Métodos de detección de antígeno anticuerpo-Dra. Libeth Yajaira Criado

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Métodos de detección de antígeno anticuerpo-Dra. Libeth Yajaira Criado

  1. 1. Métodos de detección de Antígeno- Anticuerpo MsC. Libeth Yajaira Criado G. Docente Escuela de Medicina Universidad de Santander
  2. 2. El reconocimiento del Antígeno por las inmunoglobulinas
  3. 3. Las inmunoglobulinas se presentan en forma transmembrana (mIg) o soluble(sIg)
  4. 4. Inmunoglobulinas
  5. 5. Inmunoglobulinas
  6. 6. Dominios básicos de las inmunoglobulinas
  7. 7. Isotipos determinados por las cadenas pesadas
  8. 8. Variabilidad de inmunoglobulinas
  9. 9. Tipos de Enlaces entre Antígeno- Anticuerpo
  10. 10. Funciones de las Inmunoglobulinas
  11. 11. Pruebas Diagnósticas
  12. 12. Validez
  13. 13. Sensibilidad
  14. 14. Especificidad
  15. 15. Reproducibilidad
  16. 16. Seguridad
  17. 17. La seguridad de una prueba diagnóstica
  18. 18. Valor predictivo positivo
  19. 19. Valor predictivo negativo
  20. 20. Anticuerpos  Pueden aparecer en dos formas: ◦ Unidos a membranas ◦ Secretados (solubles)  Funciones efectoras: ◦ Neutralización de antígenos ◦ Activación del Sist. del complemento ◦ Opsonización de antígenos ◦ Hipersensibilidad inmediata
  21. 21. Policlonales:Obtenidosa partir de animales inmunizadoscon el antígeno Monoclonales: Producidosin vitro. Los anticuerpos pueden ser:
  22. 22. Detección del Antígeno Detectan el microorganismo utilizando anticuerpos específicos marcados. Si en una muestra clínica (LCR, orina, esputo ) está presente el microorganismo, al agregarle los anticuerpos marcados específicos contra él, se fijarán al organismo y se produce la señal correspondiente: • Aglutinación • Cambio de color de un sustrato • Fluorescencia • Emisión de luz Por el contrario si el microorganismo buscado no está presente en la muestra, los anticuerpos no podrán unirse a él y no se producirá la señal.
  23. 23. La muestra
  24. 24. Las reacciones inmunológicas Se pueden realizar en placas de titulación, tubos convencionales, membranas, portaobjetos.
  25. 25. Aglutinación Se utilizan anticuerpos adheridos por su región Fc a partículas grandes de Látex que facilitan la observación de la aglutinación al formarse grumos de gran tamaño. Permiten la detección de antígenos solubles (polisacarido); se pueden realizar sobre un portaobjetos y se llevan a cabo en tan sólo unos minutos.
  26. 26. Aglutinación
  27. 27. Inmunofluorescencia Se utilizan anticuerpos marcados con sustancias fluorescentes que se fijan a los microorganismos inmunofluorescencia directa, IFD La visualización se realiza con un microscopio de fluorescencia. Se observa el microorganismo brillante (fluorescente) sobre un fondo oscuro.
  28. 28. INMUNO PRECIPITACIÓN Es la precipitación de complejos antígeno-anticuerpo. Las condiciones para que se lleven a cabo las reacciones de inmunoprecipitacion son: o Los antígenos deben ser multivalente y solubles Cada anticuerpo debe tener al menos dos sitios de unión a antígenos disponible. o El antígeno y el anticuerpo deben estar presentes en las correctas proporciones lo que permite que todos los antígenos y anticuerpos sean parte de la malla. La precipitación es un cambio de fase, en la cual los reactantes solubles forman un producto insoluble, este fenómeno es llamado reacción de precipitación. La formación de la malla no puede ocurrir cuando el antígeno tiene un único epitope que no es repetido. Debido a que un antígeno univalente no puede unirse a dos diferentes anticuerpos simultáneamente.
  29. 29. INMUNO PRECIPITACIÓN
  30. 30. Inmunofluorescencia
  31. 31. Inmunofluorescencia indirecta • Detecta los diferentes antígenos con su anticuerpo específico no marcado y a continuación revelarlo mediante un anticuerpo marcado dirigido con el primer anticuerpo(Anti- anticuerpo) ( con un solo anticuerpo marcado se pueden revelar los diferentes anticuerpos específicos no marcados)
  32. 32. Enzimoinmunoensayo -ELISA
  33. 33. Test de Outcherlony: En gel de agarosa, en el cual se colocan, a una distancia de varios mm una de otra, las dos sustancias a reaccionar (Ag y Ac). Tanto las inmunoglobulinas como los antígenos migran por difusión y en minutos, o pocas horas, se encuentran. Si hay especificidad entre ellas y están presentes en las concentraciones apropiadas se forma en pocas horas, el complejo Ag-Ig que es visible como una línea blanca. Esta línea se forma en el frente del encuentro de los dos reactantes y es por lo tanto perpendicular a la dirección de migración entre ellas.
  34. 34. Gracias

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