Cromatografía de intercambio iónico

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Cromatografía de intercambio iónico

  1. 1. Intercambio iónico Exclusión por tamaño De gases
  2. 2. CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
  3. 3. LA CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO Es un proceso que permite la separación de iones y moléculas polares basado en las propiedades de carga de las moléculas. Es usada a menudo en purificación de proteínas, análisis de agua o control de calidad.
  4. 4. PRINCIPIOS. La fase estacionaria muestra en la superficie grupos funcionales iónicos que interactúan con iones de carga opuesta del analito. Este tipo de cromatografía a su vez se divide en dos:
  5. 5.  Cromatografía de intercambio catiónico: Retiene cationes cargados positivamente debido a que la fase estacionaria muestra un grupo funcional cargado negativamente, como un fosfórico. Cromatografía de intercambio aniónico: Retiene aniones usando grupos funcionales cargados positivamente, como un catión de amonio cuaternario
  6. 6. Intercambio cationico. La matriz solida tiene grupos cargados negativamente. En la FM las proteínas con carga positiva neta migran mas lento que las negativas
  7. 7. CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN POR TAMAÑO
  8. 8.  Separa proteínas según su tamaño. Las proteinas de mayor tamaño emergen de la columna antes que las pequeñas La fase solida consiste en pequeñas perlas, particulas que contienen poros de tamaño calibrado.
  9. 9. Las proteínas de mayor tamaño no pueden entrar en las cavidadespor lo que toman el camino mas corto y rápido a través de la columna rodeando las partículas por el exterior.Las proteínas mas pequeñas penetran en las cavidades y por lo tanto migran mas lentamente a través de la columna.
  10. 10. CROMATOGRAFÍA DE GASES
  11. 11.  una técnica cromatográfica en la que la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatográfica Su única función es la de transportar el analito a través de la columna.
  12. 12. Existen dos tipos de cromatografía de gases : la cromatografía gas-sólido la cromatografía gas-líquido
  13. 13. COMPONENTES La GC se lleva a cabo en un cromatógrafo de gases. Éste consta de diversos componentes como el gas portador, el sistema de inyección de muestra, la columna (generalmente dentro de un horno), y el detector.
  14. 14. GAS PORTADOR El gas portador cumple básicamente dos propósitos: Transportar los componentes de la muestra Crear una matriz adecuada para el detector.
  15. 15. CONDICIONES DEL GAS: Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria) Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa Fácilmente disponible y puro Económico Adecuado al detector a utilizar
  16. 16. SISTEMA DE INYECCIÓN DE LA MUESTRA La inyección de muestra es un apartado crítico, ya que se debe inyectar una cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma (como un "tapón de vapor") que sea rápida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida.
  17. 17. TEMPERATURA La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a depender el grado de separación de los diferentes analitos. Para ello, debe ajustarse con una precisión de décimas de grado. Dicha temperatura depende del punto de ebullición del analito o analitos, como también la máxima temperatura de funcionamiento de la columna (fase estacionaria), y por lo general se ajusta a un valor igual o ligeramente superior a él.
  18. 18. CARACTERÍSTICAS DE LOS DETECTORES: Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisión cuándo sale analito y cuando sale sólo el gas portador. Tienen sensibilidades entre 10-8 y 10-15 g/s de analito. Respuesta lineal al analito con un rango de varios órdenes de magnitud. Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida. Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo desde temperatura ambiente hasta unos 350-400 °C, temperaturas típicas trabajo. Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de analito debe dar salidas de señal iguales. Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores inexpertos. Respuesta semejante para todos los analitos, o Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido número de analitos.

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