Citogenetica

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Problema de Infertilidad sin causa definida puede tener un origen cromosónico.

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Citogenetica

  1. 1. CITOGENÉTICA CLÁSICA Y CITOGENÉTICA MOLECULAR PROF. T.M. CIT. FAVIÁN TREULEN
  2. 2. ¿ QUE ES LA CITOGENÉTICA? <ul><li>Disciplina que tiene por objeto estudiar alteraciones numéricas y estructurales que pueden producirse en los cromosomas. </li></ul><ul><li>Estas alteraciones pueden ser congénitas o adquiridas. </li></ul><ul><li>Pueden producirse en todas las células del organismo o solo en algunas. </li></ul>
  3. 3. <ul><li>La citogénetica se remonta al año 1956 cuando Tijo y Levan describen el número de 46 cromosomas. </li></ul><ul><li>En 1959 Lejeune describe a la trisomía 21. </li></ul><ul><li>En 1971 Caspersson describe el primer método de bandeo cromosómico, el bandeo Q. </li></ul><ul><li>El bandeo Q y otras técnicas de bandeo (GTG, CBG) descritas posteriormente han facilitado la identificación de cada uno de los cromosomas. </li></ul>
  4. 4. <ul><li>Actualmente existe el ISCN 1995. </li></ul><ul><li>Cromosomas 1 – 22 X e Y. </li></ul><ul><li>Grupos A(1-3), B(4-5), C(6-12,X), D(13-15), E(16-18), </li></ul><ul><li>F(19-20), G(21-22,Y) </li></ul><ul><li>Brazos largos y cortos. </li></ul>
  5. 6. ¿ QUE ES UN CARIOTIPO? <ul><li>El conjunto de cromosomas de una célula se denomina cariotipo. </li></ul><ul><li>Se mantiene inalterable en todas las células de un individuo asi como en los individuos de una misma especie. </li></ul><ul><li>A veces se producen alteraciones que son estudiadas con técnicas de citogenética clásica. </li></ul>
  6. 12. ¿CÓMO OBTENEMOS UN CARIOTIPO? <ul><li>CICLO CELULAR </li></ul><ul><li>La transición desde interfase a división celular (mitosis) y volver a interfase. </li></ul><ul><li>Se reconocen 4 fases en el ciclo celular: G1 (gap one); S(síntesis); G2(gap two); M(mitosis). </li></ul>
  7. 13. MITOSIS En la fase S cada cromosoma se replica y la célula llega ser 4n. Durante la mitosis cada una de las dos copias se deriva a cada una de las células hijas. La mitosis puede dividirse en cuatro etapas: profase, metafase, anafase, telofase. En metafase los cromosomas se encuentran en su máxima compactación.
  8. 15. CULTIVO CELULAR -El análisis citogenético se puede realizar en células de diferentes tejidos como, linfocitos de sangre periférica, fibroblastos, amniocitos, trofoblastos, células tumorales y germinales. -Por la facilidad de la obtención de la muestra, los exámenes de rutina se realizan en linfocitos de sangre periférica. -Dependiendo del diagnóstico existen variaciones a la técnica standard.
  9. 17. <ul><li>Incubar la muestra en un medio de cultivo líquido adecuado (RPMI 1640). </li></ul><ul><li>Una vez alcanzado el crecimiento adecuado se detiene el ciclo celular en metafase (colcemid). </li></ul><ul><li>Se realiza la cosecha de las mitosis. </li></ul><ul><li>Se gotea la solución en un portaobjeto limpio y los cromosomas fijados al vidrio se someten luego a técnicas de tinción y bandeo. </li></ul>
  10. 18. BANDEO CROMOSÓMICO - Se someten los cromosomas a diferentes agentes denaturantes del DNA (calor, tripsina, soluciones alcalinas). -El bandeo GTG (tripsina) se usa de rutina y se complementa con otros bandeos (CBG o RBG)
  11. 23. ANÁLISIS MICROSCÓPICO -Se realiza en un mínimo de 35 mitosis bandeadas, más una fotografía y el montaje del cariotipo completo de cada una de ellas. - Este recuento debe ser aumentado a 50 o 100 mitosis en presencia de dos o más lineas celulares y en X frágil.
  12. 24. DESCRIPCIÓN DEL CARIOTIPO La descripción del cariotipo normal o con alteraciones como traslocaciones, deleciones, inversiones, rearreglos estructurales complejos, fragilidades, duplicaciones, se realiza con la nomenclatura indicada por el ISCN (1995)
  13. 30. CITOGENETICA MOLECULAR <ul><li>Las limitaciones de la citogenética clásica y de la genética molecular por si solas, han sido superadas por la implementación de la citogenética molecular que utiliza las ventajas de ambas </li></ul><ul><li>A esta metodología se le denomina FISH. </li></ul><ul><li>Se basa en la hibridación in situ, detección y localización de secuencias específicas de ácidos nucleicos en estructuras biológicas morfológicamente conservadas. </li></ul><ul><li>Utiliza sondas complementarias a un segmento de DNA. </li></ul><ul><li>Estas sondas son biotiniladas no radioactivas. </li></ul>
  14. 32. TECNICA DE FISH <ul><li>PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA </li></ul><ul><li>PREPARACION DE LAS PLACAS </li></ul><ul><li>PREPARACION DE LAS SONDAS </li></ul><ul><li>HIBRIDACION </li></ul><ul><li>LAVADOS POST-HIBRIDACION </li></ul><ul><li>DETECCION </li></ul><ul><li>TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI) </li></ul><ul><li>VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia) </li></ul>
  15. 34. TIPOS DE SONDAS PAINTING o COATING SONDAS REPETITIVAS DE DNA ALFA SATELITE SONDAS DE DNA DE SECUENCIA UNICA
  16. 47. GEN SRY EN CROMOSOMA X
  17. 48. CROMOSOMA X: SONDA ROJA CROMOSOMA Y: SONDA VERDE CROMOSOMA 18: SONDA CELESTE
  18. 50. SONDA DELECION CROMOSOMA 15
  19. 51. DELECION EN EL CROMOSOMA 15
  20. 52. DELECION DEL LOCUS KAL EN EL CROM. X
  21. 54. EL FISH NOS PERMITE RESPONDER PREGUNTAS IMPOSIBLES DE RESOLVER CON TÉCNICAS DE CITOGENÉTICA CLÁSICA, ES MENOS LABORIOSO Y MAS RÁPIDO QUE LOS BANDEOS DE ALTA RESOLUCIÓN, ES UNA TÉCNICA FACTIBLE Y PODEROSA EN RESOLUCIÓN.
  22. 55. CITOGENETICA CLASICA Y MOLECULAR EN REPRODUCCION <ul><li>APLICACIONES: </li></ul><ul><li>Determinar la prevalencia de anomalias y de variantes cromosómicas en parejas con esterilidad e infertilidad. </li></ul><ul><li>Determinar presencia de alteraciones numéricas( aneuploidias). </li></ul><ul><li>Determinar presencia de alteraciones estructurales (translocaciones </li></ul><ul><li>deleciones, microdeleciones, inversiones, duplicaciones,etc.) </li></ul><ul><li>-Determinar presencia de variantes cromosómicas (sitios fragiles, variaciones satelitales, heterocromatina centromérica aumentada, etc.) </li></ul>
  23. 56. <ul><li>Diagnóstico prenatal: (anomalias genéticas y defectos del tubo neural. </li></ul><ul><li>FISH permite la evaluación de aberraciones numéricas en células de líquido amniótico directamente sin cultivar.(trisomía 21, trisomía 13, trisomía 18, S. de Turner o S. De Klinefelter.) </li></ul><ul><li>Diagnóstico genético preimplantatorio: Posibilidad de analizar la presencia de alteraciones cromosómicas (FISH) y genéticas (P.C.R.)en embriones antes de ser transferidos al útero. (biopsia embrionaria). </li></ul><ul><li>Translocaciones, determinar el sexo de embriones en enfermedades ligadas al sexo (hemofilia, distrofia muscular de Duchenne). </li></ul><ul><li>Determinar enfermedades genéticas (Fibrosis quística, Enf. De Tay-Sachs, Sindrome de Marfan, Beta-talasemia, Anemia falciforme, etc. </li></ul>
  24. 57. LOS PROBLEMAS DE ESTERILIDAD O INFERTILIDAD SIN CAUSA DEFINIDA, PUEDEN TENER UN ORIGEN CROMOSÓMICO Y REFUERZAN LA NECESIDAD DE ESTUDIAR A UN MAYOR NÚMERO DE PAREJAS CON PROBLEMAS DE REPRODUCCIÓN PARA UNA EVALUACIÓN CITOGENÉTICA, UNA VEZ EXCLUIDAS OTRAS CAUSAS.

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