Diagnóstico genético burgos

653 views

Published on

0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total views
653
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
3
Actions
Shares
0
Downloads
8
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide
  • ICSI: necesaria en casos de factor masculino asociado (p.ejemplo en portadores de translocaciones) y obligada siempre que el DGP se aborde por PCR. Algunos centros recurren siempre a ICSI en ciclos de DGP para asegurar fecundación, depende del centro. Revisión de datos del Consortium: .......... 81% de los embriones presentan 6-8 células en dia +3 y permiten ser biopsiados.
  • Obtención de las biopsias requiere de la utilización de micromanipuladores. En primer lugar se inmoviliza el embrión y se procede a realizar una abertura en la ZP. Método mecánico, disolución parcial (enzimática, medio ácido, haz de láser). Pequeño tamaño (aprox. 50 um). A continuación se procede a retirar una célula mediante succión con una pipeta (aprox. 40 um de diámetro). Cuidadosamente para no lisar (estropear la célula). VIP= el diagnóstico se va a basar en la célula retirada.
  • Obtención de las biopsias requiere de la utilización de micromanipuladores. En primer lugar se inmoviliza el embrión y se procede a realizar una abertura en la ZP. Método mecánico, disolución parcial (enzimática, medio ácido, haz de láser). Pequeño tamaño (aprox. 50 um). A continuación se procede a retirar una célula mediante succión con una pipeta (aprox. 40 um de diámetro). Cuidadosamente para no lisar (estropear la célula). VIP= el diagnóstico se va a basar en la célula retirada.
  • Obtención de las biopsias requiere de la utilización de micromanipuladores. En primer lugar se inmoviliza el embrión y se procede a realizar una abertura en la ZP. Método mecánico, disolución parcial (enzimática, medio ácido, haz de láser). Pequeño tamaño (aprox. 50 um). A continuación se procede a retirar una célula mediante succión con una pipeta (aprox. 40 um de diámetro). Cuidadosamente para no lisar (estropear la célula). VIP= el diagnóstico se va a basar en la célula retirada.
  • Diagnóstico genético burgos

    1. 1. PCR
    2. 2. PCR Blotting por vacío Hibridación conVisualización sonda marcada
    3. 3. Análisis de mutaciones por DGGE Exón 10 Exón 19 Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    4. 4. Análisis por DGGE de mutaciones en elexón 11 del gen CFTR G542 X G551 D S549X 1717- 1G→A © MJ Alonso Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    5. 5. SSCP (polimorfismos conformacionalesde cadena única)
    6. 6. ASP (allele specific PCR)
    7. 7. SecuenciaciónBases 62 61 60 59 58 57 A R G T C A Laboratorio Pediatría IBGM
    8. 8. Anticipación Inestabilidad somáticaDiagnóstico Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    9. 9. Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    10. 10. Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC Laboratorio Pediatría IBGM
    11. 11. D d M mD D d d M m M m 25% 25% 25% 25% Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    12. 12. D d D d M m M mD d D d D dM m M m m M50% 50% No recombinantes Recombinantes Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    13. 13. 0,4Kb 0,8Kb GEN GCACTGAATTCCCTGA CGTGACTTAAGGGACT EcoRI GCACTGCATTCCCTGA CGTGACGTAAGGGACT GEN 1,2Kb Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    14. 14. DNA Digestión Electroforesis Revelado Blot 2/2 1/2 1/1 Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    15. 15. Laboratorio Pediatría IBGM
    16. 16. POLIMORFISMOS DE RESTRICCIÓN (RFLP) GEN GEN Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    17. 17. PCR Digestión Electroforesis Visualización2/2 1/1 1/2 Laboratorio Pediatría IBGM/ CSIC
    18. 18. MICROSATÉLITES (VNTR) CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA CA Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    19. 19. 1 1 1 2 23 34 4 4 Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    20. 20. 1 1 1 2 23 34 4 4 Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    21. 21. RFLP NcoI (intrón 1) TNF-β Laboratorio Pediatría IBGM
    22. 22. Laboratorio Pediatría IBGM/CSIC
    23. 23. Composición de los cromosomas en metafase• Patrón de bandas • Características • ADN rico en AT (55-60%)• Bandas G/Q • Replicación tardía en fase S • Contiene pocos genes (la mayor parte específicos de tejido) • Abundantes miembros L1• Bandas R • ADN rico en GC (50-60%) • Replicación precoz en fase S • Contiene la mayoría de los genes • Rico en secuencias Alu • Abundantes islas CpG
    24. 24. BANDAS C
    25. 25. Cuantificación de cromosomas mediante FISH rápido prenatal en interfase•Las trisomías del 13, 18, 21 y la monosomía del X son lasaneuploidías más frecuentes relacionadas con la edad maternay las anomalías fetales•El cariotipado prenatal precisa de 8 a 14 días para llevarse acabo•El FISH prenatal un screening rápido de aneuploidías encélulas de líquido amniótico no cultivadas en 2-3 días
    26. 26. Indicaciones clínicas diagnóstico rápido prenatal mediante FISH•Sospecha de anomalía cromosómica y/o embarazo avanzado(20 semanas)•Estudio ecográfico sugerente de aneuploidía•Edad materna avanzada•Indicación bioquímica de aneuploidía fetal
    27. 27. 50kbSd. Williams-Beuren (Cr 7)
    28. 28. Transtornos monogénicos para los que existe detección selectivafamiliar y diagnóstico prenatal mediante estudio del ADN•Neurofibromatosis Ligamto./mutación directa•Distrofia miotónica Mutación directa•A. Falciforme Mutación directa•X frágil Mutación directa•Hemofilia A Ligamto./mutación directa•E. De Huntington Mutación directa•D. M. Duchenne Ligamto./mutación directa•Cáncer de mama familiar Rastreo/ ligamiento•Hemocromatosis Mutación directa•Fibrosis quística Ligamto./mutación directa
    29. 29. INDICACIONES PARA EL DIAGNÓSTICO PRENATAL MEDIANTEAMNIOCENTESIS•EDAD MATERNA>35 AÑOS•UN HIJO ANTERIOR CON ANOMALÍA CROMOSÓMICA•Hª DE ANOMALÍA CROMOSÓMICA EN UNO DE LOS PADRES•Hª FAMILIAR DE DEFECTO GENÉTICO DIAGNOSTICABLE MEDIANTEANÁLISIS BIOQUÍMICO O DEL DNA•RIESGO DE D.T.N.
    30. 30. ERRORES CONGÉNITOS DEL METABOLISMO DIAGNOSTICABLESMEDIANTE AMNIOCENTESIS Y/O C.V.S Aminoácidos •Orina de jarabe de arce •Acidemia metilmalónica Hidratos de Carbono •Glucogenosis tipo 2 •Galactosemia Ezs. lisosómicas •Gangliosidosis •Mucopolisacaridosis •Enf. de Tay-Sachs Met. De las purinas •Lesh Nyham Met. Peroxisómico •Enf. de Zellweger
    31. 31. Diagnóstico genético preimplantacional• Uso de técnicas moleculares o citogenéticas durante la fertilización in vitro (FIV) con el fin de seleccionar embriones libres de una determinada característica genética antes de ser transferidos al útero.• Esta tecnología se desarrolló con el objeto de ofrecer una opción a las parejas con un riesgo significativo de una enfermedad genética severa, pero que se oponen al aborto.• El diagnóstico genético preimplantacioal se realiza a partir de una sola célula de una blastómera de 6-10 células tras la FIV.
    32. 32. Diagnóstico genético preimplantacional Reproducción asistida Fecundación in vitro Cultivo embrionario in vitro Día +1 Día +2 Día +3
    33. 33. Diagnóstico genético preimplantacional Biopsias embrionarias Micromanipulación
    34. 34. Diagnóstico genético preimplantacional Biopsias embrionarias Abertura parcial de la zona pelúcida Disolución química/mecánica Láser
    35. 35. Diagnóstico genético preimplantacional Biopsias embrionarias Extracción de blastómeros •Células íntegras •Células con núcleo •Una/dos células
    36. 36. Diagnóstico genético preimplantacional Margen de tiempo: 3 días post-inseminación Las células se analizan por FISH para las anomalías cromosómicas o PCR para análisis mutacional. Los embriones seleccionados pueden implantarse al final del día.
    37. 37. Diagnóstico genético preimplantacional • Ventajas: – Diagnóstico muy precoz – Sólo se transfieren embriones no afectos (o portadores) • Desventajas: – El coste es muy elevado. – Baja tasa de éxito en la implantación – Se descartan embriones afectados o no utilizados. Lo que puede plantear dilemas éticos.
    38. 38. aa Aa AA ♀Bajo Alto Bajo Alto aabb aaBb aaBB AaBB AABB Aabb AaBb AABb AAbbBajo Alto ♂ Bajo AltoBajo Alto
    39. 39. Riesgo de recurrencia (%) en la estenosis pilóricaFamiliares Probandos masculinos Probandos femeninos Londres Belfast Londres BelfastHermanos 3,8 5,6 9,2 12,5Hermanas 2,7 3,0 3,8 3,8
    40. 40. Riesgo de recurrencia en las enfermedades poligénicas1. Mayor si hay más de 1 afecto en la familia.2. Mayor si el probando presenta una forma severa.3. Mayor si el probando es del sexo menos frecuentemente afectado.4. Disminución rápida del riesgo en familiares más lejanos.5. El riesgo está relacionado con la prevalencia en la poblaciónAlgunas enfermedades se comportan Aacomo monogénicas y multifactorialesal mismo tiempo aa AA
    41. 41. Causas genéticas y causas medioambientales en la enfermedad 1. Estudios en gemelos: gemelos MZ vs. DZ ----- concordancia vs. discordancia Del mismo sexo Para rasgos cuantitativos -------> coeficiente de correlación interclases para un rasgo totalmente determinado por los genes: genes CCI MZ=1,0 CCI DZ=0,5 para un rasgo totalmente determinado por el ambiente: ambiente CCI MZ=CCI DZ Heredabilidad h=2(CMZ-CDZ) h≈1,0 cuando CMZ ≈ 1,0 y CDZ ≈0,5
    42. 42. Algunas tasas de concordancia en gemelos MZ y DZ Rasgo o enf. Concordancia Heredabilidad MZ DZ Transtorno bipolar 0,79 0,24 1,0 Alcoholismo >0,60 <0,30 0,60 Autismo 0,92 0,0 >1,0 Presión arterial (diast) 0,58 0,27 0,62 Presión arterial (sist.) 0,55 0,25 0,60 Labio leporino/P.H. 0,38 0,08 0,60 Dermatoglifos 0,95 0,49 0,92 Diabetes Mellitus (TI) 0,35-0,5 0,05-0,1 0,6-0,8 Diabetes Mellitus (TII) 0,7-0,9 0,25-0,4 0,9-1,0 Epilepsia (idiopática) 0,69 0,14 >1,0 Estatura 0,94 0,44 1,0 Sarampión 0,95 0,87 0,16 Esclerosis múltiple 0,28 0,03 0,50 Infarto (hombres) 0,39 0,26 0,26 Infarto (mujeres) 0,44 0,14 0,60 Esquizofrenia 0,47 0,12 0,70 Espina bífida 0,72 0,33 0,78
    43. 43. Causas genéticas y causas medioambientales en la enfermedad 2. Estudios de adopción: tasas de enfermedad en hijos de afectados vs. hijos de no afectados Posibles sesgos: - Factores ambientales prenatales - Factores ambientales previos a la adopción

    ×