O documento descreve uma pesquisa sobre biomarcadores em tumores de mama triplo negativo em mulheres afro-americanas e latinas. Os resultados mostraram que os subtipos mais comuns nesses grupos foram receptor hormonal positivo/HER2 negativo e triplo negativo, e que esses últimos apresentaram piores resultados. Marcadores como CD44 positivo/CD24 negativo, perda de PTEN e níveis de IGF1 foram associados a piores prognósticos especificamente em mulheres afro-americanas.
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Triple Negative Breast Tumors in African American and Hispanic: Latina Women Are High in CD44⊕, Low in CD24⊕, and Have Loss of PTEN
1. TRIPLE NEGATIVE BREAST TUMORS IN AFRICAN-
AMERICAN AND HISPANIC/LATINA WOMEN ARE HIGH
IN CD44⊕, LOW IN CD24⊕, AND HAVE LOSS OF PTEN
YANYUAN WU, MARIANA SARKISSYAN,
YAHYA ELSHIMALI, JAYDUT V. VADGAMA
2. INTRODUÇÃO
• Portadoras de câncer de mama afroamericanas e latinas
têm pior prognóstico que portadores de câncer de mama
caucasianas
• A causa provável reside na expressão de receptores para
esses 2 grupos populacionais:
• ER (Estrogen Receptor);
• PR (Progesterone Receptor);
• HER2 (Human Epidermal growth factor Receptor 2).
HR (Hormone
Receptor)
3. TRIPLE NEGATIVE BREAST
CANCER (TNBC)
• Câncer de mama triplo negativo corresponde a:
• ER⊖;
• PR⊖;
• HER2⊖.
• Possuem tratamento limitado, pois não respondem a:
• Tamoxifeno, voltado para HR⊕;
• Trastuzumabe, voltado para HER2⊕.
HR⊖
4. CANCER-STEM-CELL-LIKE CELLS
(CSC)
• Células cancerígenas similares a células-tronco
• O fenótipo CSC é manifestado por uma maior
presença de células CD44⊕ e CD24⊖: pior
prognóstico e uso como novos biomarcadores
• TNBC tem sido repetidamente associado ao
fenótipo CSC
7. BIOMARCADORES
TRADICIONAIS
• Há diversos biomarcadores da via Akt/PI3K,
associado ao ciclo celular:
• PTEN (Phosphatase and TENsin homologue);
• pAkt (phosphorylated Akt);
• FOXO1 (Forkhead bOX protein O1a).
• Marcador de proliferação: Ki67
10. NOVOS BIOMARCADORES
• Eixo do IGF (Insuline-like Growth Factor):
• IGF1 (Insuline-like Growth Factor 1);
• IGFBP3 (Insuline-like Growth Factor Binding
Protein 3).
• CD44 [Cluster of Differentiation 44 (Indian blood
group)]
• CD24 (Cluster of Differentiation 24)
11. EIXO DO IGF
• IGF1: fator de crescimento sistêmico que se liga a
diversas proteínas ligantes, especialmente IGFBP3
• IGFBP3: principal proteína ligante da IGF-1
(atenção: ≠ receptor)
★ Cânceres de mama de pior prognóstico níveis
séricos de IGF-1 e de IGFBP3 (∴ ➡ quantidades
livres circulantes)
13. OBJETIVOS
• Caracterizar diferenças entre subtipos de tumores
entre pacientes afroamericanas e latinas
• Identificar potenciais biomarcadores associados
com progressão tumoral em cada subtipo tumoral
• Determinar o prognóstico em pacientes com
câncer de mama com diferente expressão de
biomarcadores e subtipos de tumores
14. MÉTODOS
• n = 318, dos quais:
• 166 eram autodeclaradas afroamericanas;
• 152 eram autodeclaradas latinas.
• Definição de subtipos de tumor:
• HR⊕ e HER2⊕
• HR⊕ e HER2⊖
• HR⊖ e HER2⊕
• HR⊖ e HER2⊖
4 subtipos de tumor
classificados por IHC
(imuno-histoquímica)
15. MÉTODOS
• Padrões para cada subtipo de tumor:
• HR⊕: >5% de positividade nuclear
• HR⊖: <5% de positividade nuclear
• HER2⊕: alto, quando >20% de positividade nuclear
• HER2⊖: baixo, quando <20% de positividade
nuclear
16. MÉTODOS
• Padrões para PTEN:
• PTEN⊕: >5% de positividade citoplasmática
• PTEN⊖: <5% de positividade citoplasmática
17. MÉTODOS
• Padrões para CD44, sitiado à membrana plasmática e
ao citoplasma, para porcentagem de positividade:
• 0: negativo;
• 1: <10% de células positivas;
• 2: 11-50% de células positivas;
• 3: 51-80% de células positivas;
• 4: 80-100% de células positivas.
Porcentagem de
positividade ≠ in-
tensidade de colo-
ração (⊕, ⊕⊕, ⊕⊕⊕)
18. MÉTODOS
• Padrões para CD24, sitiado à membrana celular e
ao núcleo, são os mesmos de CD44
• Score final: porcentagem de positividade x intensidade de coloração
19. COLORAÇÃO POR IHC
• Dos 318 blocos disponíveis, apenas 150 blocos,
i.e., aqueles com >10% de células tumorais, foram
selecionados
• Para CD44/CD24 (1º corte):
Tratamento
com citrato de
sódio a 95ºC
por 10min
Coloração dupla por
IHC para CD44/CD24
com anticorpos anti-CD44
e anti-CD24
CD44: 60min em
RT, detecção por
Permanent Red
CD24: 30min em RT, detecção
por diaminobenzideno (DAB)
20. COLORAÇÃO POR IHC
• Para PTEN (2º corte):
!
!
• Para FOXO1 e pAkt (3º corte): obtidas de outros
estudos do mesmo grupo.
Tratamento
com citrato de
sódio a 95ºC
por 10min
Coloração dupla por
IHC para PTEN com
anticorpo anti-PTEN
60min em
RT, detecção por
Vectastain Universal
elite ABC kit e visua-
lizado por DAB
21. MÉTODOS
• A determinação de IGF1 e IGFBP3 ocorreu por
radioimunoensaio (RIA).
• Análise estatística:
Curvas de sobrevida
de Kaplan-Meier
Sobrevida livre de doença (DFS):
proporção de pessoas com
câncer que atingem recidiva ou metástase
Risco relativo (RR)
Regressão de Cox:
análises uni- e multi-variadas
ANOVA: comparação de
variáveis quantitativas
Qui-quadrado: comparação de
variáveis categóricasp-valor < 0,05 é
estatisticamente
significativo
22. RESULTADOS
• Características demográficas
• O subtipo mais prevalente em ambas
afroamericanas (49,4%) e latinas (48,7) foi o
HR⊕HER2⊖;
• O segundo subtipo mais prevalente em ambas
afroamericanas (35%) e latinas (28,3%) foi o
TNBC (HR⊖HER2⊖).
23. RESULTADOS
• Expressão de CD44, CD24 e outros biomarcadores:
• CD44⊖: associado a HR⊕HER2⊖;
• CD44⊕CD24⊖: TNBC;
• IGF1: mulheres em pré-menopausa;
• IGFBP3: sem relações estatisticamente
significativas
24. RESULTADOS
• Expressão de PTEN, pAkt e FOXO1:
• PTEN⊖: TNBC;
• pAkt⊕: CD24⊕;
• FOXO1⊖: HR⊖HER2⊕.
• DFS:
• TNBC e HER2⊕ têm DFS menor que outros subtipos em ambas
afroamericanas e latinas;
• PTEN⊖ reduziu DFS em afroamericanas, mas não em latinas
25. DISCUSSÃO
• Os subtipos de câncer de mama HR⊖HER2⊕ e
TNBC (associado ao subtipo CD44⊕CD24⊖, o
fenótipo CSC) são muito comuns em
afroamericanas e latinas
• PTEN⊖: TNBC em afroamericanas e latinas, com
diminuição de DFS naquelas, mas não nestas.