UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA<br />ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA<br />“Estandarización del Ensayo Clonogénico ...
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      INTRODUCCIÓN<br />Procesos de disección<br />
     INTRODUCCIÓN<br />Factores de Crecimiento, Hormonas, extractos embrionarios, <br />CULTIVOS CELULARES<br />Medio Esté...
UTILIDAD DE LOS CULTIVOS CELULARES <br />Sistemas Modelo<br />Ensayo Tóxico<br />Investigación  sobre Cáncer<br />Investig...
 CULTIVOS CELULARES Y CÁNCER<br />
CITOTOXICIDAD<br />Viabilidad<br />Supervivencia<br />Metabólicos<br />Transformación<br />Irritabilidad<br />
 ENSAYO CLONOGÉNICO<br />
OBJETIVOS ESPECÍFICOS :<br />Establecer la densidad celular adecuada para el Ensayo Clonogénico, en MCF-7 y SK-LU-1<br />E...
MATERIALES Y METODOS<br />Modelos Biológicos<br />MCF-7<br />SK-LU-1<br />
 REALIZACIÓN DEL ENSAYO CLONOGÉNICO<br />DENSIDAD CELULAR<br /> Y<br />TIEMPO DE INCUBACIÓN<br />POST-TRATAMIENTO<br />100...
Tratamiento con DOX<br /> <br />Incuba a 37ºC por (10 días)<br /> <br /> Incubaron 18 cajas por cada ensayo<br />
RESULTADOS Y DISCUSIÓN<br />DENSIDAD CELULAR<br /> Y<br />TIEMPO DE INCUBACIÓN<br />POST-TRATAMIENTO<br />Gráfico 3.1.Porc...
DENSIDAD CELULAR<br /> Y<br />TIEMPO DE INCUBACIÓN<br />POST-TRATAMIENTO<br />Grafico 3.2.Porcentaje de supervivencia celu...
TRATAMIENTO CON DOX<br />Grafico 3.3. Estandarización de la dosis de Doxorrubicina como control positivo en células MCF-7 ...
Gráfico 3.4Estandarización de la dosis de Doxorrubicina como control positivo en células SK-LU-1 (Cáncer de pulmón). Cada ...
CONCLUSIONES<br />Al establecer la densidad celular en las líneas celulares tumorales MCF-7 y SK-LU-1 para la aplicación d...
Gracias..<br />
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la tesis

  1. 1. UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA<br />ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA<br />“Estandarización del Ensayo Clonogénico en el Centro de Biología Celular y Molecular utilizando como control positivo de citotoxicidad Doxorrubicina, en las líneas celulares tumorales: MCF- 7 y SK-LU-1”.<br /> Tesis previa a la obtención del título de:<br /> Bioquímico-Farmacéutico<br />Autor:<br />Gabriela Elizabeth Parra Celi<br />Directora:<br />Dra. Natalia Bailón Moscoso<br />
  2. 2. UNIVERSIDAD TÉCNICA PARTICULAR DE LOJA<br />“Estandarización del Ensayo Clonogénico en el Centro de Biología Celular y Molecular utilizando como control positivo de citotoxicidad Doxorrubicina, en las líneas celulares tumorales: MCF- 7 y SK-LU-1”.<br /> Tesis previa a la obtención del título de:<br /> Bioquímico-Farmacéutico<br />Autor:<br />Gabriela Elizabeth Parra Celi<br />Directora:<br />Dra. Natalia Bailón Moscoso<br />
  3. 3. INTRODUCCIÓN<br />Procesos de disección<br />
  4. 4. INTRODUCCIÓN<br />Factores de Crecimiento, Hormonas, extractos embrionarios, <br />CULTIVOS CELULARES<br />Medio Estéril<br />Humedad<br />pH<br />Temperatura<br />
  5. 5. UTILIDAD DE LOS CULTIVOS CELULARES <br />Sistemas Modelo<br />Ensayo Tóxico<br />Investigación sobre Cáncer<br />Investigación y desarrollo de Fármacos<br />
  6. 6.  CULTIVOS CELULARES Y CÁNCER<br />
  7. 7. CITOTOXICIDAD<br />Viabilidad<br />Supervivencia<br />Metabólicos<br />Transformación<br />Irritabilidad<br />
  8. 8.  ENSAYO CLONOGÉNICO<br />
  9. 9. OBJETIVOS ESPECÍFICOS :<br />Establecer la densidad celular adecuada para el Ensayo Clonogénico, en MCF-7 y SK-LU-1<br />Establecer el tiempo de incubación adecuado post-tratamiento para el ensayo clonogénico en ambas líneas celulares tumorales humanas utilizadas.<br />Establecer mediante curvas dosis-respuesta, las concentraciones más efectivas a ser usadas como controles positivos en el Ensayo Clonogénico. <br />
  10. 10. MATERIALES Y METODOS<br />Modelos Biológicos<br />MCF-7<br />SK-LU-1<br />
  11. 11.  REALIZACIÓN DEL ENSAYO CLONOGÉNICO<br />DENSIDAD CELULAR<br /> Y<br />TIEMPO DE INCUBACIÓN<br />POST-TRATAMIENTO<br />100 cel/caja<br />200 cel/caja<br />300 cel/caja<br />9 cajas por cada día de incubación<br /> <br />Incuba a 37ºC por (7, 10 y 13 días)<br /> <br /> Incubaron 27 cajas por cada ensayo<br />
  12. 12. Tratamiento con DOX<br /> <br />Incuba a 37ºC por (10 días)<br /> <br /> Incubaron 18 cajas por cada ensayo<br />
  13. 13. RESULTADOS Y DISCUSIÓN<br />DENSIDAD CELULAR<br /> Y<br />TIEMPO DE INCUBACIÓN<br />POST-TRATAMIENTO<br />Gráfico 3.1.Porcentaje de supervivencia celular de células tumorales humanas de adenocarcinoma de mama (MCF-7) a diferentes densidades y tiempos de incubación post-tratamiento. Cada barra representa la media ± la desviación estándar del promedio de tres experimentos por triplicado. **(P&gt;0.01)<br />
  14. 14. DENSIDAD CELULAR<br /> Y<br />TIEMPO DE INCUBACIÓN<br />POST-TRATAMIENTO<br />Grafico 3.2.Porcentaje de supervivencia celular de células tumorales humanas de adenocarcinoma de pulmón (SK-LU-1) a diferentes densidades y tiempos de incubación post-tratamiento. Cada barra representa la media ± la desviación estándar del promedio de tres experimentos por triplicado.<br />
  15. 15. TRATAMIENTO CON DOX<br />Grafico 3.3. Estandarización de la dosis de Doxorrubicina como control positivo en células MCF-7 (Cáncer de mama). Cada barra representa la media ± la desviación estándar del promedio de tres experimentos por triplicado. Se indica el error estándar en cada caso. *(P&lt;0.05) **(P&lt;0.01)<br />
  16. 16. Gráfico 3.4Estandarización de la dosis de Doxorrubicina como control positivo en células SK-LU-1 (Cáncer de pulmón). Cada barra representa la media ± la desviación estándar del promedio de tres experimentos por triplicado. Se indica el error estándar en cada caso.**(P&gt;0.01) *** (P&lt;0.001).<br />
  17. 17. CONCLUSIONES<br />Al establecer la densidad celular en las líneas celulares tumorales MCF-7 y SK-LU-1 para la aplicación del ensayo clonogénico, se determino que la densidad más adecuada sea 200 células/caja<br /> <br />Se determinó que el tiempo mas apropiado para la aplicabilidad de nuestro ensayo para ambas líneas celulares fuera 10 días de incubación.<br /> <br />En nuestro ensayo se comprobó que las dosis elegidas como control estarían entre (0,05 y 0.1ug/ml) para las células SK-LU-1 y para la línea MCF-7 la dosis 0.1ug/ml.<br />
  18. 18. Gracias..<br />

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