1.
ENZIMA INMUNOANÁLISIS (EIA) Lcda. Griselda Arteaga Departamento de Microbiología Inmunología

2.
Enzima Inmuno Ensayo <ul><li>Objetivo: Comprender el principio inmunológico de la técnica de EIA, sus aplicaciones y limitantes en el diagnóstico clínico por el laboratorio. </li></ul>

3.
Contenido <ul><li>Principios del ELISA </li></ul><ul><li>Clasificación de las técnicas de ELISA </li></ul><ul><li>Procedimiento </li></ul><ul><li>Cálculo de Cut off </li></ul><ul><li>Aplicaciones Clínicas </li></ul><ul><li>Ejemplos de aplicaciones clínicas </li></ul><ul><li>Flujograma diagnóstico panameño del VIH. </li></ul><ul><li>Flujograma diagnóstico panameño del VIH en niños menores de 18 meses. </li></ul>

4.
EIA <ul><li>ELISA: Enzyme linked immunosorbent assay </li></ul><ul><li>Análisis de inmunoabsorción enzimática </li></ul><ul><li>PRINCIPIO : </li></ul><ul><li>Determinación cuantitativa de un antígeno o un anticuerpo por medio de una molécula indicadora, la cual se encuentra unida covalentemente a una enzima. </li></ul>

5.
CONJUGADO ANTICUERPO MARCADO CON ENZIMA ANTIGENO MARCADO CON ENZIMA ENZIMA: Peroxidasa de rabano, FAL, Glucosa oxidasa,Catalasa, AC, etc

6.
Clasificación de las técnicas de ELISA <ul><li>Análisis Competitivo empleando: </li></ul><ul><ul><li>Conjugado antígeno-enzima </li></ul></ul><ul><ul><li>Conjugado anticuerpo marcado con enzima </li></ul></ul><ul><li>Análisis No Competitivos </li></ul><ul><ul><li>Sandwich </li></ul></ul><ul><ul><li>Indirecto para medir anticuerpos </li></ul></ul>

7.
ELISA Competitivo con Ag marcado Anticuerpo en fase solida Ag libre Ag-E lavado Añadir substrato, Incubar y medir actividad enzimática

8.
ELISA tipo Sandwich Ag Ac en fase sólida Lavar + + conjugado lavar Medición de act. enz .

9.
ELISA INDIRECTO, para medir anticuerpo

10.
REACTIVOS

11.
LECTOR DE ELISA

12.
Cálculo del Cut-off y Zona Gris <ul><li>Valor de corte o Cut Off </li></ul><ul><ul><li>CO=NCx +0.3 </li></ul></ul><ul><li>Zona Gris o Equivoca </li></ul><ul><ul><li>CO +/- 10%CO </li></ul></ul>

13.
RESULTADOS FALSOS POSITIVOS <ul><li>Reacciones cruzadas entre anticuerpos con especificidades similares. </li></ul><ul><ul><li>Enfermedades Autoinmunes </li></ul></ul><ul><ul><li>Embarazadas </li></ul></ul><ul><ul><li>Presencias de virus como Epstein Barr, VIH, etc. </li></ul></ul><ul><li>Contaminación cruzada entre muestras. </li></ul><ul><li>Deterioro de los reactivos </li></ul><ul><li>Errores Técnicos </li></ul>

14.
Resultados Falsos Negativos <ul><li>Paciente no ha generado los anticuerpos en estudio </li></ul><ul><li>Los anticuerpos de la muestra no tienen especificidad contra el antígeno de la prueba o viceversa. </li></ul><ul><li>Deterioro de los reactivos </li></ul><ul><li>Errores Técnicos </li></ul>

15.
APLICACIONES CLINICAS <ul><li>Diagnósticos de infecciones por microorganismos: al detectar la presencia de antígenos del agente infeccioso. </li></ul><ul><li>Confirmación de la presencia de anticuerpos: pueden ser anticuerpos contra cualquier microorganismo, inclusive vacunas, autoanticuerpos, etc. </li></ul><ul><li>Cuantificación de metabolitos: hormonas, medicamentos, etc </li></ul>

16.
Ejemplos <ul><li>En mujeres embarazadas: </li></ul><ul><ul><li>Medición de HGC-cualitativa y cuantitativa </li></ul></ul><ul><ul><li>Toxo IgG, IgM </li></ul></ul><ul><ul><li>Rubeola IgG, IgM </li></ul></ul><ul><ul><li>VIH </li></ul></ul><ul><ul><li>CMV </li></ul></ul><ul><li>Diagnóstico de VIH </li></ul><ul><li>Monitoreo de hormonas-tratamiento </li></ul>