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  1. 1. GUIA PRÁCTICA DE FARMACOGNOSIAFACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA MANUAL PRÁCTICO D E LABORATORIO de FARMACOGNOSIA Autor: Lic Q.F. Sháneri Marcilla Truyenque Magister en Microbiología Clínica AREQUIPA – PERÚ 2012
  2. 2. INDICE DEL CONTENIDOPráctica N°1: Manejo De La Información Bibliográfica En FarmacognosiaPráctica N°2: Evaluación Macroscópica Y Microscópica De Drogas VegetalesPráctica N°3: Identificación De Metabolitos SecundariosPráctica N°4: Métodos De Extracción De Productos NaturalesPráctica N°5: Evaluación De CarbohidratosPráctica N°6: Análisis De AlcaloidesPráctica N°7: Evaluación De Aceites EsencialesPráctica N°8: Análisis De Flavonoides En PlantasPráctica N°9: Analisis Quinonas AntraquinonasPráctica N°10: Análisis CumarinasPráctica N°11: Análisis TaninosPráctica N°12: Detección De Adulteraciones Y/O Falsificaciones En Drogas En PolvoPráctica N°13:Extracción Y Separación De Principios Activos En Plantas MedicinalesMediante Cromatografía En Capa FinaPráctica N°14:Práctica Especial: Presentación De Alternativas De Solución A LaProblemática Relacionada Con El Uso Inadecuado De Las Plantas Medicinales, ComoProyección A La Comunidad De Los Futuros Profesionales En Tecnología EnRegencia De Farmacia.
  3. 3. PRÁCTICA N° 1 MORFOLOGÍA VEGETAL INTERNA Y EXTERNAOBJETIVOS1. Reconocer tejidos y estructuras vegetales internas utilizando el microscopio, sobrecortes histológicos previamente preparados, de raíz, tallo y hojas en plantasmonocotiledóneas y dicotiledóneas.2. Diferenciar estructuras vegetales externas en: raíz, tallo, hojas y flores de plantasmonocotiledóneas y dicotiledóneas.INTRODUCCIÓNLa morfología vegetal es la parte de la botánica que estudia las formas y estructurasde las diferentes partes del cuerpo de la planta teniendo en cuenta aspectoshistológicos y fisiológicos en el proceso de modificación y transformación queexperimentan.METODOLOGÍAPara el desarrollo de la práctica se divide el estudio en:1. Aspectos externos ( cuerpo de la planta)2. Aspectos internos ( Histología )MORFOLOGIA EXTERNA 1. Cuerpo de la plantaEl cuerpo de una planta está conformado por dos sistemas:a) Sistema caulinar o de vástago, que comprende: tallos, ramas, hojas y flor.b) Sistema radical: formado por raíces, generalmente subterráneas o terrestres yumergidas ó acuáticas.
  4. 4. 1. SISTEMA CAULINAR O DE VÁSTAGO
  5. 5. ASPECTOS INTERNOS:Histología estructura interna del tallo de una planta monocotiledoneaESTRUCTURA INTERNA DEL TALLO DE UNA PLANTA DICOTILEDONEA
  6. 6. DIAGRAMA DE LA ESTRUCTURA INTERNA DEL TALLO DE UNA PLANTA DICOTILEDÓNEA
  7. 7. CuestionarioGrafica y describe las diferentes clases de tallos que existen en la naturaleza y suclasificación.De acuerdo con las características morfológicas externas observadas en las plantasasignadas, clasificarlas y consignar la información correspondiente según el siguientemodelo de tabla para su evaluación.ACTIVIDAD A DESARROLLAREl profesor pondrá a disposición de los estudiantes una serie de placaspreviamente preparadas en las cuales deben identificar utilizando elmicroscopio las estructuras internas de tallos de plantas monocotiledóneas ydicotiledóneas.Nota: dibujar las estructuras claramente diferenciadas de cada uno de loscortes observados para su evaluación.
  8. 8. PRÁCTICA N°2 EVALUACIÓN MICROSCÓPICA DE DROGAS VEGETALESOBJETIVOS 1. Reconocimiento macroscópico de Drogas vegetales 2. Reconocimiento microscópico de drogas Vegetales: elementos de valor diagnóstico en la Identificación de drogas vegetales a. Cristales b. Elementos conductores c. Granos de almidón (féculas) d. Células epidérmicas con estomas e. Células de parénquima f. Células de súber g. Células de esclerénquima: células pétreas y fibras h. PelosINTRODUCCIONPara el reconocimiento de una droga, disponemos de una serie de característicascomo son: caracteres morfológicos: forma, tamaño, color y forma de las hojas, deLos frutos... caracteres organolépticos: olor, sabor, color.Pero el estudio macro morfológico no siempre es posible ya que con frecuencia ladroga a reconocer llega ya pulverizada y en muchos casos en pequeña cantidad. Porotra parte los caracteres organolépticos no son suficientes para la identificación de unadroga, por lo que en estos casos es necesario recurrir al examen microscópico parapoder identificarla correctamente.El estudio microscópico de las drogas tiene un amplio interés práctico en el campo dela Farmacognosia, y por tanto de la Farmacia, y permite resolver problemas que confrecuencia se plantean en este ámbito profesional, entre otros: Identificación de drogas expedidas en forma pulverizada Detección de posibles adulteraciones Completar la identificación de drogas no pulverizadas cuando los datos morfológicos y organolépticos no son suficientes.METODOLOGÍAOBSERVACION MICROSCOPICALa observación microscópica debe hacerse con paciencia y meticulosidad,examinando distintos campos detenida y ordenadamente, ya que no es posible laobservación en un solo campo de todos los elementos necesarios para laidentificación.Uso del microscopio: Indicamos algunas normas generales de orden práctico, relativasa su manejo: Limpieza de lentes: Antes de comenzar a trabajar con un microscopio, debe realizarse una inspección del estado de limpieza: lente frontal de cada objetivo, lente superior del ocular, condensador y espejo. Aumentos a emplear: Los aumentos comúnmente empleados para estos trabajos son de 10X y 40X. Es conveniente recordar que no por ver las cosas muy aumentadas, se ven mejor. La nitidez e intensidad de la imagen y la extensión abarcada en el campo de la preparación son mayores empleando objetivos débiles que fuertes. Por lo que emplearemos habitualmente el de 10X para el examen general de la preparación y el de 40X, solo si queremos apreciar mejor algún detalle de la misma. Enfoque:
  9. 9. o Iluminación: En general se utilizara el espejo cóncavo para la iluminación artificial. El espejo plano suele utilizarse para la luz natural. Accionando el espejo elegido es fácil conseguir la iluminación del campo del microscopio. o Enfoque propiamente dicho: Con el tornillo de paso rápido se hace descender el tubo hasta que la lente frontal del objetivo quede cerca de la preparación sin llegar en ningún momento a tocarla, lo que se comprobara por visión lateral, nunca mirando por el ocular. A partir de este momento se comienza el enfoque propiamente dicho. Montaje de la preparación: Antes de realizar el montaje hay que comprobar la limpieza de portas y cubres. Se pueden hacer dos tipos de preparaciones: o Extemporáneas: Se montan en agua. Para el montaje se pone sobre el porta una gota de agua y sobre ella se coloca con cuidado el polvo de la droga, tomando una pequeña cantidad del mismo con una esquina del cubre y espolvoreándolo de forma que apenas llegue a cubrir la superficie superior a la gota. Se remueve esta con la esquina del cubre para que el polvo quede impregnado por el liquido. Se toca el borde de la gota con una de las aristas del cubre, se resbala esta sobre el porta para extender convenientemente la gota y se deja caer sobre ella con suavidad el cubre. Si hubiera exceso de liquido que rebosa fuera del cubre, se eliminara absorbiéndolo con papel de filtro. Si por falta de liquido queda parte de la preparación seca, bastara poner en uno de los bordes del cubre una gota de agua y esta penetrara por capilaridad. o Duraderas o definitivas: Se suelen hacer con glicerol-gelatina que permite hacer preparaciones definitivas en muy pocos minutos y permiten conservarlas durante largo tiempo. Previamente al montaje, fundimos la glicerogelatina por inmersión en un baño de agua templada y a continuación se opera como en el caso anterior.Reactivos:Emplearemos reactivos de dos tipos: Aclarantes: Facilitan la observación microscópica de los elementos en estudio, por hacerlos más transparentes:  Agua  Glicerina  Hidrato de cloral  Mezcla aclarante De coloración: Hacen más patentes determinadas estructuras, parte de ellas o contenidos celulares, bien por ser tenidos selectivamente del color del propio reactivo o bien por dar lugar a nuevas coloraciones distintas a la del reactivo:Específicos: Agua de lodo: Colorea los granos de fécula o almidón de azul oscuro Sudan III: Colorea las grasas de rojo anaranjado Floroglucina +HCI: colorea la Lignina de rojo GENERALES Cloroyoduro de Zinc: Colorea la celulosa de violeta, la fécula de azul y la lignina de amarillo. Reactivo universal de Steinmetz: colorea la lignina de amarillo, las grasas de rojo anaranjado, las féculas de violeta y los taninos de azul o verde3. ELEMENTOS DE VALOR DIAGNÓSTICO EN LA IDENTIFICACIÓN DE DROGASVEGETALESCristalesOxalato cálcico: Se denominan cristolitos y se encuentran en la base ensanchada deciertos pelos, característica de algunas especies vegetales (Cañamo indiano)
  10. 10. Se puede presentar de diferentes formas según la droga de que se trate, las formaspueden ser: Aciculares: Se denomina Rafidios y pueden encontrarse: o Aislados o Agrupados  Paquete  Estrella  Haz Prismáticos Cristales agrupados en forma de rosetas: Drusas Cristales arenáceos Aislados Paquetes Estrella Haz Prismáticos Uraceas Arenáceas RosetasElementos conductores: vasos y traqueidasLos vasos y traqueidas son elementos constitutivos del xilema de lo vegetales, elprincipal tejido conductor de una planta, que está formado por fibras, parénquima yelementos conductores (vasos y traqueadas) y está asociado al floema, tejidoconductor de sustancias alimenticias.Morfológicamente son estructuras alargadas, con las paredes transversalesreabsorbidas. Las paredes laterales están ligeramente lignificadas y engrosadas nouniformemente, originándose espesamientos de distintos tipos, que son los que danlugar a las distintas denominaciones que reciben.Vasos: Anillados Espiralados Reticulados Escalariformes PunteadosTraqueidas: Puntuaciones Areoladas
  11. 11. Anulares Espiralados Reticulados Escaleriformes P.Areoladas P.areoladas Traqueidas Punteados Granos de almidón Para estudiar el almidón es necesaria la observación de las siguientes características: 1. Frecuencia: abundantes, poco abundantes o escasos 2. Granos simples o compuestos, aislados o agrupados 3. Forma: Lenticular, elíptica, poliédrica, ovoide... 4. Tamaño de los granos: pequeño, medio, grande, variable... 5. Hilo: Posición o Céntrico o Excéntrico Forma o Lineal o Puntiforme o Estrellado 6. Zonas de hidratación: Son visibles en algunos casos y otros no. Si los granos son escasos o pequeños, se puede facilitar su visión con agua de lodo, que los teñirá de azul si los hubiera. Elíptica Poliédrica Lenticular Ovoide Reniforme Forma Lineal Puntiforme Estrellado No visibles Visibles Hilo
  12. 12. Células epidérmicasLas plantas herbáceas y en general todos los tejidos jóvenes, que no experimentan undesarrollo secundario, tienen su superficie constituida por células de epidermis y suforma varia según las distintas especies.Existen distintos tipos de epidermis y entre ellas destacaremos:A. Epidermis de células poligonales, con paredes finas, rectas o ligeramente sinuosasB. Epidermis con grandes células de paredes finas y contorno sinuosoC. Epidermis formada por células rectangulares con paredes irregularmenteengrosadas o arrosariadasD. Epidermis de células con paredes ligeramente sinuosas y cutícula fuertementeestriada.En la epidermis es frecuente que se observen ESTOMAS: aberturas de la epidermisrodeadas por dos células oclusivas, y en muchos casos dos o más células adyacentesde epidermis (células anexas) suelen estar rodeando a las células oclusivas delestoma.Se pueden clasificar en 4 tipos:E. ANOMOCITICO: Las células epidérmicas que rodean a la estoma, no presentanuna disposición particular.F. ANISOCITICO: Poseen tres células epidérmicas alrededor del estoma y una deellas es más pequeña que las otras dos.G. PARACITICOC: Con una o más células epidérmicas a cada lado del estoma, enposición paralela al eje longitudinal del mismo.H. DIACITICO: células epidérmicas que envuelven al estoma y su membrana comúnforman ángulos rectos con el eje longitudinal del mismo. A B C D E F G HCélulas de parénquimaLas células de parénquima, son el tipo de células de paredes celulósicas máscomunes de todas las drogas. Se encuentran en la mayoría de los órganos de lasplantas, constituyendo lo que se llama "tejido fundamental". La forma de sus célulaspuede ser muy variada, pero en general son células vivas, isodiametricas y de paredesfinas y suele presentar un color pardo-verdoso. Enla madurez se pueden producir engrosamientos de sus membranas, aparecenEspacios intercelulares, pudiendo cambiar de forma.Entre los distintos tipos de parénquima señalamos los siguientes:(A) Tejido de parénquima simple(B) Tejido de parénquima simple con espacios intercelulares(C) Parénquima con paredes lignificadas
  13. 13. (D) Parénquima reticuladoCélulas de súberLas células de súber constituyen un tejido protector que reemplaza a la epidermis entallos y raíces que experimentan crecimiento secundario. La presencia de célulassuberosas nos indica que estamos ante un tallo, raíz o corteza, ya que los frutos,semillas, hojas y flores, no la presentan. Se caracterizan por ser células muertas, conlas membranas recubiertas de suberina (Sustancia de naturaleza grasa con un papelprotector).Según la forma de las células y de la pared, podemos establecer los siguientes tipos:A. Células de súber con paredes gruesas y rectangulares (Corteza de CascaraSagrada)B. Células con paredes finas y rectangulares, con la superficie externa aplanada (Raízde Ipecacuana)C. Súber de células poligonales (Corteza de Quina)D. Súber estratificado con paredes finas ( Raíz de Rauwolfia) A B C D Tipos de parénquima A B C D Células de súberCélulas de esclerénquima: Fibras y células pétreasLa denominación "esclerénquima", incluye a complejos de células con paredesengrosadas generalmente lignificadas, sin contenido celular y cuya función principal esde índole mecánica. Las células esclerenquimatosas pueden ser de dos tiposatendiendo a su forma, tamaño y origen:1. Células Pétreas O Esclereidas2. FibrasCELULAS PETREAS:Son células muertas de parénquima con formas muy variadas y con las paredesengrosadas lignificadas. Pueden encontrarse aisladas o en grupos.Existen distintos tipos:A. Células pequeñas, isodiametricas, con paredes gruesas y pequeño lumen. Sepueden localizar en tejidos parenquimaticos de la corteza, floema etc. (Corteza deCascara Sagrada)
  14. 14. B. Aisladas o agrupadas en pequeños grupos, de formas y tamaños muy variados, conparedes muy engrosados y lumen bastante amplio (Corteza de Canela)C. Ramificadas y de formas diversas, generalmente aisladas (Astroescleritos de Hojade Te)D. Fusiformes, con lumen muy ancho (Raíz de Acónito).FIBRAS:Son células alargadas en sentido axial, con paredes engrosadas, lumen estrecho ygeneralmente los extremos puntiagudos.Tipos:A. Aisladas con paredes engrosadas y lignificadas, con un lumen muy estrecho(Corteza de Canela)B. Fusiformes, con paredes muy engrosadas y muy lignificadas (Corteza de Quina)C. Fibras estrechas agrupadas en paquete, con cristales prismáticos de oxalato cálcico(Raíz de Regaliz)PELOSSe presentan en células epidérmicas y tienen estructuras y formas muy diversas.Poseen un gran valor de diagnostico en el análisis de drogas pulverizadas. Puedenser:1 .Tectores2. Glandulosos O SecretoresPelos TectoresAtendiendo al número de células que forman el pelo, pueden ser:Tectores unicelulares:(A) Muy largos, afilados, curvos y parcialmente lignificados (Hoja de Te)(B) Muy cortos, conicos y verrugosos (Hoja de Sen)(C) Con la base ensanchada, conteniendo en ellas cristales de carbonato cálcico(Sumidad de Cáñamo indiano)(D) En forma de estrella o ramillete (Hoja de Boldo, Hoja de Hamamelis)Tectores pluricelulares:(E) Uniseriados y conicos compuestos de dos o tres células.(F) Uniseriados y cónicos, con 3-5 células con una o más de ellas colapsadas(Hoja de Digital)(G) Pelos ramificados, con un eje central más largo que las ramificaciones(Hoja de Romero)Pelos Glandulosos O Secretores(H) Glándula bicelular y pie unicelular (Hoja de Digital)(I) Pie unicelular y glándula pluricelular (Hoja de Estramonio)(J) Pie pluricelular y glándula unicelular (Hoja de Belladona, Hoja de Digital)(K) Glándula pluricelulares y pie pluricelular (Hoja de Beleno)A B C DPELOS TECTORES
  15. 15. E F GPELOS TECTORESH I J KPELOS SECRETORES
  16. 16. PRÁCTICA N°3 IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOSOBJETIVO 1. Reconocimiento macroscópico de Drogas vegetales 2. IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS valor diagnóstico en la Identificación de drogas vegetales a. Alcaloides b. Esteroides y/o triterpenoides c. Saponinas d. Taninos e. Flavonoides f. QuinonasINTRODUCCIONSe llama metabolitos secundarios de las plantas a los compuestos químicossintetizados por las plantas que cumplen funciones no esenciales en ellas, de formaque su ausencia no es fatal para la planta, ya que no intervienen en el metabolismoprimario de las plantas. Los metabolitos secundarios de las plantas intervienen en lasinteracciones ecológicas entre la planta y su ambiente.También se diferencian de los metabolitos primarios en que cada uno de ellos tieneuna distribución restringida en el Reino de las plantas, a veces a sólo una especie o ungrupo de ellas, por lo que muchos de ellos son útiles en Botánica Sistemática.Los metabolitos secundarios de las plantas pueden ser divididos en 3 grandes grupos,en base a sus orígenes biosintéticos: Terpenoides. Todos los terpenoides, tanto los que participan del metabolismo primario como los más de 25.000 metabolitos secundarios,4 son derivados del compuesto IPP (Isopentenil difosfato o "5-carbono isopentenil difosfato") que se forman en la vía del ácido mevalónico. Es un grupo grande de metabolitos con actividad biológica importante (Goodwin 19716 ). Están distribuidos ampliamente en las plantas y muchos de ellos tienen funciones fisiológicas primarias. Unos pocos, como los que forman los aceites esenciales, están restringidos a solo algunas plantas. Compuestos fenólicos como los fenilpropanoides y sus derivados. Los más de 8.000 compuestos fenólicos que se conocen están formados o bien por la vía del ácido shikímico o bien por por la vía del malonato/acetato. Compuestos nitrogenados o alcaloides. Los alrededor de 12.000 alcaloides que se conocen, que contienen uno o más átomos de nitrógeno, son biosintetizados principalmente a partir de aminoácidos. Los alcaloides poseen una gran diversidad de estructuras químicas (Robinson 19817 ). Son fisiológicamente activos en los animales, aún en bajas concentraciones, por lo que son muy usados en medicina. Ejemplos conocidos son la cocaína, la morfina, la atropina, la colchicina, la quinina, y la estricnina.Los metabolitos secundarios cumplen una función específica para cada planta,algunos son responsables de olores y colores característicos, causticidad, y otroscomunican sus virtudes medicinales o tóxicas a las plantas.METODOLOGÍASobre el extracto de la planta seleccionada, el estudiante realizara pruebas químicasde coloración y/o precipitación, para determinar la presencia del metabolito respectivo.
  17. 17. RECONOCIMIENTO DE ALCALOIDES:Los alcaloides son bases nitrogenadas, las cuales pueden convertirse en susrespectivas sales mediante la adición de un ácido diluido y formar precipitados aladicionar los llamados reactivos para alcaloides. En esta práctica utilizaremos losreactivos de: Mayer y Dragendorff, haciendo la aclaración de que existen otrosreactivos para realizar esta prueba. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL PARA EL RECONOCIMIENTO DEALCALOIDES:Tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco (o seco en polvo), macerar enun mortero, pasar a un beaker o erlenmeyer, adicionar un volumen suficiente de ácidoclorhídrico al 5% que cubra la muestra; calentar al baño maría durante 10 minutos,enfriar y filtrar.Colocar en dos tubos de ensayo aproximadamente 0.5 ml del filtrado ácido, agregar acada uno de los tubos previamente rotulados con el respectivo nombre del reactivo, 2gotas de los reactivos de: Dragendorff, Mayer. Si se observa turbidez o precipitado enlos dos tubos se considera que la muestra contiene alcaloides (Prueba presuntiva). RECONOCIMIENTO DE ESTEROIDES Y/O TRITERPENOIDES:En un beaker limpio y seco, tomar una pequeña cantidad de muestra seca y molida,adicionar diclorometano en cantidad suficiente que cubra la muestra (realice estaprueba bajo campana extractora de gases) agitar con varilla de vidrio para realizar unamejor extracción, filtrar sobre sulfato de sodio anhidro.En un tubo de ensayo limpio y seco tomar 1 ml del filtrado orgánico y agregar por lapared del tubo 1 ml de anhídrido acético y con precaución 1-2 gotas de ácido sulfúricoconcentrado. La aparición de coloraciones: verdes, azules, rojas o violeta es pruebapositiva (+) para esteroides y/o triterpenoides en la muestra. RECONOCIMIENTO DE SAPONINAS:Tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco y macerar en un mortero,adicionar suficiente cantidad de agua que cubra la muestra, filtrar a través de gasa,pasar 4 ml del filtrado a un tubo de ensayo y agitar vigorosamente durante un minuto,si se forma abundante espuma, estable aproximadamente 5 minutos es pruebapresuntiva de la presencia de saponinas en la muestra. RECONOCIMIENTO DE TANINOS:Tomar aproximadamente 5 g del material vegetal fresco, macerar en un morterohidratando la muestra para facilitar el rompimiento de los tejidos, pasar la muestracompletamente macerada a un beaker y adicionar cantidad suficiente de agua paracubrir la muestra, calentar en baño maría de 10 a 15 minutos, filtrar en caliente.Tomar 1 ml del filtrado en un tubo de ensayo y adicionar dos (2) gotas de solución detricloruro férrico (FeCL3 al 1%). La aparición de un color verde, azul o negro es pruebapositiva (+) para compuestos fenólicos; en un segundo tubo de ensayo tomar otromililitro del filtrado y agregar unas gotas de gelatinasal, si hay turbidez o formación deprecipitado es prueba positiva para taninos en la muestra.Las dos pruebas son necesarias para comprobar la presencia de taninos. RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES:Macerar en un mortero aproximadamente 5 g del material vegetal finamente picado,pasar a un beaker o erlenmeyer, adicionar suficiente cantidad de etanol que cubra lamuestra; calentar al baño maría durante cinco minutos, enfriar y filtrar.Tomar un 1 ml del filtrado etanólico en un tubo de ensayo, agregar varias limaduras demagnesio y por la pared del tubo dejar caer lentamente HCl concentrado (37%) laaparición de colores: naranja, rojo, violeta ó rosado, indican que la prueba es positiva(+) para flavonoides. RECONOCIMIENTO DE QUINONAS:
  18. 18. Pesar aproximadamente 0,5 g de material vegetal en polvo en un beaker de 100 ml,adicionar 20 ml de etanol al 95% y calentar en baño maría durante 5 minutos hastaebullición para realizar la extracción de la muestra, filtrar en caliente, tomar 5ml delfiltrado y adicionar aproximadamente 3 ml de H2SO4 al 10%, calentar en baño maría,durante 15 minutos hasta ebullición para producir la hidrólisis; enfriar la muestra yrealizar la extracción de las quinonas con 5 ml de tolueno (usar el tolueno bajocampana extractora) agitar suavemente sin emulsionar, tomar 2ml de la fase orgánicaen un segundo tubo de ensayo, adicionar aproximadamente 1 ml de hidróxido de sodioal 5% en amoníaco al 2%. Luego de agitar se obtiene un color rojo cereza en la capaacuosa, lo que indica presencia de quinonas en la muestra.Cuestionario: ¿Qué son los: Alcaloides, Esteroides y/o triterpenoides, Saponinas, Taninos, Flavonoides, Quinonas? Indique los usos medicinales que se les atribuye a los: Alcaloides, Esteroides y/o triterpenoides, Saponinas, Taninos, Flavonoides, Quinonas Realice un cuadro con 5 plantas que contengan Alcaloides, Esteroides y/o triterpenoides, Saponinas, Taninos, Flavonoides, Quinonas
  19. 19. PRÁCTICA N°4 IDENTIFICACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOSOBJETIVO 1. Conocer los métodos para extraer los principios activos vegetales 2. Conocer los solventes más adecuados 3. Realizar extracción de plantas nativas con la técnica de soxhlet y destilación simpleINTRODUCCIÓNSe deben considerar las características generales del metabolito de interés antes decomenzar con el proceso de extracción, por ejemplo, los glicósidos son termolábiles,sensible al pH, polares y no volátiles consecuentemente el solvente y el proceso aemplear se adecuarán a estas características, para obtener el metabolito sin riesgosde descomposición o formación de artefactos y en alto rendimiento. Aunque latendencia es aplicar una técnica estándar para obtener el extracto crudo, esconveniente tener en mente que la gran diversidad de compuestos de origen naturalno permite que un sólo proceso de extracción se adecue a la obtención de todos ellos,sino que existen procesos individuales de acuerdo al tipo de compuesto. Por ejemplohay esquemas generales para la obtención de alcaloides; sin embargo la diferencia denúcleos químicos, grupos funcionales y por ende polaridad de los mismos, hace quealgunos sean solubles en solventes acuosos y otros en solventes orgánicos. Selección del solvente : Generalmente se estudian compuestos de polaridad mediay rara vez metabolitos solubles en agua. Se debe tener mucha precaución con laselección del disolvente de extracción, éste debe disolver los metabolitos de interés,ser fácil de eliminar, no reaccionar con la muestra, no debe ser muy tóxico, nifácilmente inflamable. Deben ser destilados antes de ser usados ya que algunospueden contener plastificantes derivados de los envases y tapas de almacenamiento.El ftalato de diisiooctilo es uno de los plastificantes que con mayor frecuencia seencuentra impurificando el cloroformo y metanol, éste es un compuesto muy activo ennumerosos ensayos biológicos y puede estar contaminando a compuestos que sedestinen a ensayos de bioactividad induciendo a resultados erróneos.Las impurezas diclorometano (CH2Cl2) y clorobromometano (CH2ClBr) contenidas enel cloroformo pueden reaccionar con algunos compuestos tales como los alcaloidesbrucina, estricnina y efedrina produciendo sales cuaternarias de diferente actividad, lapresencia de trazas de ácido clorhídrico (HCl) puede producir descomposiciones,deshidrataciones o isomerizaciones de ciertos compuestos. Se ha comprobado que elmetanol y el etanol en algunas extracciones donde se aplica calor producen derivadosmetílicos o etílicos no deseados. Se piensa que los solventes polares tienen mayorpoder de penetración en los tejidos y paredes celulares y que en consecuencia tienenmayor poder de disolución de compuestos mientras que los solventes menos polares"lavan" principalmente las partes extracelulares.El agua no se utiliza con frecuencia para obtener un extracto crudo sino que se extraeel material con una mezcla acuosa de metanol (80% aproximadamente) y al extractoacuoso resultante, luego de evaporado el metanol, se lo particiona con acetato de etiloy se trabaja con lo obtenido en este último solvente. Un inconveniente que presentaesta técnica es la formación de emulsiones, éstas se pueden eliminar posteriormentepor centrifugación o agregado de cloruro de sodio (NaCl).
  20. 20. La destilación por arrastre con vapor de agua es ampliamente utilizada para obtenerterpenos volátiles o aceites esenciales, sin embargo se ha observado que una caídade pH, a veces hasta 2, se produce cuando se rompen las vacuolas y se producenreacciones no deseadas en compuestos sensibles de este grupo.El éter etílico rara vez se emplea para extraer por su volatilidad, inflamabilidad,toxicidad y tendencia a formar peróxidos. También se utilizan soluciones ácidas oalcalinas para la extracción selectiva de algunos compuestos, sin embargo se debetener precaución con el pH de las mezclas para prevenir hidrólisis o reordenamientode compuestos sensibles.Extracción : Los procesos de extracción más simples empleados se dividen deacuerdo al disolvente (o menstruo) utilizado en:a) Extracción con agua: infusión, destilación por arrastre con vapor de agua ydecocción,b) Extracción con solventes orgánicos: maceración, lixiviación (o percolación),extracción por aparato de Soxhlet y por fluído supercrítico. a) Maceración : Consiste en remojar la droga, debidamente fragmentada en un menstruo hasta que éste penetre en la primera estructura celular ablandando y disolviendo las porciones solubles. Se puede utilizar cualquier recipiente con tapa que no se ataque con el disolvente, en éste se colocan la droga (materia vegetal) con el disolvente y tapado se deja en reposo por un período de 2 a 14 días con agitación esporádica. Luego se filtra el líquido y se exprime el residuo. Si el material aún contuviera el principio de interés , se repetirá el proceso son solvente fresco (puro) tantas veces como sea necesario. b) Lixiviación (percolación) : Es uno de los procesos más difundidos y si bien se puede realizar con disolventes orgánicos en frío para preservar los compuestos termolábiles que pudiera contener el material. Consiste en colocar el material fragmentado en un embudo o recipiente cónico y hacer pasar un disolvente adecuado a través del mismo. El tamaño de partícula no puede ser menor a 3 mm, como tampoco pueden extraer resinas o materiales que se hinchen dado que el disolvente no percolará. La maceración no tiene ventajas sobre la lixiviación, aunque ésta última requiere de ciertos cuidados a saber: la droga debe estar debidamente compactada para que el disolvente eluya con cierta lentitud dando tiempo al mismo a tener contacto con los tejidos e ingresar en las estructuras celulares y extraer los componentes, de otra manera el residuo desechado contendrá el principio de interés, además se necesita agregar solvente constantemente. c) Extracción por aparato Soxhlet : El uso de un aparato Soxhlet es una manera conveniente de preparar extractos crudos de plantas. Este proceso usa preferentemente solventes puros aunque algunos autores han utilizado mezclas binarias (mezclas de dos solventes) o terciarias (de tres solventes). Las mezclas de disolventes tienen el inconveniente de que sus componentes individuales tienen distintos puntos de ebullición y en consecuencia la proporción de cada uno de ellos en la camisa conteniendo la muestra sería desconocida impidiendo la repetición de la experiencia a través de otro proceso (p.ej.: lixiviación). El aparato consta de un balón en donde se hace ebullir el disolvente apropiado, sus vapores se condensan encima de la muestra colocada en un cartucho de papel de filtro. El condensado macera momentáneamente la muestra. Cuando la cámara que contiene el cartucho se ha llenado, se produce el sifonamiento (por el tubo sifón) de la solución
  21. 21. resultante que cae sobre el balón evaporador. Esta operación se repite sucesivamente, con lo cual la solución contenida en el balón evaporador se va enriqueciendo con los principios aislados. Es de hacer notar que compuestos termolábiles a la temperatura de ebullición del solvente o que se descompongan por exposición prolongada al calor, no pueden ser extraídos por este proceso. Por este mismo motivo no es aconsejable utilizar agua. d) Digestión : En este proceso se agrega solvente caliente al material vegetal molido colocado en un erlenmeyer o material de vidrio de boca pequeña, la temperatura elevada del solvente permite una mayor extracción de compuestos ya que la solubilidad de la mayoría de las especies aumenta con la temperatura. Si el solvente utilizado es muy volátil o se lleva a temperatura de ebullición se deberá adosar un refrigerante al erlenmeyer para evitar su evaporación o intoxicación del operador con el solvente. Este último proceso se conoce como reflujo. e) Infusión y Decocción (cocimiento) : Tanto la infusión como la decocción son procesos simples de extracción con agua, en el primer caso se agrega agua caliente o hirviendo o fría a la droga molida y luego se filtra; en el segundo la droga se hierve por espacio de 15 minutos con el agua. Note que en la infusión la droga no se somete a ebullición, sino que se le puede agregar el agua a temperatura de ebullición en cuyo caso el sometimiento de los metabolitos a esta temperatura será mínimo. Es conveniente aclarar que en algunos casos se utiliza el proceso de reflujo para extraer con solventes acuosos, esto obedece a que un calentamiento prolongado de la solución acuosa podría producir la evaporación total del solvente. El reflujo con soluciones acuosas se debe realizar sólo cuando se está seguro que el principio a extraer es termoestable. f) Extracción con Fluidos en Estado Supercrítico (E.F.S.C.) : Siendo este proceso una de las técnicas más novedosas de extracción se comenta en esta sección con detalle. Este proceso es una operación unitaria que aprovecha el poder disolvente de fluidos a temperaturas y presiones por encima de sus valores críticos. Si bien las propiedades de los fluidos supercríticos son conocidas desde hace 100 años, cuando en 1879 se descubrió que los halogenuros metálicos eran muy solubles en tetracloruro de carbono y etanol en estado supercrítico, su explotación en los laboratorios y procesos industriales de separación es reciente. Actualmente se utiliza en la industrias química y en vista de los recientes avances aparece como de significativo impacto en los próximos años. g) Fluidos Supercríticos : Un fluido supercrítico es cualquier fluido a una temperatura superior a la temperatura crítica. En la figura siguiente se muestra un diagrama de fase (Presión vs. Temperatura) para un fluido puro en el cual se han marcado las zonas correspondientes al sólido (S), gas (G) y líquido (L). También se observan en el diagrama las líneas que indican la coexistencia de dos fases. La líneas correspondiente a gas-líquido se extiende desde el punto tripe o punto crítico donde las propiedades del líquido y el vapor son iguales. Este punto corresponde a una temperatura crítica (Tc) y a una presión crítica (Pc) a partir de la cual comienza la región correspondiente al fluido supercrítico.METODOLOGÍA:
  22. 22. PRÁCTICA N°5 EVALUACIÓN DE CARBOHIDRATOSOBJETIVO 1. Reforsar los conocimientos adquiridos acerca de los carbohidratos mediante la demostración experimental de algunas de sus propiedades.INTRODUCCIÓNLos carbohidratos son los compuestos orgánicos más abundantes de la biosfera. Lamayoría pueden ser representados con la fórmula general Cx(H2O)y por lo que sonliteralmente, hidratos de carbono. Gran parte de sus funciones biológicas dependen deesta estructura química tan particular y versátil. Ellos son componentes fundamentalesde muchos alimentos y su degradación durante el proceso de digestión genera laenergía necesaria para las funciones vitales del organismo. Cuando se encuentrancombinados con otras biomoléculas, dan origen a moléculas más complejas cuyasfunciones pueden ser estructurales o de soporte celular y tisular, de comunicaciónentre células, de reconocimiento o de señalización. Químicamente se definen comopolihidroxialdehídos o polihidroxiacetonas cíclicas o sustancias que luego dehidrolizarse dan origen a los mismos. Un carbohidrato que no puede ser hidrolizado enuno más simple es llamado monosacárido. Los monosacáridos más comunes son laglucosa, la fructosa, la galactosa y la manosa. Un carbohidrato que puede serhidrolizado en dos moléculas de monosacáridos es llamado disacárido. Los másimportantes son la lactosa (presente en la leche), la sacarosa (presente en el azúcarcomún) y la maltosa. Por su parte, aquellos carbohidratos que pueden ser hidrolizadosen varias moléculas de monosacáridos son llamados polisacáridos. Los más comunesson el almidón y la celulosa, este último es componente estructural de las plantas. La determinación de glucosa es de importancia médica ya que niveles sanguíneosalterados pueden ser signo de una enfermedad metabólica común conocida comodiabetes mellitus.METODOLOGÍA 1. Prueba de Benedict Algunos azúcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentesoxidantes suaves como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta característica radica en la presenciade un grupo carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lotanto, aquellos azúcares con un grupo carbonilo libre son llamados azúcaresreductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en uniónglicosídica se conocen como azúcares no reductores. Existen varias reaccionesquímicas que permiten determinar si se está en presencia de un azúcar reductor o no.La prueba de Benedict es una de ellas y se basa precisamente en la reacción o no deun azúcar con el ion Cu2+. El reactivo de sodio. El Na2CO3 confiere a la solución unpH alcalino necesario para que la reacción pueda llevarse a cabo. El citrato de sodiomantiene al ion Cu2+ en solución ya que tiene la propiedad de formar complejoscoloreados poco ionizados con algunos de los metales pesados. Con el cobre produceun complejo de color azul. Si se le agrega al reactivo una solución de azúcar reductory se calienta hasta llevar la mezcla a ebullición, el azúcar en solución alcalina aelevadas temperaturas se convertirá en D-gluconato y su ene-diol, rompiéndose luegoen dos fragmentos altamente reductores, los cuales con sus electrones expuestos,reaccionarán con el Cu++. Se obtiene entonces un azúcar oxidado y dos iones Cu+.Posteriormente el Cu+ producido reacciona con los iones OH- presentes en la soluciónpara formar el hidróxido de cobre: Cu + + OH - → Cu(OH) (precipitado amarillo) El hidróxido pierde agua 2Cu(OH) → Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O
  23. 23. La aparición de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia lapresencia de un azúcar reductor. Materiales y reactivos Reactivo de Benedict: consta de 3 soluciones: Pesar 100 g de NaCO3 anhidro y disolver en 200 ml de agua destilada hervida. Pesar 173 g citrato de sodio y disolverlo en 200 ml de agua destilada hervida. Pesar 17.3 g de CuSO4.5H2O y disolverlo en 300 ml de agua destilada hervida. Mezclar las tres soluciones cuando estén frías. Aforar a 1 l con agua destilada hervida. -Soluciones de carbohidratos 0.1 mol/l. Pesar la cantidad requerida de cada uno delos carbohidratos a ensayar y disolverlos en 100 ml de agua destilada. La solución dealmidón se prepara al 1%: pesar 1 g de almidón y llevar a 100 ml con agua destiladacaliente. -1 gradilla con tubos de ensayo -pipetas de varios volúmenes -baño maría en ebullición ProcedimientoSeleccione la pipeta más conveniente y deposite 2.5 ml de reactivo de Benedict en untubo de ensayo mediano (los tubos de ensayo grandes se usan en la prueba dehidrólisis del almidón). Repita este paso en 6 tubos más. Luego, a cada tubo, añada 6gotas de una y solo una de las siguientes soluciones de carbohidratos: glucosa,galactosa, lactosa, xilosa, fructosa, sacarosa al 0.1M y almidón al 1% según elsiguiente cuadro: Coloque los tubos en un baño de agua hirviendo por 5 minutos. Tenga cuidado deno quemarse.Observe cualquier cambio de color durante el calentamiento. Saque el tubo y póngaloen una gradilla y después de un corto tiempo observe si se ha formado un precipitado,el cual puede ser rojo, anaranjado o verdoso. 2. Prueba cualitativa de glucosa oxidasaEste método es utilizado hoy en día para la determinación y cuantificación de glucosaen sangre y orina y vino a reemplazar a otros como la prueba de Benedict, debido a sumayor especificidad y sensibilidad. La prueba se basa el uso de una enzima llamadaglucosa oxidasa que reconoce específicamente a una de las formas anoméricas de laD-glucosa, la forma beta glucopiranosa. Esta enzima, en presencia de glucosa,oxígeno y un amortiguador de pH, genera gluconolactona y peróxido de hidrógeno.El peróxido de hidrógeno es a su vez sustrato de otra enzima, la peroxidasa, la cual enpresencia de fenol y una amina aromática (en nuestro caso, la amino-4-antipirina)
  24. 24. genera un compuesto de color rosado y agua. Por lo tanto, cuando el reactivo vira deincoloro a rosado, se demuestra la presencia de glucosa en la muestra.Materiales y reactivos-1 placa de aglutinación-Solución de glucosa oxidasa/ peroxidasa: Contiene glucosa oxidasa, peroxidasa,amortiguador y amino 4 antipirina.-Soluciones de carbohidratos 0.1M utilizados en la práctica de la prueba de Benedict yalmidón al 1%.ProcedimientoColoque 3 gotas de solución de glucosa oxidasa/peroxidasa en siete depresiones de laplaca de ensayos. Añada una gota de glucosa a una depresión, una gota de fructosa aotra, etc. Observe las depresiones inmediatamente y anote los resultados. Vuelva aobservar las depresiones y revise si existe algún cambio.3. Prueba de yodo para AlmidónEl polisacárido almidón está constituido de dos polímeros, amilosa y amilopeptina. Laamilosa está constituida de largas cadenas lineales de glucosa unidas en enlaceglicosídico alfa 1,4 (Figura 1). Estas cadenas no poseen un tamaño determinado sinoque pueden variar desde unos miles de unidades de glucosa hasta un millón. Por otrolado, la amilopeptina posee, al igual que la El almidón es la molécula de reserva energética en las plantas por excelencia.Debido a que muchos organismos superiores poseen las enzimas necesarias para sudegradación, este polímero puede ser convertido durante el proceso de digestión endiferentes intermediarios metabólicos que generan energía. El glucógeno a su vez esla contraparte del almidón en el reino animal, con la diferencia de que esta moléculaposee una mayor cantidad de ramificaciones que el almidón y es más compacta. Laconformación de los enlaces alfa 1,4 presentes en estas moléculas causa que estospolímeros asuman una estructura helicoidal muy estrecha. La prueba del almidón esuna prueba muy sencilla pero que todavía se utiliza para determinar la presencia dealmidón en algunos alimentos. La prueba se basa en una reacción física y no química,en la cual el almidón reacciona con el yodo para formar un complejo de color azulintenso. Bajo las mismas condiciones, el glucógeno da una coloración café.Materiales y reactivos -1 gradilla con tubos de ensayo medianos -pipetas de varios volúmenes -Solución de almidón 1 % que se utiliza también para la prueba de Benedict
  25. 25. -Solución de yodo: Disolver un gramo de yodo en una solución de Kl 2%.ProcedimientoEn tres tubos medianos y utilizando la pipeta que más se ajuste, distribuya losreactivos indicados según el siguiente cuadro:Agite muy bien los tubos y note la diferencia de color que se atribuye a la formación deun complejo entre el almidón y el yodo. Anote el resultado. Posteriormente coloque lostres tubos en un baño de agua caliente (70o C) con cuidado por 10 minutos y observecualquier cambio de color. Anote el resultado. Enfríe los tubos y observe nuevamente.Anote el resultado.4. Hidrólisis del almidón Esta práctica tiene como objetivo demostrar que efectivamente los polisacáridoscomo el almidón están compuestos de monosacáridos unidos por enlaces glicosídicos.Como se mencionó anteriormente, el almidón está constituido de un solomonosacárido, la glucosa. Las propiedades del almidón son diferentes a las de laglucosa como se evidenciará mediante la hidrólisis del almidón para generar glucosa.Todos los polisacáridos son hidrolizados en sus constituyentes monosacáridos, por laacción de ácidos diluidos. Esta es una reacción gradual que puede observarse duranteel tiempo de la sesión de laboratorio. Es por tanto recomendable que usted inicie elproceso de hidrólisis al comenzar la sesión de laboratorio y luego proceda con el restode las pruebas. La hidrólisis del almidón se puede evidenciar con dos pruebas: a. Desaparición del color azul característico de la prueba del yodo. b. Aparición de glucosa, un azúcar reductor. La aparición de glucosa se evidenciarámediante la prueba de Benedict.Materiales y reactivos-1 gradilla con 4 tubos de ensayo grandes (10ml)-baño María en ebullición-Pipetas de varios volúmenes-Solución de almidón 1 %: pesar 1 g de almidón y llevar a 100 ml con agua destiladacaliente. Preparar fresco.-HCl concentrado: será manipulado únicamente por los instructores. Tenga cuidado ala hora de manipular y agitar sus tubos que contengan este ácido.-Solución de yodo: Disolver un gramo de yodo en una solución de Kl 2%.-Reactivo de Benedict-NaOH 0.4 mol/l: Pesar 16.0 g de NaOH y llevar a 1000 ml con agua destilada.Procedimiento Coloque 10 ml de una solución de almidón al 1% en un tubo de ensayo grande.Pida a su instructor que le añada 1 ml de HCI concentrado al tubo. Agite bien y luegocoloque el tubo en un baño de agua hirviendo con cuidado de no quemarse. Mientrasel almidón se está hidrolizando (tarda de 1:30 h a 2 h aproximadamente), efectúe laprueba de coloración del yodo. Para ello, añada en otro tubo 5 ml de agua, una gotade la solución de yodo y 0.5 ml de la solución de almidón que tiene hidrolizando en elbaño maría a ebullición. Anote el resultado de la prueba del yodo.Después de que la hidrólisis del almidón se haya llevado a cabo por 15 minutos, saque0.5 ml del almidón que se está hidrolizando en el baño maría y repita la prueba delyodo. Continúe la hidrólisis hasta obtener una prueba de yodo negativa.
  26. 26. Posteriormente y para confirmar la presencia de glucosa, efectúe la prueba deBenedict. Para ello, añada en un tubo 0.5 ml del almidón hidrolizado, 1 ml de NaOH0.4 mol/l (para neutralizar el ácido) y 2.5 ml de reactivo de Benedict. Incubar por 8minutos en agua hirviendo. Anote y analice los resultados. Utilice sus resultados delpunto 1 (Prueba de Benedict) y del punto 2 (Prueba de yodo para almidón) parainterpretar sus resultados
  27. 27. PRÁCTICA N°6: ANÁLISIS DE ALCALOIDESOBJETIVOS 1. Reconocer los alcaloides mediante reactivos específicos. 2. Observar y reconocer los alcaloides por cromatografía.INTRODUCCIÓNSon sustancias nitrogenadas, basicas, de origen fundamentalmente vegetal. Su atomode nitrogeno normalmente se encuentra formando parte de un heterociclo y poseenactividades farmacologicas marcadas a bajas dosis.Son de gran interes terapeutico, tenemos importantes y valiosos representantes encada uno de los grupos farmacologicos existentes.Se encuentran en la naturaleza formando sales y biosinteticamente se forman a partirde aminoacidos.Localización: Se encuentran fundamentalmente en Angiospermas, sobretodo enfamilias como Ranunculaceas, Apocinaceas, Loganiaceas, Solanaceas, Rubiaceas,Papaveraceas, Leguminosas, etc.En el vegetal se encuentran formando sales, y fundamentalmente se localizan entejidos perifericos de semillas, cortezas, raices, hojas, tallos.Propiedades físico-químicas : Aunque algunos alcaloides no oxigenados sonliquidos a temperatura ambiente como la nicotina y la esparteina, los alcaloides basesson generalmente solidos cristalizables ligeramente coloreados. Casi siempre estándotados de poder rotatorio especifico y punto de fusion por debajo de 200°C.Los alcaloides base son poco solubles en agua y otros disolventes organicos polares ysolubles en disolventes organicos apolares como eter o cloroformo.La formacion de sales estabiliza la molecula, por lo que comercialmente los alcaloidesse encuentran al estado de sales.METODOLOGÍA1. En medio acidoLa droga pulverizada, (x gramos) se impregna con HCI formandose loscorrespondientes clorhidratos, las sales formadas se extraen con agua, en caliente, ycontinua agitacion. Se filtra y se realizan tres alicuotas, sobre las que se anaden gota agota tres reactivos: R. Bouchardat, R. Dragendorff y R. Mayer, apareciendo en casopositivo precipitados marron, naranja y blanco.Estas reacciones se basan en la capacidad que tienen los alcaloides de combinarsecon metales pesados: Bi, Hg, o l. La especificidad de estos reactivos no es absoluta,tambien la dan otras sustancias como las proteinas.El resto del extracto acuoso se somete a una extraccion liquido-liquido en ampolla dedecantacion.Previamente se alcaliniza con una base fuerte como NH4OH hasta pH=10, y lasbases debiles (alcaloides) se liberan y se extraen seguidamente con un disolventeorganico (eter o cloroformo) varias veces hasta agotar la fase acuosa (lo que severifica facilmente al presentar la fase acuosa resultados negativos con el reactivo deMayer conc.). El disolvente organico que contiene los alcaloides base se decanta, seeliminan las trazas de agua por deshidratacion mediante el empleo de una sal anhidra(por ejemplo sulfato sodico) y se evapora a vacio. Se obtiene un residuo de alcaloidestotales (A.T.= y mg). Tambien se puede realizar una valoracion volumetrica,redisolviendo los A.T. en un exceso de acido titulado y se valora por retroceso dichoexceso, con una base de titulo conocido y en presencia de un indicador coloreado.2. En medio alcalinoLa droga pulverizada (x gramos) se mezcla con una solucion acuosa alcalina(NH4OH 20 %) hasta empaparla, asi esta base fuerte desplaza a los alcaloides
  28. 28. de sus combinaciones salinas, las bases asi liberadas se extraen seguidamente conun disolvente organico apolar como cloroformo o diclorometano, en un dispositivo tipoSoxhlet de extraccion continua. EI extractocloroformico se somete a una purificacion liquido-liquido en ampolla de decantacion,modificando el pH de la solucion y modificando asi su solubilidad.En primer lugar extraemos con una solucion acuosa de HCI 5% y posteriormenteseparamos la fase acuosa, alcalizamos con NH4OH hasta pH = 10 y extraemosposteriormente con diclorometano sobre sulfato sodico anhidro.Evaporamos a vacio y el residuo de alcaloides totales (A .T.) se pesa.Separación y aislamientoLa separacion de los alcaloides (A.T.) se lleva a cabo mediante cromatografia.La cromatografia en capa fina de silice o alumina es un metodo de separacion dealcaloides, se utilizan diversos disolventes de desarrollo, como Cloroformo/Metanol(90:10) en el caso de alcaloides quinolizidinicos, las placas se revelan con reactivoDragendorff para cromatografia o vapores de iodo.IdentificaciónLa identificacion puede llevarse a cabo mediante el uso de patrones, en caso demuestras de naturaleza conocida. En la mayoria de los casos debemos separar elalcaloide puro e identificarlo por sus constantes físicas (punto de fusion y poderrotatorio) y datos espectrales (UV. IR, 1 H-RMN, 13CRMN,IE)CUESTIONARIO.Que son los alcaloides?.Que estructura química tienen?.Que actividad farmacologica poseen?
  29. 29. PRÁCTICA N°7 EVALUACIÓN DE ACEITES ESENCIALESOBJETIVOS 1. Aislar el aceite esencial de un producto natural utilizando las siguientes técnicas de laboratorio: a. -Destilación por arrastre con vapor. b. -Extracción continua en equipo Soxhlet. c. -Extracción directa a reflujo. 2. Conocer las características de cada una de estas técnicas, así como los factores que intervienen en ellas. 3. Comparar la eficiencia y selectividad de cada una de ellas en el aislamiento del aceite esencial de que se trate.INTRODUCCIÓNLos aceites esenciales son productos aromaticos, obtenidos a partir de vegetales,principalmente por corriente de vapor de agua.Su localizacion en el vegetal es variada, aunque son mas frecuentes en flores(manzanilla) y hojas (eucalipto). Suelen encontrarse en familias pertenecientes a losordenes de las Magnoliales, Laurales, Rutales, Lamiales, Asterales ...El contenido en los vegetales suele ser cuantitativamente bajo, normalmente inferior al1 % (hay excepciones: botones de clavo: 15%).Suelen ser liquidos a temperatura ambiente, muy raramente tienen color y en generalsu densidad es inferior a la del agua (excepciones: canela, clavo..). Suelen estardotados de poder rotatorio y con un indice de refracción elevado. Son solubles endisolventes organicos (liposolubles) y poco o nada solubles en agua y son arrastrablesen corriente de vapor de agua.Quimicamente son mezclas complejas muy variables que pertenecen a dos series conorigenes biosinteticos distintos:• Serie terpenica• Serie de los derivados del fenilpropanoPoseen una extensa variedad de propiedades farmacologicas entre las que destacan:antisepticas, espasmoliticas, colagogas etc.EXTRACCIÓN, VALORACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LA ESENCIA DEEUCALIPTOLa esencia de eucalipto se extrae de las hojas de Eucaliptus globulus (Mirtaceas). Seencuentra en ellas en una proporcion de 1-3 %. Es un liquido de color ligeramenteamarillento y de densidad menor que el agua. El componente mayoritario de estaesencia es el CINEOL o EUCALIPTOL (70-80 %) y va acompanado de carburosterpenicos, alcoholes alifaticos, sesquiterpenos, etc.de color ligeramente amarillento y de densidad menor que el agua. Tanto el eucaliptocomo la esencia, poseen propiedades expectorantes y antisepticas y ambos sonconstituyentes de numerosas especialidades prescritas en las afecciones del aparatorespiratorio.METODOGIA1. EXTRACCION: La extraccion se realiza en corriente de vapor de agua. Partimos deunos 30-409 de droga que se depositan en un matraz de fondo redondo al que seañaden unos 300ml de agua saturada de NaCl y a continuacion se realiza el montajedel aparato destilador, que es tipo CLEVENGER, provisto de dos tubuladuras lateralesque se prolongan despues en una comun a ambas, donde es recogida la esencia juntocon el agua que destila, pero esta vuelve nuevamente al matraz de destilacion por eltubo lateral, Io que hace que el aparato sea de destilacion continua. Una vezencendida la llama del mechero y conectado el sistema de refrigeracion, comienza elproceso de destilacion. A medida que esta progresa, se ira acumulando la esencia y el
  30. 30. agua en el tubo colector, quedando en este caso, la esencia en la capa superior. Demedia en media hora se lee el volumen de esencia y se da por terminada la extraccioncuando coincidan dos lecturas. Antes de terminar la destilacion se cierra el agua delrefrigerante y se continua destilando todavia algun tiempo, para recoger las gotas deesencia que quedan en el refrigerante.2. VALORACION:Consiste en medir con una regla la altura de la esencia obtenida, dentro del tubocolector y aplicamos la formula:V = Π r2 hObtenemos asi el volumen (cm3) de esencia.Con estos datos:Peso de la droga: P = .......gDensidad: D ~....,1Volumen obtenido de esencia: V= ....... mlPodemos hallar la Riqueza de esencia de la droga:R= (V.d./P)100 = ..... %3. CARACTERIZACION DE LA ESENCIA DE EUCALIPTO: Con la ayuda de uncapilar depositamos una pequena cantidad de esencia obtenida en una placacromatografica de Silicagel. Seguidamente aplicamos la misma cantidad de un patronde EUCALIPTOL y desarrollamos la cromatografia en la fase móvilHEXANO/ACETATO de ETILO 9:1. Se revelacon Vainillina sulfurica, calentandoposteriormente en estufa a 100 oC, durante 5 minutos.CUESTIONARIO1. .Como se obtienen los aceites esenciales a partir de los vegetales?2. .Cuales son sus caracteristicas fisico-quimicas?3. .Cuales son algunas de sus propiedades farmacologicas mas destacables?4. Cual es el componente mayoritario de la esencia de eucalipto?
  31. 31. PRÁCTICA N°8 ANÁLISIS DE FLAVONOIDES EN PLANTASOBJETIVO 1. Extracción de flavonoides 2. Reconocimiento de flavonoidesINTRODUCCIÓNLos flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales arreglados bajo unsistema C6-C3-C6, en el cual dos anillos aromáticos llamados A y B están unidos poruna unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que en caso deexistir es llamado anillo C. Se conoce como 10 clases de flavonoides los cualespueden encontrarse como aglicona o bajo la forma de glicósidos con una o tresunidades de azúcar, generalmente en los carbonos 3 y/o 7, siendo los azucares máscomunes la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa. Es frecuente quediferentes azúcares se hallen unidas a una misma aglicona y en diferentes posicioneslo que hace mayor el número de glicósidos conocidos; es también común, que seencuentren en mezclas como agliconas y/o glicósidos, aun de las diferentes clasessiendo esto último lo más frecuente.Se hallan presente en todas las partes de la planta, algunas clases se encuentran másampliamente distribuidas que otras, siendo más comunes las flavonas y flavonoles ymás restringidos en su ocurrencia las isoflavonas, las chalconas y auronas.Aunque los flavonoides han sido empleados desde mucho tiempo como colorantes delana, se les atribuye diversas propiedades en las plantas, entre ellos podemos citar (a)protección a los vegetales contra la incidencia de rayos ultravioleta y visible, así comoprotección contra insectos, hongos virus y bacterias, (b) atrayentes de animales confinalidad de polinización, (c) antioxidantes, (d) control de la acción de las hormonasvegetales, (e) agentes alelopáticas y (f) inhibidora de las enzimas. Por otro lado, estoscompuestos poseen también importancia farmacológica, resultado de algunaspropiedades importantes atribuidas a algunos representantes de las diferentes clases,como por ejemplo, antinflamatorio, antialérgico, antiulcerogénico, antiviral,anticarcinogénico; asimismo, son utilizados para el tratamiento de la fragilidad capilar,de la diabetes, de las afecciones cardiacas, entre otras.Como características generales de estos compuestos debemos señalar su solubilidaden agua y etanol, su carácter fenólico y su intensa absorción en la región ultravioleta yvisible del espectro debido a la presencia de sistemas aromáticos conjugados. Unaclasificación preliminar del tipo de flavonoide en un extracto de planta, puede hacersebasado inicialmente en un estudio de sus propiedades de solubilidad y decomportamiento ante reacciones de color; esto, seguido por un examencromatográfico directamente del extracto y/o del extracto hidrolizado.En este experimento se describen los ensayos a realizar para detectar la presencia deflavonoides en un extracto a través de una sencilla reacción de coloración y unacromatografía de capa delgada utilizando agentes cromogénicos adecuados. Para elensayo cuantitativo es usual desarrollarlo de dos maneras, por espectrofotometríaultravioleta – visible utilizando reactivo de desplazamiento para la determinación deflavonoides totales y por cromatografía líquida de alta resolución. En esta practica seestá considerando el primer método. Como material vegetal puede utilizarse lamanzanilla, la ruda, especies de geranio, entre otras.METODOLOGÍA2.1 Análisis cualitativoA. Tratamiento de muestraPese 1g de muestra seca y pulverizada en un erlenmeyer de 50 mL, añada 5mL demetanol y caliente por 10 minutos a 60°C (sí es posible hacerlo en el ultrasonido).Filtre sobre un vial (extracto A).
  32. 32. B. Prueba a la gota: reacción de Shinoda Coloque 20 gotas del extracto A en un tubode ensayo (o en una placa de toque), agregue 2 a 3 virutas de Magnesio y unas gotasde ácido clorhídrico concentrado. Observe el cambio de coloraciónC. Cromatografía de capa delgada Utilice cromatofolio de sílica gel 60F254 (Merck) de10 cm x 3 cm. Aplique 30 μ del extracto A a 1cm del borde inferior. La fase móvil esacetato de etilo: metano : agua (100: 13.5: 10). Deje saturar la cámara cromatográfica(diámetro: 8cm, altura: 11cm).Coloque la placa cromatográfica en la cámara y deje hasta que la fase móvil se muevaaproximadamente 8 cm del origen.Puede también ensayar con el sistema acetato de etilo: ácido acético. Ácido fórmico:agua (100:11:11:26).La placa desarrollada se seca con aire caliente (puede utilizar una secadora decabello) y se visualiza en la lámpara de onda larga (366 nm) y/o se aspersa con unasolución de NP-PEG.Observe las fluorescencias coloreadas nuevamente a la luz UV 366 nm después delaspersado. Determine el valor de Rf de cada componente.El agente cromogénico NP-PEG, consiste en (a) una solución metanólica al 1% dedifenilboriloxietilamina (NP) y (b) una solución etanólica al 5% de polietilenglicol – 400(PEG). Se aspersa primero con (a), seguido de (b).
  33. 33. PRÁCTICA N°9: ANALISIS QUINONAS ANTRAQUINONASOBJETIVOS 1. Reconocer la presencia de compuestos quinónicos y antraquinónicos en la cochinilla. 2. Realizar las pruebas de identificación específicas para el reconocimientos de quinonas y antraquinonasINTRODUCCIÓNDe los derivados antracenicos existentes en la naturaleza, las antraquinonas son losque presentan mayor interes farmacognostico. Son derivados de la dicetona delantraceno, por lo tanto son dicetonas aromaticas procedentes de difenoles.El grado de oxidacion de estos compuestos es variable. La forma antraquinona es lamas oxidada, mientras que las antronas y sus formas tautomeras, antranoles, sedesignan como formas reducidas. Estas ultimas son muy inestables y generalmente seencuentran en la naturaleza en forma combinada con azucares formando heterosidos,mientras que las antraquinonas pueden encontrarse libres.Cuando las antraquinonas se encuentran en forma de O-heterosidos, por hidrolisisacida originan, por una parte geninas que son di, tri o tetrahidroxi antraquinonas y porotra parte los azucares correspondientes. Las antraquinonas suelen tener gruposhidroxilos, bien en los carbonos 1 y 8 (actividad laxante) o bien en los carbonos 1 y 2(actividad colorante).Entre las Drogas mas ricas en antraquinonas tenemos: Hoja de Sen, Hoja de Aloe,Corteza de Frangula, Corteza de Cascara Sagrada, Rizoma de Ruibarbo etc.METODOOGÍA: 1. DETERMINACION CUALITATIVA DE ANTRAQUINONASEs importante recordar que las antraquinonas libres son solubles en disolventesapolares (Cloroformo, Diclorometano, Eter etilico…), pero en forma de heterosidos oen forma de sales alcalinas, son solubles en agua.1) Determinación de antraquinonas libres: Reacción de Bornträger Las geninasantraquinonicas en presencia de soluciones alcalinas dan coloracion roja al formarsela sal correspondiente. Esta reaccion solo es valida para las formas oxidadas(antraquinonas)
  34. 34. Técnica1g de polvo de droga se trata con 1 ml de Diclorometano (para solubilizar lasantraquinonas libres) agitando durante 5 minutos. Filtramos en un tubo de ensayo y alfiltrado anadimos un volumen equivalente de solución acuosa alcalina (NaOH al 10%).Agitamos y dejamos que se separen las dos capas. Si hay antraquinonas libres lacapa acuosa se colorea de rojo.2) Determinación de antraquinonas combinadas en forma de heterósidos. En primerlugar procedemos a hidrolizar el O-heterosido para obtener la antraquinona libre y asipoderla identificar.TécnicaTomamos 1 g de polvo de droga y hervimos con 10 ml de agua (para solubilizar losheterosidos) durante 5 minutos, al cabo de los cuales se deja enfriar y se filtra. Alfiltrado se le adiciona unas gotas de HCl al 20% y se vuelve a hervir unos minutos conobjeto de realizar la hidrolisis para liberar las antraquinonas combinadas. Se dejaenfriar y se anade diclorometano. Se forman dos fases. Agitamos y las antraquinonaslibres pasan a la capa de diclorometano. Anadimos una solucion acuosa alcalina, seforma la sal correspondiente y esta al ser soluble en agua pasa a la capa acuosa yademás se colorea de rojo.CUESTIONARIO.En que forma suelen estar los derivados antracenicos en las drogas?.Cuales son las principales propiedades fisico-quimicas y farmacologicas de estoscompuestos?
  35. 35. PRÁCTICA N°10: ANÁLISIS CUMARINASOBJETIVOS 1. Reconocer las curaminas en la Ruta graveolens “Ruda” 2. Aprender el proceso de extracción de cumarinas.INTRODUCCIÓNLas cumarinas son productos naturales en base a los cuales se encuentra benzo α-pirona ó α)- cromonas (lactona del ácido cis-orto-hidroxicinámico).Son compuestos ampliamente distribuidos en el mundo vegetal, principalmente en lasfamilias Apiaceaeo Umbelliferae, Fabáceae, Rutaceae. En la naturalezafrecuentemente se encuentran los derivados mas simples de cumarinas yfuranocumarinas. La cantidad principal de los representantes de compuestos de estegrupi se han encontrado en estado lubre y sólo en un número insginificamente enforma de glicósidos. Las cumarinas se localizan en los diferentes órganos de lasplantas frecuentemente en las raíces, corteza y frutos siendo más abundante en estosúltimos. El contenido de cumarinas en las diferentes plantas varía desde 0.2 hasta el10%, incluso a menudo se puede encontrar 5-10 cumarinas de diferentes estructurasen una planta. Las cumarinas poseen propiedades anticoagulantes. El Dicumural fuepropuesto como medicamento para la profilaxis y cura de la trombosis y tromboflebitis.En base al dicumarol se han obtenido preparados sintéticos que poseen propiedadesanticoagulantes mucho más altas.Ciertas cumarinas poseen actividad fotodinámica, es decir, son capaces de aumentarla sensibilidad de la piel a los rayos ultravioletas, por eso encuentran aplicación en laterapia de vitiligio tales preparados como la amifurina de los frutos de ammi grande,beroscal de los frutos de Pastinaca.Las cumarians están biogenéticamente relacionadas a los fenilpropanoides comoflavonoides y ligninas así como a las sustancias derivadas del acetato, comoesteroides y terpenoides, ya que su biosíntesis transcurre por ambas vías: víaShikimato y vía Policétido del acetato.La propiedad física más usual para reconocer una cumarina es la fluorescencia queellos desarrollan a la luz UV (366) y ampliamente utilizada es CCD.La placa con extracto acetónico o etéreo con el sistema Hexano – EtOAc (3:1) seobserva en el visible, coloraciones amarilla y verdosas, en tanto que en el UV hayfluorescencias: púrpura, verde, celeste.Las cumarinas generalmente se encuentran en diversos tipos de plantas comodiferentes familias: apiaceae, rutaceae, umbellifereae, moraceae.Los principales compuestos son: piranocumarinas (apio), umbelliferona/herniatina(zanahoria), furanocumarinas/bergapteno/psoraleno (ruda, limón),bergapteno/imperatorina (mullaca) y furanocumarina/xantotoxina (uva).METODOLOGÍAMATERIALES : Material de vidrio: 2 vasos de 250ml, bagueta, probeta. Equipos:equipo Soxhlet, equipo CCD.Reactivos: etanol, hidróxido de sodio, Diclorometano, Metanol, cloroformo, acetato deetilo, hexano.Obtención del extracto:PRÁCTICA N°11:
  36. 36. ANÁLISIS TANINOSOBJETIVO 1. Extracción de taninos 2. Determinación cualitativa de taninosINTRODUCCIÓNLos taninos son mezclas complejas de sustancias de origen vegetal y estructurapolifenolica, y tienen la propiedad de precipitar los alcaloides y las proteinas. Sonsolubles en agua y precipitan con sales de metales pesados.Se distinguen clasicamente dos grupos de taninos:_ Condensados o catéquicos (polimeros resistentes a la hidrolisis)._ Hidrolizables o pirogálicos (se hidrolizan en medio acido o alcalino o por viaenzimatica).Las aplicaciones de las drogas con taninos derivan de sus propiedades astringentes.Por via interna actuan como antidiarreinocs y antisepticos. Por vía externaimpermeabilizan las capas mas externas de la piel protegiendo asi las capassubyacentes y tambien tienen un efecto vasoconstrictor sobre pequnos vasos. Sonhemostaticos y sirven como antidoto en caso de intoxicacion con alcaloides.METODOLOGÍA1. EXTRACCION:Se pesa aproximadamente 1 g de droga en un vaso de precipitado con unos 50 ml deagua y se hierve durante 5 minutos, asi los taninos presentes en la droga sesolubilizan en el agua. Se deja enfriar y se filtra con papel.2. DETERMINACION CUALITATIVAEl filtrado recogido se reparte en tres porciones sobre las que se realizan lossiguientes ensayos:1. Se comprueba el sabor astringente2. Anadimos unas gotas de FeCl3 diluido, obteniendose un precipitado que nosindicara la presencia de taninos. La coloracion del precipitado nos puede orientar si lostaninos son hidrolizables o condensados. Los hidrolizables suelen dar un precipitadoazul y los condensados un precipitado verde.3. Reaccion de Stiasny: A la tercera porcion de filtrado anadimos unas gotas de HCl y1 ml de formaldehido y se hierve unos minutos. La aparicion de un precipitado nosconfirmara la presencia de taninos condensados.
  37. 37. PRÁCTICA N°12: DETECCIÓN DE ADULTERACIONES Y/O FALSIFICACIONES EN DROGAS EN POLVOOBJETIVO 1. Reconocer una droga en polvo y / o una falsificación a través de una marcha que involucra pruebas organolépticas, microscópicas y químicas.INTRODUCCIÓNLa identificación de material vegetal utilizado como producto fitoterapéutico, no deja deser un grave problema en el mundo de los productos naturales, uno de los tantosinconvenientes es el manejo de los nombres vulgares o regionales de las plantas, eldesconocimiento del órgano o parte de la planta donde se encuentra el ó los principiosactivos y finalmente el reconocimiento de drogas en polvo objeto de esta práctica.METODOLOGÍAEl estudiante tomará una droga en polvo desconocida y sobre ella realizará pruebasque lo conducirán a identificarla. Una prueba confirmativa involucra análisisfisicoquímicos y espectrofotométricos más especializados y de alta confiabilidad, perocon esta marcha se despejan dudas que generalmente conducen a descartar drogas ya dar un diagnostico aproximado que puede llegar a ser preciso contando con unpatrón o estándar certificado.DESARROLLO DE LA PRÁCTICA1. ANÁLISIS ORGANOLÉPTICOS COLOR: Blanco: goma arabiga y tragacanto Amarillo: regaliz, jengibre, escila. Marrón claro: ipecacuana. Opio, hinojo, genciana, cilantro, cardamomo. Castaño claro: canela Castaño oscuro: clavo, sábila Anaranjado: ruibarbo Verde: sen, digital, estramonio.OLOR: CARACTERÍSTICOS: jengibre, hinojo, genciana, cilantro, cardamomo, canela,clavoSABOR: Aromático: cilantro, cardamomo, canela, clavo. Aromático y picante: jengibre Amargo: cuasia, genciana. aloes, quina, escila, sen, ruibarbo. Dulce: regaliz.Muestra (s) presuntiva: _______________________________2. PRUEBAS QUÍMICAS RÁPIDASSolubilidad en agua:Tomar en un tubo de ensayo aproximadamente un gramo de muestra, adicionar aguaen cantidad suficiente para cubrir la muestra; mezclar y dejar en reposo durante 15min. Al cabo de este tiempo observar y sacar conclusiones.Nota: los extractos acuosos y jugos concentrados se disuelven casi completamente, ydrogas como la goma arábiga, tragacanto y semillas de lino, ponen de manifiesto sunaturaleza gomosa o mucilaginosa.Muestra presuntiva: _______________________________________________Presencia de carbonato de calcio:Tomar en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de la muestra adicionar unasgotas de ácido sulfúrico diluido, si hay presencia de carbonato de calcio comoadulterante, tiene lugar una efervescencia seguida de disolución.Adulteración y/o falsificación: Muestra(s) con presencia de carbonato de calcio.Si ___ No ___
  38. 38. Presencia de aceites fijos y/o aceites esenciales:Aceites fijos: comprimir una pequeña cantidad de muestra en papel de filtro, siaparece una mancha oleosa que persiste luego de someterla a calentamiento (50°C),la muestra contiene aceite fijo. Ejemplo: lino, maní etc.Aceites esenciales: se reconocen por su olor aromático y a la temperatura de 50°Cdesaparece la mancha oleosa (la detección del aroma se puede apreciar al calentar lamuestra en el baño maría).Muestra (s) Presuntiva: ____________________________________________Prueba para Saponinas, Taninos y Antraquinonas:En un tubo de ensayo tomar aproximadamente 0,5 g de muestra, adicionaraproximadamente 15 ml de agua, agitar durante un minuto. Si aparece espumaabundante sospechar la presencia de drogas que contienen saponinas, como: clavos,nuez moscada etc.; hervir suavemente y anotar si aparece desprendimiento de aceiteesencial (por su olor aromático). Filtrar y dividir el filtrado en tres tubos de ensayo, dospara la prueba de taninos y uno para la prueba de antraquinonas.Filtrado 1: aproximadamente 1 ml.Filtrado 2: aproximadamente 1 ml.Filtrado 3: aproximadamente 5 ml.Ensayo para taninos: agregar al filtrado 1, dos gotas de cloruro férrico (FeCl3) al 1%,si aparece coloración de tonos azules a verdes pasando por el negro la prueba seconsidera positiva para compuestos fenólicos. Al filtrado 2 agregar unas gotas degelatina sal, si hay formación de turbidez o precipitado la prueba se considera positivapara taninos.Ensayo para antraquinonas: agregar al filtrado 3, un mililitro de H2SO4 al 50%,calentar al baño maría durante 15 minutos para producir la hidrólisis; enfriar la muestray realizar la extracción de las quinonas con 5 ml de tolueno (usar el tolueno bajocampana extractora) agitar suavemente sin emulsionar, tomar 2ml de la fase orgánicaen un segundo tubo de ensayo, adicionar aproximadamente 1 ml de hidróxido de sodioal 5% en amoníaco al 2%. Luego de agitar se obtiene un color rojo cereza en la capaacuosa, lo que indica la presencia de quinonas en la muestra.Presencia de taninos: borraja, salvia, canela, quina, clavo y ruibarbo entre otros.Presencia de antraquinonas: áloes, ruibarbo, cáscara sagrada, sen.Muestra (s) Presuntiva: ____________________________________________3. OBSERVACIÓN MICROSCÓPICAALMIDÓN:Prueba microscópica: montar placa (porta objetos y cubreobjetos) en agua, observar almicroscopio, dibujar los gránulos que encuentre.Observación visual con lugol: después de la observación microscópica, adicionar a laplaca una gota de lugol, colocarla sobre una superficie blanca y observar si losgránulos se tiñen de azul, lo cual confirma la presencia de almidón en la muestra.Ver estructuras en la consulta previamente realizada por el estudiante (Tratado deFarmacognosia. Trease-Evans. 12 Edición).Presencia de almidón. Si______ No_____TRICOMAS EPIDÉRMICOS (PELOS) Y OXALATO DE CALCIO:Montar placa (porta objetos) en hidrato de cloral, que es un reactivo que disuelve:proteínas, almidón, resinas, aceites esenciales, y produce la expansión de célulasretraídas. Calentar suavemente y observar:Ver estructuras en la consulta previamente realizada por el estudiante (Tratado deFarmacognosia. Trease-Evans. 12 Edición).Presencia de oxalatos. Si______ No_____PRESENCIA DE LIGNINA:Montar placa (portaobjetos) en solución alcohólica de floroglucina y dejar secar;agregar acido clorhídrico concentrado (HCl 37%), (usar el ácido clorhídrico bajocampana extractora) usar este reactivo con precaución puede quemar y sus vapores
  39. 39. son tóxicos, colocar el cubreobjetos y observar; si los vasos no se tiñen de rojosospechar presencia de: jengibre o ruibarbo.Presencia de lignina. Si____No____De acuerdo con la siguiente tabla y con lo observado durante la realización de lapráctica identifique su muestra problema:
  40. 40. PRÁCTICA N°13: EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE PRINCIPIOS ACTIVOS EN PLANTAS MEDICINALES, MEDIANTE CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINAOBJETIVO 1. Utilizando la parte de la planta aprobada por el INVIMA, se realizara la extracción y posterior identificación del metabolito secundario rutina presente en las plantas asignadas para la práctica, por medio de la técnica de cromatografía en capa fina. El metabolito separado sirve de indicador (marcador) para corroborar la autenticidad de la planta medicinal utilizada y no siempre es el responsable de la acción farmacológica.METODOLOGÍASobre el extracto de la planta asignada y/o una forma farmacéutica previamenteestablecida, el estudiante procederá a la extracción y posterior identificación delprincipio activo mediante la técnica de cromatografía en capa fina y de acuerdo almétodo de extracción especificado para cada muestra.A continuación se presenta un diagrama de un procedimiento cromatográfico, dondese ilustran los pasos a seguir en una separación cromatográfica.METODOLOGÍAMuestra No 1 Flores de Pensamiento (Viola tricolor)MÉTODO DE EXTRACCIÓN: tomar 1 gramo del material vegetal seco y molido yextraer con etanol durante 10 minutos sobre un baño de agua a 60°C.Filtrar y concentrar el filtrado para la cromatografía.FASE ESTACIONARIA: Silica Gel GF-254FASE MÓVIL: Acetato de etilo: Acido fórmico: Acido acético: Agua (100 : 11 : 11 : 26)REVELADOR QUÍMICO: revelador de productos naturales, ácido difenilbórico(solución 1) y polietilenglicol (solución 2).REVELADOR FÍSICO: luz UV 365nm.El extracto concentrado se siembra en placas cromatográficas, según instrucciones delprofesor y utilizando RUTINA como el patrón.Luego de la siembra se introduce la placa en la cámara cromatográfica que contiene lafase MÓVIL y se deja hasta alcanzar el frente del solvente.
  41. 41. PRÁCTICA N°14:PRÁCTICA ESPECIAL: PRESENTACIÓN DE ALTERNATIVAS DE SOLUCIÓN A LAPROBLEMÁTICA RELACIONADA CON EL USO INADECUADO DE LAS PLANTAS MEDICINALES, COMO PROYECCIÓN A LA COMUNIDAD DE LOS FUTUROS PROFESIONALES EN TECNOLOGÍA EN REGENCIA DE FARMACIA.OBJETIVO 1. Tomar conciencia de la realidad y problemática de la venta de plantas medicinales 2. Conocer las plantas que se comercializan en la ciudad de ArequipaINTRODUCCIÓN
  42. 42. http://www.cofzaragoza.org/farm/anexos/boletines/BIFAR_2007/BIFAR%20101.pdfhttp://bvs.sld.cu/revistas/far/vol45_3_11/farsu311.htmhttp://gestiondelafarmacia.blogspot.com/http://www.tipsdenutricion.com/articulos/recetas-nutritivas/http://www.jano.es/jano/ctl_servlet?_f=11&iditem=998&idtabla=1http://www.dominguezia.org.ar/volumen/index.php?Mostrar=25-1

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