Successfully reported this slideshow.
We use your LinkedIn profile and activity data to personalize ads and to show you more relevant ads. You can change your ad preferences anytime.

RNAi Montserrat Enjuto

  • Be the first to comment

RNAi Montserrat Enjuto

  1. 1. RNA de interferència RNAi Sample & Assay Technologies -1-
  2. 2. Seminari RNAi Definició RNAi: RNA interferència Mol·lècules de RNA de doble cadena són capaces de inhibir la expressió gènica, de forma específica. Dogma: DNA – RNA – Prot Quin paper té a les cèl·lules? Implicacions, noves teràpies Sample & Assay Technologies -2-
  3. 3. Definició de RNA interferència Mol·lècules de RNA de doble cadena són capaces de inhibir la expressió gènica, de forma específica mRNA Sample & Assay Technologies -3-
  4. 4. Dogma DNA-RNA-Proteïnes Sample & Assay Technologies -4-
  5. 5. Dogma DNA-RNA-Proteïnes Regulació de la expressió: Pre-transcripcional Post-transcripcional Pre-trancripcional: Enrrollament de la cromatina Controladors en les zones promotores dels gens Post-trancripcional: Capping Splicing Poliadenilació Sample & Assay Technologies -5-
  6. 6. Nobelprice 2006 Fire&Mello 2004 2001 Genome siRNA in 1998 wide screens 1990 mammalian ds RNA in Observed in plant 1998 Cells (Thuscl) C. Elegans 2005 and fungi RNAi used 2002 Fire&Mello First clinical (cosuppression) in in vivo trials Drosophila gene silencing Sample & Assay Technologies -6-
  7. 7. Reconeixement 2 Octubre de 2006 Concedeixen el Premi Nobel de Fisiologia i Medicina a Andrew Z. Fire i Craig C. Mello Pel seu descubriment: quot;RNA interference: gene silencing by double-stranded RNA“ “Interferència del RNA: silenciament gènic per RNA de doble cadena” Sample & Assay Technologies -7-
  8. 8. Mecanisme del RNAi ds RNA 1. RNAdc és introduit a dins de la cèl·lula DICER siRNA 2. Dicer digereix dsRNA en 3’OH 5`P Sense strand dsRNA de 21 pb (siRNA) Antisense strand 3`OH 5’P 3. siRNA s’integra en Helicase el complexe RISC 4. Separació de les hebres siRNA, RISC la hebra antisentit s’uneix Complexe inductor del a la diana complementària: mRNA silenciament del RNA 3`OH 5’P 5. Degradació del mRNA diana AAAAA 3`OH 5`P Silenciament AAAAA Post-transcripcional Sample & Assay Technologies -8-
  9. 9. Mecanisme absent en mamifers ds RNA AT Dicer ds RNA cleavage P ADP+Pi 5`P 3`OH siRNA- short interfering RNA 21-23 nt double stranded RNA 3`OH 5`P Sample & Assay Technologies -9-
  10. 10. Mecanisme del RNAi cel. mamífer ds RNA 1. RNAdc és introduit a dins de la cèl·lula DICER siRNA 2. Dicer digereix dsRNA en 3’OH 5`P Sense strand Silenciament dsRNA de 21 pb (siRNA) Antisense strand gènic en cèl·lules 3`OH 5’P de mamifers 3. siRNA s’integra en Helicase el complexe RISC 4. Separació de les hebres siRNA, RISC la hebra antisentit s’uneix Complexe inductor del a la diana complementària: mRNA silenciament del RNA 3`OH 5’P 5. Degradació del mRNA diana AAAAA 3`OH 5`P Silenciament AAAAA Post-transcripcional Sample & Assay Technologies - 10 -
  11. 11. The 2nd Mechanisms of RNAi pri-miRNA or MMD degradation*∗ X ∗ THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 278, protein No. 45, Issue of November 7, pp. 44312–44319, 2003 Sample & Assay Technologies - 11 -
  12. 12. Definició de RNAi RNAi: RNA interferència Mol·lècules de RNA de doble cadena son capaces de inhibir la expressió gènica, de forma específica. Dogma: DNA – RNA – Prot Quin paper té en les cèl·lules?: Defensa contra virus, Protecció contra gens saltarins (transposons) Mecanisme de regulació de la expressió Implicacions, noves teràpies Sample & Assay Technologies - 12 -
  13. 13. Efectes Off-target relacionats amb el miRNA Ruta siRNA ruta miRNA siRNAs poden entrar en la ruta miRNA AAAAA AAAAA CDS 3`UTR CDS 3`UTR lugar complementari Degradació del mRNA Repressió traduccional del mRNA & siRNA off-targeting en gens NO diana Sample & Assay Technologies - 13 -
  14. 14. miRNA miRNAs bloqueja la traducció del mRNA diana 5`P 3`OH RISC like complex mRNA 3` AAAAA 3´ 5` 5`P 3`OH RIBOSOME 7 2 3`UTR Seed Region Sample & Assay Technologies - 14 -
  15. 15. RNAi Definició RNAi: RNA interferència Mol·lècules de RNA de doble cadena són capaces de inhibir la expressió gènica, de forma específica. Dogma: DNA – RNA – Prot Quin paper té a les cèl·lules? Implicacions, noves teràpies Sample & Assay Technologies - 15 -
  16. 16. RNAi – The Cure? Degeneración macular relacionada con la edad: Mayor causa de ceguera Exceso de proteína VEGF protein lleva a un crecimiento excesivo de los vasos sanguíneos Terapia: silenciamiento de VEGF por inyección de siRNA Primer ensayo clínico en 2005 Gene Therapy (2006) 13, 225–234 Cancer: Terapias RNAi como soporte a la quimioterapiaRNAi Resistencia a fármacos mediada por P-glicoproteína Terapia: Silenciamiento P-glicoproteína en células leucémicas resistentes a fármacos, esto conduce a la recuperación de la sensibilidad a los fármacos. Sample & Assay Technologies - 16 -
  17. 17. Preguntes? Sample & Assay Technologies - 17 -
  18. 18. Kinetics of RNAi in cell culture Transient silencing [%] Transfection of siRNA re-transfect siRNA target mRNA protein threshold time Theoretical model (Current Medicinal Chemistry, 2003, 10(3) 245-256) Sample & Assay Technologies - 18 -

    Be the first to comment

    Login to see the comments

  • Fiodor1977

    Sep. 7, 2011
  • ayeliiiariasbubulubuena

    Nov. 20, 2013

Views

Total views

2,376

On Slideshare

0

From embeds

0

Number of embeds

517

Actions

Downloads

0

Shares

0

Comments

0

Likes

2

×