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Presentacion de monografia electroforesis

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Presentacion de monografia electroforesis

  1. 1. ELECTROFORESIS + + - - + INTEGRANTES:  ANTON HEREDIA JUAN VICTOR  ESTRADA ROMERO JEAN ANTONY  SERRANO CAJO LUIS ANGEL 1
  2. 2. 21/05/2014 2 domingo,20 de setiembre de 2009
  3. 3. CONJUNTO DE TECNICAS MEDIANTE EL CUAL LAS MOLECULAS SE SEPARAN UNAS DE OTRAS EN GRADIENTES DE POTENCIAL ELECTRICO, DEPENDIENDO DE SUS CARGAS NETAS, TAMAÑOS Y FORMAS, PERO INDEPENDIENTEMENTE DEL MEDIO CONDUCTOR. 3
  4. 4. TIPOS DE ELECTROFORESIS 4
  5. 5. 21/05/2014 5 domingo,20 de setiembre de 2009
  6. 6. ELECTROFORESIS DE ZONA Para llevar a cabo una separación electroforética zonal se necesitan: una fuente de tensión (o de alimentación) que proporciona el campo eléctrico Mediante dos electrodos, positivo (ánodo) y negativo (cátodo), entre los que se establece una diferencia de potencial. 21/05/2014 6 domingo,20 de setiembre de 2009
  7. 7. ELECTROFORESIS DE ZONA 21/05/2014 7 domingo,20 de setiembre de 2009
  8. 8. INMUNOELECTRO- FORESIS Es una combinación de una electroforesis en gel de agar (o agarosa) seguida de una inmunodifusión. Estas no son idénticas para todas las proteínas presentes en una muestra. 21/05/2014 8 domingo,20 de setiembre de 2009
  9. 9. INMUNOELECTROFORESIS 21/05/2014 9 domingo,20 de setiembre de 2009
  10. 10. EN GELES DE POLIACRILAMIDA La electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE, del inglés PolyAcrylamide Gel Electrophoresis) se utiliza mayoritariamente para la separación de proteínas, aunque también es útil para ácidos nucleicos. 21/05/2014 10 domingo,20 de setiembre de 2009
  11. 11. 21/05/2014 11 domingo,20 de setiembre de 2009
  12. 12. ELECTROENFOQUE El electroenfoque (E.E.F) es un tipo particular de electroforesis en la que los compuestos anfóteros (esencialmente se usa para el análisis de proteínas) se separa según su punto isoeléctrico, pI (pH al cual su carga neta es nula), en una gradiente continuo de PH. 21/05/2014 12 domingo,20 de setiembre de 2009
  13. 13. BIDIMENCIONAL La Electroforesis bidimensional es una sucesión de dos electroforesis distintas (o en distintas condiciones), realizadas sobre una misma muestra. En la primera de ellas (primera dimensión) se separan los componentes de la muestra según un criterio (carga, o tamaño, o pI), y en la segunda (segunda dimensión) según un parámetro distinto al anterior. 21/05/2014 13 domingo,20 de setiembre de 2009
  14. 14. BIDIMENCIONAL 21/05/2014 14 domingo,20 de setiembre de 2009
  15. 15. EN ACIDOS NUCLEICOS La electroforesis de ácidos nucleicos es el método habitual para separar, identificar y purificar moléculas o fragmentos de ADN Y ARN. Abarca aplicaciones tan diversas como la determinación de la estructura primaria (secuencia de nucleótidos) de un segmento de ADN, la separación de cromosomas enteros, o la identificación de las regiones de unión de proteínas al ADN. 21/05/2014 15 domingo,20 de setiembre de 2009
  16. 16. EN ACIDOS NUCLEICOS 21/05/2014 16 domingo,20 de setiembre de 2009
  17. 17. EN GELES DE AGAROSA Se trata del método más común de ADN. Pero también es un método habitual para su purificación y obtención. Las agarosas disponibles comercialmente presentan una amplia gama de grados de pureza. La presencia de polisacáridos sulfatados, contaminantes de algunas agarosas, pueden ser perjudicial. Tales polisacáridos son inhibidores de las enzimas con las que va a tratarse el ADN purificado en la electroforesis (polimerasa, ligadas, endonucleasas de restricción). 21/05/2014 17 domingo,20 de setiembre de 2009
  18. 18. EN GELES DE AGAROSA 21/05/2014 18 domingo,20 de setiembre de 2009
  19. 19. DE CAMPO PULSANTE Las electroforesis descritas hasta ahora permiten separar fragmentos de ADN de hasta 20 Kb, incluso se pueden separar fragmentos de hasta 50 Kb en geles de agarosa de muy pequeña concentración. Esta nueva electroforesis logra la separación de fragmentos de varios cientos de kb. 21/05/2014 19 domingo,20 de setiembre de 2009
  20. 20. CROMATOGRAFIA 21/05/2014 20 domingo,20 de setiembre de 2009
  21. 21. ¿QUE ES CROMATOGRAFÍA? 21/05/2014 21 domingo,20 de setiembre de 2009
  22. 22. Actualmente, bajo la denominación de cromatografía se engloban los procesos en los que los componentes de una mezcla, disueltos en una fase móvil, se van desplazando con diferente velocidad a través de una fase estacionaria. La adecuada elección de estas fases puede hacer que tales diferencias se traduzcan en una separación efectiva de los solutos, a la vez que estos pueden identificarse atendiendo a su particular velocidad de avance. 21/05/2014 22 domingo,20 de setiembre de 2009
  23. 23. TIPOS DE CROMATOGRAFIA 21/05/2014 23 domingo,20 de setiembre de 2009
  24. 24. 21/05/2014 24 domingo,20 de setiembre de 2009
  25. 25. CROMATOGRAFIA EN PAPEL Es básicamente una cromatografía donde la fase estacionaria es el agua retenida (absorbida) entre las fibras de celulosa de una hoja de papel. También es posible realizar estas cromatografías en sentido descendente, en cuyo caso el desplazamiento de la fase móvil será el resultado de la acción capilar más de la gravedad. Actualmente, la cromatografía en papel se utiliza poco y ha sido ampliamente reemplazada por la cromatografía en capa fina. No obstante, todavía se utiliza como una poderosa herramienta pedagógica. 21/05/2014 25 domingo,20 de setiembre de 2009
  26. 26. CROMATOGRAFIA EN PAPEL 21/05/2014 26 domingo,20 de setiembre de 2009
  27. 27. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIOIÓNICO En este tipo de cromatografía la fase estacionaria tiene grupos cargados que interaccionan electrostáticamente con iones de signo contrario de la fase móvil. Por tanto, la principal diferencia entre los distintos intercambiadores de iones será la naturaleza de sus grupos cargados. 21/05/2014 27 domingo,20 de setiembre de 2009
  28. 28. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO 21/05/2014 28 domingo,20 de setiembre de 2009
  29. 29. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Este modo cromatográfico se puede considerar como una optimización de la cromatografía en papel. La idea subyacente es la misma: hacer avanzar, por capilaridad, una fase móvil sobre una fase estacionaria plana, de forma que los solutos de la muestra aplicadas se separen por su diferencia. Tipos: cromatografia en capa fina ascendente y descendente. 21/05/2014 29 domingo,20 de setiembre de 2009
  30. 30. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA 21/05/2014 30 domingo,20 de setiembre de 2009
  31. 31. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA En este modo cromatográfico la fase estacionaria se dispone como el relleno de un recipiente cilíndrico, de vidrio, plástico o metal, abierto por ambos extremos, que se denomina columna. Dicho relleno, también llamado lecho cromatográfico, ha de tener una estructura porosa a fin de que pueda fluir la fase móvil. El flujo estará propiciado por la acción de la gravedad o por sistemas de bombeo de alta presión (cromatografía líquida de alta resolución). 21/05/2014 31 domingo,20 de setiembre de 2009
  32. 32. CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA 21/05/2014 32 domingo,20 de setiembre de 2009
  33. 33. CROMATOGRAFÍA CONVENCIONAL Bajo el nombre de cromatografía convencional se engloban todas las cromatografías en columna llevadas a cabo a baja presión; aquéllas en las que el flujo de la fase móvil es propiciado por la simple acción de la gravedad o por el empleo de sencillos sistemas de bombeo. La cromatografía convencional cubre una importante misión en el terreno preparativo; por ello se la conoce también como cromatografia preparativa. Permite la separación de mezclas con volúmenes considerables (solutos en cantidades que van desde los miligramos a los gramos). Esto es una apreciable ventaja en Bioquímica, donde con frecuencia es preciso procesar grandes cantidades de muestra (por ejemplo: homogeneizados, medios de cultivo, etc.). 21/05/2014 33 domingo,20 de setiembre de 2009
  34. 34. CROMATOGRAFÍA DE PENETRABILIDAD Éste es el más simple, conceptual y metodológicamente, de todos los tipos de cromatografía. El nombre que se le ha dado es una propuesta más entre las muchas existentes; algunas de ellas son: cromatografía de filtración en gel, cromatografía de permeación en gel, cromatografía de tamizado molecular y cromatografía de exclusión por tamaño. Cuando este tipo de cromatografía se lleva a cabo en sistemas de alta presión, parece que existe un consenso en denominarla como cromatografía de exclusión por tamaño. 21/05/2014 34 domingo,20 de setiembre de 2009
  35. 35. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD En esencia la cromatografía de afinidad se basa en anclar covalentemente a un soporte cromatográfico uno de los componentes de tales sistemas biológicos. Si el segundo componente viaja en la fase móvil, y ambos están funcionalmente activos, se producirá su unión específica; es decir, su retención en la columna. De esta forma se podrán purificar biomoléculas a partir de mezclas muy complejas, ya que el resto de solutos pasarán de largo y podrán ser lavados de la columna. 21/05/2014 35 domingo,20 de setiembre de 2009
  36. 36. CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD 21/05/2014 36 domingo,20 de setiembre de 2009
  37. 37. CROMATOGRAFIA SOBRE HIDROXIAPATITO El hidroxiapatito es una forma cristalina de fosfato cálcico que, convenientemente pulverizada, puede emplearse como fase estacionaria. Dos de sus principales campos de aplicación son la purificación de anticuerpos monoclonales y la separación de diferentes formas de DNA. Así, es posible separar mediante este tipo de cromatografía el DNA desnaturalizado del nativo, o el DNA de cadena sencilla del DNA de doble cadena; incluso es posible separar el DNA superenrrollado de las dobles hélices lineales. 21/05/2014 37 domingo,20 de setiembre de 2009
  38. 38. CROMATOGRAFÍA DE GASES En esta técnica de separación, la muestra se volatiliza y posteriormente es inyectada en una columna cromatográfica. El proceso de elución es llevado a cabo por la acción de un gas inerte (fase móvil), cuya única función es la de transportar la muestra a través de la columna. En función de la naturaleza de la fase estacionaria, la cromatografía de gases puede ser de dos tipos: - Cromatografía gas- líquido (GLC). - Cromatografía gas-sólido (GSC). 21/05/2014 38 domingo,20 de setiembre de 2009
  39. 39. CROMATOGRAFÍA DE GASES 21/05/2014 39 domingo,20 de setiembre de 2009
  40. 40. FIN… 21/05/2014 40 domingo,20 de setiembre de 2009

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