MORFOLOGIA Y REPRODUCCION DE HONGOS

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HONGOS GENERALIDADES

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MORFOLOGIA Y REPRODUCCION DE HONGOS

  1. 1. MICOLOGÍA* También llamada micetología, esla ciencia que se dedica al estudiode los hongos
  2. 2. un grupo de organismoseucariotas entre los que seencuentran los mohos, laslevaduras y las setas. Estospueden ser de virulencia alta
  3. 3. • LOS HONGOS MICROSCÓPICOS COMPRENDEN LAS LEVADURAS, HONGOS FILAMENTOSOS Y MOHOS
  4. 4. • EXISTEN APROXIMADAMENTE 100,000 ESPECIES DE HONGOS MICROSCOPICOS• VIVEN COMO SAPROFITOS• 50 ESPECIES PRODUCEN ENFERMEDADES EN EL HOMBRE Y ANIMALES• 8000 ESPECIES CAUSANENFERMEDADES EN PLANTAS
  5. 5. • EN EL AREA DE LA INDUSTRIA FARMACEUTICA ALGUNOS HONGOS SON UTILIZADOS PARA OBTENER ANTIBIOTICOS, COMO LA PENICILINA DEL GENERO PENICILLIUM.
  6. 6. • PUEDEN USARSE EN LA DEGRADACION DE HIDROCARBUROS• CRECEN TANTO EN AGUA DULCE COMO EN AGUA SALADA• ALGUNOS HONGOS PRODUCEN SUSTANCIAS TOXICAS EN ALIMENTOS
  7. 7. *Los hongos son muyabundantes y ubicuos en lanaturaleza.* Son excelentesdegradadores de materiaorgánica
  8. 8. Los hongos son diferentes a otrosorganismos vivos, carecen de clorofila, nopueden ser autótrofos, por tanto,necesitan obtener sus requerimientosnutricionales de material orgánico yaformado.
  9. 9. *Son organismos eucariotas.*Son quimio heterótrofos.*Son inmóviles.*Pueden ser unicelulares o pluricelulares.
  10. 10. ANATOMÍA DE LA CÉLULA FÚNGICA
  11. 11. ANATOMÍA• La célula fúngica es una de las menos conocidas. Posee organización eucariota también.• Se suele decir a menudo que este tipo de célula se parece a la célula animal.
  12. 12. ANATOMÍAELEMENTOS DE LA ENVOLTURA:• Cápsula• Pared celular• Membrana plasmáticaELEMENTOS INTERNOS:• Núcleo• Sistema endomembranal• Ribosomas
  13. 13. CÁPSULA• Situada fuera de la paredcelular (en pocas especies)Del género Cryptococcus,como el Cryptococcusneoformans.
  14. 14. CÁPSULA• Compuesta por polisacáridos (glucoroxidomananos) que brinda protección frente a las defensas del hospedero.• En hongos unicelulares tiene polisacáridos mucilaginosos, con capacidad inmunógena y acción antifagocitaria.
  15. 15. PARED CELULAR• Tiene crecimiento constate.• Protege a la célula.• Le da su forma característica.• Tiene nutrición absortiva.
  16. 16. PARED CELULAR• Está formada por capas (polímeros polisacáridos fibrilares) como la quitina y la celulosa.• Contiene proteínas asociadas con polisacáridos y lípidos (antígenos).Por ejemplo: CANDIDA.
  17. 17. MEMBRANA PLÁSMATICA• Se ubica debajo de la pared celular.• Integrada por fosfolípidos y proteínas.• Mesosomas.• Transporta sustancias de un lugar de la membrana a otro. (regulación)• Permite la permeabilidad y es selectiva.• Rica en sistemas enzimáticos. Por ejemplo: citocromo P450.• Protección y forma.
  18. 18. MEMBRANA PLÁSMATICA
  19. 19. NÚCLEO• Posee membrana porosa que permite la comunicación con el citoplasma.• Tiene entre 2 y 4 cromosomas y un nucléolo.• Forma esférica u ovalada.• Contiene lamayor parte delmaterial genético.
  20. 20. NÚCLEOFunciones:• Replicación y transcripción de ácidos nucleicos.• Almacena la informacióngenética, pasándola a lascélulas hijas en elmomento de la divisióncelular.
  21. 21. SISTEMA ENDOMEMBRANAL• Es un sistema de membranas interconectadas que recorren el citoplasma desde el núcleo hasta la membrana plasmática. Se divide en:• Envoltura nuclear.• Retículo endoplásmatico liso y rugoso.• Aparato de Golgi.• Lisosomas.• Vacuolas.
  22. 22. SISTEMA ENDOMEMBRANAL• Envoltura nuclear:doble unidad demembrana porosa quedelimita al núcleo.Por los poros entranal núcleo las proteínas,fabricadas por losribosomas• Retículo endoplásmatico: red membranosa comunica a la membrana con el núcleo.
  23. 23. SISTEMA ENDOMEMBRANAL• RER: Transporta sustancia y en su superficie representa ribosomas las cuales sintetizan proteínas que posteriormente son modificadas por el RER.
  24. 24. SISTEMA ENDOMEMBRANAL• REL: su función es la• síntesis de lípidos. No posee ribosomas.
  25. 25. SISTEMA ENDOMEMBRANAL• Aparato de golgi: continuación del R.E. el cual modifica proteínas y lípidos producidos en el RE , es un sistema de empaquetado y de entrega de moléculas.
  26. 26. SISTEMA ENDOMEMBRANAL• Lisosomas: organelos esféricos que efectúan la degradación o digestión.• Vacuolas: almacenan aceite o almidón y bombean el exceso de agua.
  27. 27. RIBOSOMAS• Orgánulos pequeños que producen proteínas propias (síntesis de proteínas).• Formados de ARN y proteínas.• Lugar donde se ensamblan los aminoácidos para formar proteínas.
  28. 28. MORFOLOGÍAMACROSCÓPICA YMICROSCÓPICA
  29. 29. Morfología Disciplina encargada del estudio de la reproducción y estructura de un organismo o sistema.
  30. 30. Se les llama también Eumicetos, no producenFlagelos (son inmóviles la mayor parte de ellos.)Los hongos microscópicos pueden ser:Hongos UnicelularesHongos Filamentosos
  31. 31. Hongos UnicelularesSe llaman hongos levaduriformes olevaduras
  32. 32. Hongos FilamentososSe llaman mohos y cada organismo tienemuchas células.
  33. 33. Tanto las levaduras como los mohospresentan células eucariontes, es decir,con cromosomas múltiples, membrananuclear bien definida, mitocondrias,retículo endoplásmico y pared celular.
  34. 34. Son microorganismos que contienen paredescelulares rígidas hechas de glucógeno, decelulosa, de quitina, o mananas.La membrana celular fúngica, a diferencia delabacteriana, presenta esteroles (esteroides con27 a 29 átomos de carbono).Estos microorganismos carecen de clorofila, yson heterótrofos. Algunas levaduras ó algunasespecies de Candidas tienen capsula , la cuales antifagocítica.
  35. 35. El conjunto celular de los mohos esllamado micelio. Hifa Micelio Talo
  36. 36. Aspecto de las colonias de Mohos:Tipo aterciopeladoAlgodonoso o polvosoDiversas coloraciones que abarcan toda la gama de color
  37. 37. Los hongos poseen hifas multinucleadas y estaspueden tener septos o carecer de ellos; conbase a esta característica, se clasifican en:Hongos con micelio cenocítico: son los que carecen de septos o tabicacionesHongos con micelio septado: son los que presentan septos o tabicaciones entre las células
  38. 38. Formación de blastoconidos Fisión Seudohifas Hifas cenocíticas Hifas tabicadas Hifas tabicadas con conexiones en PinzaMorfología de la célula fúngica A. Levaduras que se reproducen formandoblastoconidios B. Levaduras que se dividen por fisión C. Desarrollo de seudohifas D.Hifas cenociticas E. Hifas tabicadas F. Hifas tabicadas con conexiones en pinza.Tomado de Murray P. (19)
  39. 39. En cuanto a su función, las hifas ymicelios se clasifican en 2 tipos:1. Hifa o Micelio Vegetativo: Es el que penetra al sustrato para absorber las sustancias nutritivas.2. Hifa o Micelio Aereo o Reproductivo: Es el que se proyecta sobre el sustrato y produce las estructuras de reproducción.
  40. 40. Los hongos se reproducen principalmente pormedio de esporas, que son, estructurasespecializadas para la propagación del hongo,y están capacitadas para soportar condicionesadversas del medio ambiente.
  41. 41. Clasificación de las esporas fúngicas a) Artroconidios b) Blastoconidios c) Clamidoconidios Asexuales D) Mitocondrias E) Macroconidias F) Esporangiosporas Esporas fúngicas I. Cigosporas (zigospora) II. Ascospora Sexuales III. Basidiospora IV. Oospora
  42. 42. Esporas asexualesSon generalmente resistentes a la sequedad o a la radiación pero no especialmente al calor, y no presentan un periodo de latenciaSon capaces de germinar cuando hay humedad y a menudo en ausencia de nutrientes
  43. 43. Esporas sexualesSon por lo general mas al calor que las asexuales , aunque ninguna espora de hongos muestra la extrema resistencia al calor como la endospora bacterianaLas esporas sexuales presentan a menudo latencia, germinando solo cuando han sido activadas de alguna manera.
  44. 44. a) Artroconidiosb) Blastoconidiosc) Clamidoconidios*****************d) Microconidiase) Macroconidiasf) Esporangiosporas
  45. 45. ArtroconidiosSe forman por fragmentación de hifas, generalmente son rectangulares con doble pared gruesaAnteriormente llamadas artrosporas
  46. 46. BlastoconidiosSe forman en las levaduras por la gemación a partir de una célula preexistente.Anteriormente llamado blastosporas
  47. 47. ClamidoconidiosSe forma cuando las condiciones del medio se tornan adversas, las células aumentan de tamaño y se hinchan.Anteriormente se llamaban clamidosporas
  48. 48. Las siguientes son esporas producidas libremente, porsegmentación de las puntas de las hifas especializadas, llamadas conidioforos
  49. 49. MicroconidiasSon esporas unicelulares que se presentan en una variedad de tamaños, formas y coloresSon producidos por los conidioforos, mediante el estrangulamiento sucesivo en el punto de unión.
  50. 50. MacroconidiasSon esporas multicelulares, las hay de diversas formasLas Macroconidias pueden dividir en dos o mas células por tabiques transversales y pueden adoptar formar de huso o de clava
  51. 51. EsporangiosporasSon esporas producidas dentro de estructuras especializadas llamadas esporangios, que son sacos redondos unidos al micelio vegetativo por una estructura especial llamada esporangióforo
  52. 52. Esporas sexualesI. Cigosporas o ZigosporasII. Ascosporas Diferentes tipos deIII. Basidiosporas esporas sexuales de mohos (a) ZigosporaIV. Oosporas de un Zigomiceto (b) Ascosporas en el asca de un ascomiceto © Basidiosporas en la basidia de un basidiomiceto
  53. 53. ZigosporasLas zigosporas se forman al combinarse dos células sexuales similares entre sí.
  54. 54. AscosporasLa ascospora (fruto de la reproducción sexual) genera un micelio, que genera a su vez un conidio fruto de la reproducción asexual y que también genera micelio
  55. 55. BasiodiosporasLas basiodiosporas son las esporas sexuales producidas en grandes cantidades por los basidiomicetos
  56. 56. OosporasUna oósporo es una espora sexual de pared celular gruesa que se desarrolla a partir de una oosfera fertilizada en algunos protista, algas y hongos. Es una estructura de supervivencia que puede resistir durante varios años.
  57. 57. FACTORES DE NUTRICIÓN Y CRECIMIENTO
  58. 58. FUENTES DE ENERGIALos hongos son heterótrofos, es decir que requieren de compuestos orgánicos preformados como fuente de carbono. La mayoría de los hongos son saprofitos, sólo algunas especies son patógenas para el hombre y los animales
  59. 59. Fuente de carbono: pueden ser hidratos de carbono como glucosa, que adenás actúa como fuente de energía.Fuente de nitrógeno: pueden utilizar compuestos inorgánicos de nitrógeno como cloruro de amonio, sulfato de amonio, nitrato de potasio o compuestos orgánicos simples como urea.
  60. 60.  Oligoelementos:Los oligoelementos son bioelementos presentes en pequeñas cantidades ( menos de un 0,05%) en los seres vivos (Zn, Fe Ca). Ph óptimo de crecimiento:oscila entre 4,5 a 5,5. este Ph confiere al medio un carácter seletivo sobre todo cuando se quiere cultivar hongos y éstos se hallan acompañados de bacterias. Temperatura: creen entre 37 y 38 ºC, algunos desarrollan a temperatura ambiente.
  61. 61. FACTORES FISICO-QUIMICOS. Pueden afectar el crecimiento de bacterias y homgosTEMPERATURA:-Psicrofilicas. -menor de 10ºC-Psicrofilas. 10 – 20ºC-Mesofilas. 21 – 40ºc-Termofilas. Mayor a 41ºCPH:-Hongos patogenos pH de 5.5 a 5.7
  62. 62.  Presión osmótica. Mantienen una presión de turgencia positiva, porque la presión osmótica de su contenido celular es mayor que la presión osmótica del medio ambiente La presión de turgencia suministra la fuerza a la célula para crecer Presión hidrostática. La mayoría de levaduras no pueden crecer a presiones superiores a 8 atmósferas, una presión muy baja a diferencia de las bacteria que crecen a menos de una atmosfera.
  63. 63. HUMEDAD:-70% A 80%ATMOSFERA:-Anaerobios obligados. Oxigeno es letal (clostridium, bacteroides)-Anaerobios aerotolerantes. Pueden permanecer en oxigeno
  64. 64. -Aerobias facultativas, Capaces de crecer en anaerobiosis y aerobiosis (enterobacterias).-Aerobias obligadas. El oxigeno es indispensables para su crecimiento (la mayoria de los hongos).
  65. 65. RESPIRACION - ANAEROBIA -GLUCOLISIS Y FERMENTACION 2 Ácidos Glucosa 2 Gliceraldehido glicéridos Ciclo de Proceso 2 Ácidos Krebs aerobio Pirúvicos 2 Alcoholes 2 Ácidos 2 Acetaldehídos etílicos Lácticos
  66. 66. Tipos de metabolismo• Metabolismo primario y secundario.• · Primario à usa la célula para mantenerla viva (reacciones anabólicas y catabólicas necesarias para el mantenimiento y crecimiento de la célula).
  67. 67. Secundario à rutas metabólicas alternativas de sustancias no útiles para las células.• ·Son vías fundamentalmente anabólicas.• La estructura química es inusual para la célula y sin ninguna función celular.• Las vías son específicas por un grupo de hongos o hongo concreto.
  68. 68. Fermentación• La fermentación es un proceso catabólico de oxidación incompleta, totalmente anaeróbico, siendo el producto final un compuesto orgánico.
  69. 69. • En los seres vivos, la fermentación es un proceso anaeróbico y en él no interviene la mitocondria ni la cadena respiratoria.• Son propias de los microrganismos como algunas bacterias y levaduras.
  70. 70. • También se produce la fermentación en la mayoría de las células de los animales; algunas células, como los eritrocitos, carecen de mitocondrias y se ven obligadas a fermentar;
  71. 71. • el tejido muscular de los animales realiza la fermentación láctica cuando el aporte de oxígeno a las células musculares no es suficiente para el metabolismo aerobio y la contracción muscular.
  72. 72. Tipos de fermentaciones• Fermentación acéticaes la fermentación bacteriana por Acetobacter.
  73. 73. Fermentación alcohólicaAusencia de aire originado por la actividad dealgunos microorganismos que procesanlos hidratos de carbono para obtener:un alcohol en forma de etanol dióxido decarbono en forma de gas y unas moléculasde ATP que consumen los propiosmicroorganismos en su metabolismo celularenergético anaeróbico.
  74. 74. Fermentación butíricaEs la conversión de los glúcidos en ácidobutírico por acción de bacterias de laespecie Clostridium butyricum en ausencia deoxígeno. Es característica de las bacterias delgénero Clostridium y se caracteriza por laaparición de olores pútridos y desagradables.
  75. 75. Fermentación lácticaEs una ruta metabólica anaeróbica que ocurreen el citosol de la célula, en la cualse oxida parcialmente la glucosa para obtenerenergía y donde el producto de desecho esel ácido láctico.
  76. 76. AlimentaciónRealizan una digestión externa de susalimentos, secretando enzimas, queabsorben luego las moléculas disueltasresultantes de la digestión.A esta forma de alimentación se le llamaosmotrofia, la cual es similar a la que seda en las plantas pero, a diferencia deaquéllas, los nutrientes que toman sonorgánicos.Los hongos son los descomponedoresprimarios de la materia muerta de plantasy de animales en muchos ecosistemas.
  77. 77. • Es la intoxicación o envenenamiento causado por la ingestión de macromicetos que contengan o produzcan sustancias que no pueden ser descompuestas por los procesos digestivos y metabólicos que al ser absorbidas, provocan reacciones tóxicas que causan desde un cuadro diarreico sin complicaciones hasta la muerte por destrucción hepática y/o renal.
  78. 78. Micetismo Periodo de Características incubaciónFloidiano 8 a 12 h hasta FASE Pirosis, gastralgias, vómitos, cólicos, 24 h COLERIFORME: diarrea abundante y fétida Cefaleas, vértigos y calambres. Agitación, convulsiones y colapso circulatorio. FASE Hepatomegalia, ictericia, necrosis HEPATORRENAL hemorrágica de los hepatocitos, dolor en hipocondrio derecho, albuminuria, hematuria y anuria. Muerte entre 40 y 48 h después de la ingestión del hongo. FASE Trastornos de la conciencia, desde NEUROLÓGICA: confusión hasta coma profundo. Trastornos del comportamiento, euforia paradójica y agitación. Signo de Babinsky, arreflexia total, parálisis a diferentes niveles.
  79. 79. Micetismo Periodo de Características incubaciónParafaloidian 12 h hasta Sequedad de mucosa oral, signos de nefritis, azoemia y 17 días albuminuria. Hematomas, cefalea, somnolencia, espasmos musculares y convulsiones. Coma urémico. Muerte solamente en el 15% de los casos.Muscarínico 2a3h SÍNDROME SUDORIANO SÍNDROME PANTERINIANOGastrointestinal 30 min a 6 Náuseas, vómitos, diarreas, dolor abdominal intenso. hInconstante o Muy SÍNDROME GIROMITRIANOcondicionad variable SÍNDROME COPRINIANOCerebra 1a4 Hipotensión, taquicardia e hipertermia. Céfalea, mialgias y síntomas psicotrópicos: cambios en la percepción, translación de estímulos sensoriales ,cambios en la comprensión, alucinaciones y pérdida de la relación espacio-tiempo.Pueden presentarse alteraciones en la transmisión de los impulsos cardíacos, arritmias e infarto al miocardio. Depresión y angustia a la salida del trance.
  80. 80. Los efectos incluyen enfermedades yproblemas de salud, depresión delsistema inmunológico, irritación, alergiasy en algunos casos, la muerte.Las mico toxinas causan efectos mediantesu ingestión, contacto con la piel oinhalación. Pueden inhibir la síntesis deproteínas, dañar el sistema inmunitario, Aspergilluslos pulmones e incrementar lasensibilidad a las toxinas bacterianas Ejemplo de Micotoxicosis: ergotismo gangrenoso. causado fundamentalmente por Claviceps purpurea que contamina el centeno
  81. 81. • ALGUNOS HONGOS TOXICOS PRODUCEN MICOTOXINAS (EXOTOCINAS EXCRETADAS POR HONGOS).• CRECEN EN GRANOS CON CIERTA HUMEDAD PROVOCANDO MICOTOXICOSIS: AFLATOXINAS: DAÑO EPATICO FUSARINAS: EFECTOS NEUROLOGICOS Y ABORTIVOS.
  82. 82. Reproducción de los hongos:La gran mayoría de los hongos producen esporas comomedio para asegurar la dispersión de la especie y susupervivencia en condiciones ambientales extremas. Así,la espora es la unidad reproductiva del hongo y contienetoda la información genética necesaria para el desarrollode un nuevo individuo.
  83. 83. Existen dos tipos de esporas:Las asexuales, que suelen ser resistentes a la sequedady a la radiación, pero no al calor, por lo cual no tienenperíodo de latencia. Pueden germinar cuando hayhumedad, incluso en ausencia de nutrientes.Las sexuales, más resistentes al calor que las asexuales,aunque no tanto como las endosporas bacterianas;suelen presentar latencia, germinando sólo cuando sonactivadas (por ejemplo por calor suave o algunasustancia química)..
  84. 84. En los hongos hay dos formas de reproducción: sexual yasexual, aunque en algunas especies coexisten ambasformas en el mismo organismo (holomorfo),denominándose estado perfecto o teleomorfo a laforma sexual y estado imperfecto o anamorfo a laasexual.De esta forma, los hongos que presentan reproducciónsexual se denominan hongos perfectos y los que sólotienen (o sólo se les conoce) reproducción asexual sedenominan hongos imperfectos
  85. 85. Reproducción asexual:Los elementos de propagación asexual (esporas asexuales)pueden generarse de forma interna, redondeándose lacélula del interior de la hifa y quedando rodeada por unagruesa pared para luego desprenderse (clamidiosporas) obien formándose en el interior de una estructuradenominada esporangio que al madurar se rompeliberando las esporas (esporangiosporas).
  86. 86. También pueden generarse de forma externa, como unaproducción de la hifa en vez de como unatransformación (conidiosporas) y suelen formarse enestructuras diferenciadas de la hifa (conidióforos). Lavariedad de las estructuras productoras de conidios esinmensa y se utilizan como característica fundamentalen la clasificación.
  87. 87. Reproducción sexual:En la formación de esporas sexuales intervienen una granvariedad de estructuras y la reproducción sexual difierenotablemente entre los diversos grupos de hongos. Así,en los Zygomycetes es por medio de unas hifasespecializadas llamadas gametangios, en los Ascomycetesse producen a través de unas células con aspecto de sacodenominadas saco, en los Basidiomycetes intervienencélulas especializadas denominadas basidios, etc.
  88. 88. En líneas generales dos núcleos haploides de doscélulas (gametos) se unen formando un huevo (cigoto)diploide que por meiosis da lugar a cuatro núcleoshaploides. En este proceso suele haber recombinacióngenética (existe un intercambio de genes).Si los hongos poseen en el mismo micelio núcleoscomplementarios capaces de conjugarse se llamanhongos homotálicos y si necesitan núcleosprocedentes de micelios diferentes se llaman hongosheterotálicos.
  89. 89. Hongos DimórficosAlgunos hongos y especialmente, las especies patógenas,muestran dimorfismo, es decir, dos formas decrecimiento. Estos hongos pueden crecer como moho ocomo levadura. A menudo, este dimorfismo depende dela temperatura de incubación: a 37ºC el hongo eslevaduriforme mientras que a 25ºC es filamentoso..
  90. 90. Es posible reconocer el genero y especie de un hongo con reconocer sus formas de reproducción; el reconocimiento y estudio de este, se puede hacer de 3 formas:A partir de la Cultivos en Microcultivo fuente laboratorio
  91. 91. Medios De CultivoPara el aislamiento primario de los hongos, se utilizan diversosmedios de cultivo. Estos medios hay que seleccionarlos en funcióndel hongo que se sospeche y del tipo de muestra.
  92. 92. Los medios de cultivo se pueden utilizar en tubos cerrados contapón de rosca o en placas de petri. La gran superficie de estasúltimas facilita el aislamiento y la dilución de sustanciasinhibitorias en las muestras. Es importante que el medio no sedeseque por lo que el espesor de las mismas debe ser por lomenos de 25 mm, aproximadamente 35-40 mL de medio. Lasplacas se contaminan con facilidad durante la incubación por loque es aconsejable sellarlas con cinta adhesiva. Los medios entubo tienen la ventaja de que no se deshidratan y secontaminan menos, pero en cambio tienen menos superficie.
  93. 93. La temperatura de incubación debe ser seleccionada teniendoen cuenta el tipo de hongo, en general, los medios debenincubarse a 25ºC y a 37ºC durante 4 semanas antes deconsiderarse como negativos. Si se emplean tubos con tapónde rosca deben estar flojos para permitir la entrada de aire.Medios más utilizadosAgar Dextrosado de Saboureaud con Cicloheximida yCloranfenicol: se utiliza para el aislamiento e identificaciónde dermatófitos y Cándidas.Agar Dextrosado con Cloranfenicol sin Cicloheximida: seutiliza para el aislamiento e identificación de patógenosambientales y oportunitas.
  94. 94. Agar de harina de maíz (“Corn Meal Agar”): Suplementado con Tween 80: para diferenciar distintas especies de Cándida y para realizar subcultivos ya que estimula la esporulación de hongos miceliales. Suplementado con 10 gramos de Glucosa: para diferenciar TrichophytonAgar de Urea: se utiliza para diferenciar entre levaduras eidentificar diferentes especies de Trichophyton.
  95. 95. ProcesamientoEl procesamiento debe ser inmediato. Muchas muestras sepueden sembrar inmediatamente tras su recogida.Se debe sembrar la muestra en su totalidad. En caso deaspirado de abscesos, médula ósea, líquido cefalorraquídeo,etc, el volumen deberá ser de al menos 2 mL.En el caso de que la muestra proceda de exudados vaginales:agitar la torunda en 0,5 mL de agua y sembrar, o bien sembrarcon la torunda directamente.
  96. 96. En el caso de líquidos corporales se deberán tomar más de2 mL y si en los líquidos hay coágulos o materialmembranoso, será necesario fragmentarlos con el bisturí yluego realizar la siembra.Cuando la muestra son pelos y raspados: depositardirectamente en el medio, presionando para que quedenadheridos. En caso de uñas se pueden pulverizar o cortar enfragmentos.Por último, cuando se trata de cepillados bronquiales, hayque mezclar con agua destilada y sembrar el volumen total(más de 1 mL).
  97. 97. Siembra con concentraciónSe realizan siempre que la muestra es líquida y se hace porcentrifugación a 1500-2000 r.p.m. durante 10 minutos. Elsedimento se utiliza para un examen directo o bien paracultivo.En líquidos corporales: el volumen tiene que ser mayor de 2mL. Se fragmenta y se centrífuga. Si las muestras son muydensas, hay que diluirlas con agua destilada y centrifugar.En orina: volumen superior a 2 mLEn LCR: centrifugar el LCR durante 10 minutos a 1500-2000r.p.m. Retirar el sobrenadante con una pipeta estéril yresuspender el sedimento con el líquido que ha quedado.Sembrar.
  98. 98. Cultivo O MicrocultivoNo se alteran las estructuras fúngicas. Se utiliza unmedio Saboraud que se vierte sobre una placa depetri (capa delgada). Una vez solidificado cortamoscuadrados con un bisturí estéril de 1-3 cm y loscolocamos en un porta estéril o flameado. El portaestará colocado en una placa de petri estéril, sobreun soporte. En el fondo de la placa añadiremos unasgotas de agua para evitar la desecación durante laincubación.
  99. 99. Inoculamos o bien las esquinas, o bien los bordes del agarcon el hongo a estudiar. Tomamos la muestra con un asaestéril humedecida con agua. Sellamos las placas conparafilm y llevamos a incubar.Técnica Para Confirmar El DimorfismoConsiste en incubar la misma muestra a 25ºC, temperaturaa la que crecen los hongos miceliales, y a 37ºC temperaturaa la que crecen las levaduras (tejidos o medios especiales).
  100. 100. Las especies más importantes dimórficas son: Histoplasmacapsulatum, Blastomyces dermatidis, Paracoccidioidesbrasiliensis, Coccidiodes imitis. Penicillium marneffei,Slorothrix schenckii.Para la confirmación es necesario convertir la fase filamentosaen levaduriforme. Para ello incubamos parte de la coloniamicelial en una placa de Agar Sangre (3-4 fragmentos).Sellamos e incubamos a 37ºC. Examinamos periódicamente elcrecimiento buscando levaduras. Si crece colonia micelialrepetimos la siembra hasta conseguir fase levaduriforme.
  101. 101. Dentificación De LevadurasTest De FilamentaciónPreparamos una suspensión de levaduras en 0.5-1 mL desuero de conejo e incubamos a 35-37ºC no más de 3 horas.Transcurrido el tiempo observamos al microscopio lapresencia o ausencia de tubos germinales, es decir, defilamentos que no constriñen su punto de origen en lalevadura.El test será POSITIVO si se observan los tubos germinales (C.albicans)El test será NEGATIVO cuando no encontremos los tubosgerminales ((otras especies de Cándida).
  102. 102. Medio diferenciador para levadurasPosee cromógenos que colorean las colonias según laespecie. En el caso de la Cándida albicans, las colonias sonde color azul.

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