι 14
  15. 15. 23/11/2011 15
  16. 16. 23/11/2011 ΜΗΤΕΡΑ _IVF Αποτελέσματα15 cx, 32-42 yrs., ICSI, Day 2-3 ETΕμφάνιση προπύρηνων/εξαφάνιση, πρότυπα διαίρεσης, θραύσματα Αριθμός Θετική β- Συνολικός αριθμός Αριθμός εμβρύων Χοριακή Εμβρυομεταφορών που εμφυτεύτηκαν 15 8 (53%) 39 12 (31%) 16
  17. 17. 23/11/2011 ΘραύσματαIn vitro έρευνα με έμβρυα μυώνPrediction of developmental potential, Pribenszky, 2010Σημαντικός ο ακριβής εντοπισμός των πρώιμων διαιρέσεων 17
  18. 18. 23/11/2011 In vitro έρευνα με έμβρυα μυών Prediction of developmental potential, Pribenszky, 2010Μειωμένη η πιθανότητα να φτάσουν στο στάδιο της βλαστοκύστης αν εμφανιστούνθραύσματα κατά την εμβρυική ανάπτυξη 35 In vitro έρευνα με έμβρυα μυών Prediction of developmental potential, Pribenszky, 2010Μειωμένη η πιθανότητα να φτάσουν στο στάδιο της βλαστοκύστης αν εμφανιστούνθραύσματα κατά την εμβρυική ανάπτυξη 36 18
  19. 19. 23/11/2011 Σημαντικότητα των θραυσμάτων Διάρκεια εμφάνισης/εξαφάνισης των θραυσμάτων • 12% των εμβρύων παρουσίασαν θραύσματα • 89% των θραυσμάτων είχαν απορροφηθεί • Ο μέσος χρόνος εμφάνισης/εξαφάνισης των θραυσμάτων ήταν 9.1 h ( +/- 442) λεπτά (dotted line) • Η πιθανότητα να ΜΗΝ παρατηρήσουμε τα θραύσματα σε καθημερινό ημερήσιο έλεγχο: 72% !!! ( 61% – 94%) 37 Ανώμαλη κυτταρική διαίρεσηΔιαίρεση 1-3 κύτταρα 19
  20. 20. 23/11/2011Ανώμαλη κυτταρική διαίρεση, μονός αριθμός βλαστομεριδίων σχετίζεται με ανευπολοειδία 3-4 Κύτταρα eTime line profileTime line profileCGH profile- μοριακός καρυότυπος e e 20
  21. 21. 23/11/2011 Τι μάθαμε?Εν κατακλείδι• Πιο βαθιά ματιά στην εμβρυική ανάπτυξη• Δυνατότητα μορφολογικής και χρονολογικής ανάλυσης• Κινητικοί δείκτες ποιότητας εμβρύου α) πρώιμη διαίρεση β) 2,3,5 κύτταρα• Παράγοντες αποκλεισμού: 1-3 διαίρεση κυττάρου,εκτός χρονικών ορίων, θραύσματα, παρουσία πολλαπλών πυρήνων Τι μάθαμε? Μέλλον • Προσαρμογή-Ανάλυση μεμβρανών- πρόβλεψη 90% να φτάσει το έμβρυο στο στάδιο της βλαστοκύστης (Wong, 2010) • Κατανάλωση οξυγόνου- αυξημένη κατανάλωση κατά την γονιμοποίηση / πρώτη διαίρεση σχετίζεται με δυναμική • Εργαλείo μάθησης, DVD, πόρισμα, remote viewing 21
  22. 22. 23/11/2011Τι μάθαμε? Μέλλον • Προσαρμογή-Ανάλυση μεμβρανών- πρόβλεψη 90% να φτάσει το έμβρυο στο στάδιο της βλαστοκύστης (Wong, 2010) • Κατανάλωση οξυγόνου- αυξημένη κατανάλωση κατά την γονιμοποίηση / πρώτη διαίρεση σχετίζεται με δυναμική • Εργαλείo μάθησης, DVD, πόρισμα, remote viewingΤι μάθαμε? Μέλλον • Προσαρμογή-Ανάλυση μεμβρανών- πρόβλεψη 90% να φτάσει το έμβρυο στο στάδιο της βλαστοκύστης (Wong, 2010) • Κατανάλωση οξυγόνου- αυξημένη κατανάλωση κατά την γονιμοποίηση / πρώτη διαίρεση σχετίζεται με δυναμική • Εργαλείo μάθησης, DVD, πόρισμα, remote viewing 22
  23. 23. 23/11/2011 23

×