Ebastine mengalami metabolisme panjang oleh enzim sitokrom P450 di hati manusia untuk membentuk metabolit hidroksi dan dealkilebastine, kemudian metabolit lanjutan carebastine. Studi menunjukkan bahwa CYP2J2 berperan utama dalam hidroksilasi ebastine, sedangkan CYP3A4 berperan utama dalam dealkilasi ebastine dan metabolitnya. Temuan ini berguna untuk memahami interaksi obat ebastine in vivo.

1. Karakterisasi Ebastine, Hydroxyebastine, dan Carebastine Yang
Dimetabolisme Oleh Mikrosom Hati Manusia dan Ekspresi Enzim Sitokrom
P450: Peran Utama CYP2J2 dan CYP3A
Abstrak
Ebastine mengalami metabolisme yang panjang untuk membentuk dealkylebastine dan
hydroxyebastine. Hydroxyebastine selanjutnya dimetabolisme menjadi carebastine. Meskipun
CYP3A4 dan CYP2J2 terlibat dalam proses dealkylation N-ebastine dan hidroksilasi, enzim
katalisator subsequen metabolik selanjutnya (konversi hydroxyebastine menjadi desalkylebastine
dan carebastine) belum teridentifikasi. Oleh karena itu, kami menggunakan mikrosom hati
manusia (HLMs) dan ekspresi sitokrom P450 (P450s) untuk mengkarakterisasi metabolisme
ebastine dan metabolitnya, yakni hydroxyebastine dan carebastine. Dalam HLMs, ebastine
dimetabolisme menjadi dealkyl-, hidroksi-, dan carebastine; hydroxyebastine menjadi dealkyl-
dan carebastine, dan carebastine menjadi dealkylebastine. Dari 11 cDNA menyatakan P450s,
CYP3A4 adalah enzim katalisator utama N-dealkylation dari ebastine, hydroxyebastine, dan
carebastine menjadi dealkylebastine [Intrinsik klirens (CLint) = masing-masing 0,44, 1,05, dan
0,16 ml / menit / pmolP450]. Ebastine dan hydroxyebastine juga dealkylasi menjadi
desalkylebastine sampai batas tertentu oleh CYP3A5. Hidroksilasi ebastine menjadi
hydroxyebastine dimediasi oleh CYP2J2 (masing-masing 0,45 ml / menit / pmol P450, 22,5-dan
7,5 kali lipat lebih tinggi dari itu untuk CYP3A4 dan CYP3A5), sedangkan CYP2J2 dan
CYP3A4 memberikan kontribusi terhadap pembentukan carebastine dari hydroxyebastine.
Temuan ini didukung oleh penghambatan kimia dan studi analisis kinetik di mikrosom hati
manusia. CLint dari hydroxyebastine jauh lebih tinggi daripada ebastine dan carebastine, dan
carebastine adalah metabolit yang lebih stabil daripada ebastine dan hydroxyebastine. Sebagai
kesimpulan, menunjukkan bahwa kedua CYP2J2 dan CYP3A memainkan peran penting dalam
metabolisme berurutan, ebastine: dealkylation dari ebastine dan metabolitnya terutama dikatalisis
oleh CYP3A4, sedangkan reaksi hidroksilasi preferentially dikatalisis oleh CYP2J2. Data ini
akan sangat berguna untuk memahami dan interaksi farmakokinetik obat ebastine in vivo.
Ebastine, sebuah histamin ampuh dan selektif antagonis reseptor H1-, generasi kedua dari
antihistamin nonsedating tapi dengan sifat tanpa antikolinergik dan antiserotonergic (Llupia et
al., 2003). Ebastine mengalami metabolisme panjang berurutan dalam hati (Hashizume et al.,
1998, 2001). Metabolit primer utama yang diidentifikasi pada manusia hidroksi-dan
desalkylebastine, dan hydroxyebastine selanjutnya dimetabolisme menjadi carebastine. Studi
invitro menunjukkan bahwa pembentukan desalkyl-dan hydroxyebastine dari ebastine masing-
masing dikatalisis oleh CYP3A4, dan CYP2J2 (Hashizume et al., 2002). Enzim spesifik sitokrom
P450 (P450s) yang terlibat dalam hidroksi-dan proses metabolisme carebastine belum
diidentifikasi sejauh ini, meskipun beberapa informasi dapat diperoleh dari publikasi
farmakokinetik ebastine. Setelah pemberian oral pada hewan percobaan dan manusia, ebastine
hampir sepenuhnya dimetabolisme dengan prinsip farmakologi aktif, metabolit terkarboksilasi
(carebastine), dan metabolit tidak aktif lainnya (desalkylebastine) (Yamaguchi et al, 1994;.
Rohatagi et al, 2001.). Nilai Cmax dari hydroxyebastine, metabolit utama ebastine in vitro,

2. adalah sekitar 50-kali lipat lebih rendah daripada carebastine secara in vivo (Kang et al., 2004).
Sebuah studi terbaru oleh Chaikin et al. (2005) telah melaporkan bahwa ketokonazol, inhibitor
poten CYP3A4, dapat mengurangi clearance ebastine, menyebabkan akumulasi ebastine, dengan
sedikit efek pada farmakokinetik carebastine. Namun, karena mereka tidak mengukur perubahan
metabolit intermedietnya, hydroxyebastine, masih terbuka untuk pertanyaan yang isoform P450
dapat berkontribusi untuk pembentukan carebastine. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mengidentifikasi dan mengkarakterisasi secara in vitro kinetik isoform P450 yang bertanggung
jawab dalam proses metabolisme ebastine dan metabolitnya. Informasi dari studi ini akan
memungkinkan pemahaman yang lebih baik dari faktor-faktor yang mempengaruhi
farmakokinetik dan interaksi obat ebastine.
Bahan dan Metode
Kimia dan Reagen. Ebastine, desalkylebastine, hydroxyebastine, dan carebastine
disumbangkan oleh Almirall Prodesfarma, SA (Barcelona, Spanyol). Astemizol, coumarin,
dietilditiokarbamat, furafylline, ketoconazole, quinidine, sulfaphenazole, terfenadine, thio-Tepa,
β-nikotinamida adenin dinukleotida fosfat, EDTA, MgCl2, glukosa 6-fosfat, dan glukosa-6-
fosfat dehidrogenase dibeli dari Sigma-Aldrich ( St Louis, MO). Pelarut grade HPLC (Fisher
Scientific Co, Pittsburgh, PA) dan bahan kimia lainnya dengan kualitas tertinggi yang tersedia.
Pole (H161) atau single-donor (H003, H056, dan HK34) mikrosom hati manusia (HLMs), dan 11
manusia yang berbeda isoform P450 rekombinan, 1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1,
2J2, 3A4 , dan 3A5 (Supersomes), dibeli dari BD Gentest (Woburn, MA). P450s manusia 2A6,
2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2E1, 2J2, 3A4, dan 3A5 yang coexpressed dengan P450 reduktase
manusia dan sitokrom b5, namun, P450s 1A2 dan 2D6 hanya coexpressed dengan P450
reduktase manusia. Produsen yang disertakan informasi mengenai konsentrasi protein dan konten
isoformP450.
Metabolisme Ebastine dan Metabolit nya di mikrosom hati Manusia atau Ekspresi P450s.
Kondisi optimal untuk inkubasi mikrosomal ditentukan dalam kisaran linier untuk
pembentukan metabolit dari ebastine, hydroxyebastine, dan carebastine. Tingkat pembentukan
metabolit yang sebanding dengan waktu inkubasi hingga 60 menit dan konsentrasi protein
sampai dengan 1,0 mg / ml pada 30 menit. Dalam semua percobaan, ebastine, hydroxyebastine,
dan carebastine dilarutkan dan diencerkan dengan metanol serial dengan konsentrasi yang
dibutuhkan; pelarut kemudian dihilangkan dengan penguapan sampai kering, di bawah tekanan
berkurang dengan SpeedVac AES2010 (Thermo Electron Corporation, Waltham, MA).
Campuran inkubasi, yang mengandung baik ml 25 dari mikrosom (2,5 mg protein / ml
stok, disiapkan dari tiga persiapan hati manusia yang berbeda mikrosomal) atau 25 ml cDNA-

3. diekspresikan pH P450 (diencerkan sampai 200 pmol / ml dengan buffer fosfat, 7.4 ) dan
berbagai konsentrasi ebastine, hydroxyebastine, atau carebastine (0-100 M) dilarutkan dalam 100
pM buffer fosfat (pH 7,4) dan pemanasan awal selama 5 menit pada 37 ° C. Reaksi dimulai
dengan menambahkan NADPH-sistem regenerasi (1,3 mM β-nikotinamida adenin dinukleotida
fosfat, 3,3 mM glukosa 6-fosfat, 3,3 mM MgCl2, dan 1,0 U / ml glukosa-6-fosfat dehidrogenase)
dan selanjutnya diinkubasi (volume akhir dari 250 ml) selama 30 menit pada 37 ° C dalam
penangas air gemetar. Reaksi dihentikan dengan menempatkan tabung inkubasi pada es dan
dengan segera menambahkan 100 ml asetonitril. Setelah menambahkan standar internal
(terfenadine, 1 M), campuran disentrifugasi pada 1000g selama 5 menit pada suhu 4 ° C dan
alikuot dari supernatan disuntikkan ke dalam sistem LC / MS / MS.
Studi Penghambatan Kimia dengan Mikrosom Hati Manusia.
HLMs disatukan (H161, gabungan dari 27 mikrosom individu) dan inhibitor P450-
selektif yang ditambahkan ke campuran inkubasi mirip dengan yang dijelaskan di atas. Ebastine,
hydroxyebastine, dan carebastine konsentrasi yang 5 pM. Isoform P450 inhibitor selektif-
digunakan adalah furafylline (10 M) untuk CYP1A2, coumarin untuk CYP2A6 (100 M), thio-
Tepa untuk memberi sinyal pada CYP2B6 (5 M), sulfaphenazole untuk CYP2C9 (10 M), S-
benzylnirvanol untuk CYP2C19 (1 M ), quinidine untuk CYP2D6 (10 M), dietilditiokarbamat
untuk CYP2E1 (10 M), dan ketokonazol untuk CYP3A (1 M). Astemizol (50 M), substrat
CYP2J2 dan CYP3A4, digunakan sebagai inhibitor kompetitif. Kecuali untuk penambahan
isoform P450-selektif inhibitor, semua kondisi inkubasi lainnya serupa dengan yang dijelaskan
sebelumnya (Shin et al., 1999, 2002). Setelah menambahkan standar internal dan sentrifugasi
seperti dijelaskan di atas, alikuot dari supernatan dianalisis pada sistem LC / MS / MS.
Prosedur Analitis.
Konsentrasi desalkyl-, hidroksi-, dan carebastine diukur oleh LC / MS / MS (Kang et al,
2004.). Sistem ini terdiri dari sebuah API 3000 LC / MS / MS sistem (Terapan Biosystems,
Foster City, CA) dilengkapi dengan antarmuka ionisasi elektrospray digunakan untuk
menghasilkan ion positif [M + H] +. Senyawa-senyawa dipisahkan pada kolom fase terbalik
(Luna C18, 2,0 mm × 50 mm id, 3-pM ukuran partikel; Phenomenex, Torrance, CA) dengan fase
gerak asetonitril isokratik terdiri dari dan air (40/60 v / v ) mengandung asam formiat 0,1%. Fase
gerak dielusi menggunakan HP 1100 pompa seri (Agilent, Wilmington, DE) sebesar 0,2 ml /
menit.
Turboion Spary Interface dioperasikan dalam modus ion positif di 5500 V dan 375 ° C.
Kondisi operasi ditentukan sebagai berikut: aliran gas nebulizing, 1,04 l / menit; gas tambahan
aliran, 4,0 l / menit; tirai aliran gas, 1,44 l / min; tegangan lubang, 40 V; tegangan cincin, 350 V;
gas tabrakan ( nitrogen) tekanan, 3,58 × 10-5 Torr. Transisi massa digunakan untuk kuantisasi
hydroxyebastine, carebastine, dan terfenadine adalah m / z 486,7 167,1 →, 500,6 167,1 →, dan

4. 472,7 436,0 → masing-masing (tabrakan energi 40 eV): bahwa untuk desalkylebastine adalah
m / z 268,4 167,1 → (tabrakan energi 15 eV). Data analitis diproses oleh software Analis (versi
1.2; Terapan Biosystems).
Analisis Data
Hasil dinyatakan sebagai ± S.D. estimasi yang diperoleh dari tiga persiapan yang berbeda
microsome hati dalam duplikasi percobaan . Parameter kinetik jelas ebastine, hydroxyebastine,
dan metabolisme carebastine ditentukan oleh fitting data kinetik unweighted dari HLMs dan
P450s diungkapkan ke persamaan satu-enzim Michaelis-Menten atau model (Hill) persamaan
sigmoidal [V = Vmax • [S] n / (KNM + [S] n)], atau model inhibisi substrat [V = Vmaks / (1 +
km / [S] + [S] / ksi)]. Parameter dihitung adalah tarif maksimum pembentukan metabolit
(Vmax), Michaelis konstan (Km), bersihan intrinsik (Clint = Vmaks / Km), Hill koefisien (n),
dan inhibisi substrat konstan (KSI). Persentase inhibisi dihitung dengan rasio laju pembentukan
metabolit dengan dan tanpa inhibitor spesifik. Perhitungan dilakukan dengan menggunakan
perangkat lunak WinNonlin (Pharsight, Mountain View, CA).
Hasil dan Diskusi
Kami berusaha mengkarakterisasi rinci metabolisme in vitro ebastine dan metabolitnya
menggunakan enzim P450 hati manusia seperti diringkas dalam Gambar. 1. Kami telah
menunjukkan bahwa: 1) pertama, ebastine mengalami hidroksilasi oksidatif dari kelompok metil
dari bagian tert-butil dari ebastine menjadi hydroxyebastine dan dealkylation di ikatan alisiklik
yang menempel dengan Piperidina nitrogen untuk membentuk desalkylebastine, dan
metabolisme sekunder menjadi carebastine, 2) rute utama dari metabolisme ebastine yang
dikatalisis oleh CYP2J2,, CYP3A4 dan CYP3A5, dan 3) CYP2J2 selaku kinetika atipikal. Data
ini harus memberikan basis ilmiah di mana untuk membangun studi klinis terfokus yang akan
membantu dalam memahami farmakokinetik dan faktor-faktor yang mempengaruhi keberhasilan
terapi farmakogenetik ebastine, interaksi obat, dan keamanan.
Pembentukan metabolit mengikuti kinetika sederhana Michaelis-Menten dengan 0-
100uM ebastine, hydroxyebastine, atau carebastine, menunjukkan keterlibatan enzim tunggal
atau lebih dari satu enzim dengan afinitas yang sama (Gambar 2). Sebuah profil kinetik serupa
telah diamati dengan hidroksilasi ebastine di mikrosom usus manusia (Hashizume et al., 2002)
dan CYP2J2-dimediasi hidroksilasi terfenadine pada rekombinan CYP2J2 (Parikh et al., 2003).
Parameter kinetik dirangkum dalam Tabel 1. Pembentukan carebastine dari hydroxyebastine oleh
rCYP2J2 menunjukkan penghambatan substrat (Gambar 3), tidak seperti data yang diperoleh
dalam HLMs kinetik, yang ditandai dengan persamaan Michaelis-Menten hiperbolik (Gambar 2).
Perbandingan kebaikan-of-fit nilai yang dihasilkan dari data ini menunjukkan bahwa
penghambatan model enzim substrat kinetik disediakan lebih cocok daripada model lain. Plot
Eadie-Hofstee terkait menunjukkan "hook" di wilayah atas plot ini (Gambar 3B, inset), yang

5. merupakan karakteristik dari inhibisi substrat. Km, Vmaks, dan Ksi diestimasi dari data tersebut,
masing-masing, 0,75 pM, 9,86 pmol / menit / pmol P450, dan 5,55 pM (Tabel 2). Profil substrat
serupa penghambatan telah diamati sebelumnya dengan memberi sinyal pada pembentukan
CYP2B6-dimediasi 8,14-dihydroxyefavirenz (Ward et al., 2003) dan CYP3A-dimediasi
hidroksilasi triazolam (Schrag dan Wienkers, 2001), yang sugestif dari beberapa substrat-
mengikat situs ( atau beberapa daerah dalam sebuah situs aktif tunggal). Untuk pengetahuan kita,
ini adalah laporan pertama dari CYP2J2-dimediasi inhibisi substrat. Meskipun pengamatan ini
mungkin tidak memiliki relevansi klinis karena konsentrasi yang diharapkan dari
hydroxyebastine dalam plasma manusia setelah mengambil dosis biasa ebastine (Kang et al.,
2004) jauh lebih rendah daripada konstanta inhibisi substrat kita diperoleh di sini, hal itu
mungkin menawarkan wawasan ke karakteristik enzim.
Gb.1 Jalur metabolisme ebastine di mikrosom hepar manusia
Gb.2 Kinetika untuk pembentukan metabolit dari ebastine (A), hydroxyebastine (B), dan
carebastine (C) dalam tiga mikrosom hati manusia. Peningkatan konsentrasi substrat (0-
100 M) diinkubasi dengan mikrosom hati manusia dan sistem yang menghasilkan NADPH

6. pada 37 ° C selama 30 menit. Kecepatan (pmol / menit / mg protein) versus konsentrasi
substrat sangat cocok persamaan Michaelis-Menten (lihat "Analisis Data" di bawah Bahan
dan Metode). Setiap titik mewakili rata-rata yang diperoleh dari tiga mikrosom hati
manusia yang berbeda.
Kami menyediakan bukti bahwa hidroksilasi ebastine dominan dikatalisis oleh CYP2J2.
Pertama, pembentukan tingkat hydroxyebastine yang potently dihambat (~ 70%) dengan
astemizol, sebuah substrat CYP2J2 dan CYP3A4, dan sedikit dihambat oleh ketokonazol,
inhibitor selektif CYP3A-kuat (Gambar 4A). Kedua, menyatakan CYP2J2 manusia
dimetabolisme ebastine untuk hydroxyebastine, sedangkan isoform P450 yang lain tidak
(Gambar 5A). Kami juga mencatat bahwa rekombinan CYP3A4 manusia terbentuk
hydroxyebastine dari ebastine, tetapi kontribusi dari isoform ini untuk metabolisme ebastine
muncul kecil: 1) CLint untuk pembentukan hydroxyebastine oleh CYP3A4 adalah 22,5 kali lipat
lebih rendah dari yang diperoleh di rekombinan CYP2J2 manusia (Tabel 2); dan 2) inhibitor
CYP3A-spesifik (ketoconazole) sedikit terhambat (~ 25%) tingkat pembentukan
hydroxyebastine di HLMs (Gambar 4A). Temuan ini konsisten kualitatif dengan pekerjaan
sebelumnya yang melaporkan bahwa CYP2J2 adalah hidroksilase ebastine dominan dalam
mikrosom usus manusia
Gb.3 Kinetika untuk pembentukan metabolit dari ebastine (A) dan hydroxyebastine (B)
dalam rekombinan CYP2J2 manusia. Peningkatan konsentrasi substrat (0-100 M)
diinkubasi dengan rekombinan CYP2J2 manusia dan sistem yang menghasilkan NADPH
pada 37 ° C selama 30 menit. Kecepatan (pmol / menit / pmol P450) versus ebastine atau
konsentrasi hydroxyebastine sangat cocok persamaan Michaelis-Menten atau substrat
persamaan inhibisi (lihat "Analisis Data" di bawah Bahan dan Metode). Plot Eadie-
Hofstee yang sesuai (kecepatan dibandingkan kecepatan / hydroxyebastine konsentrasi)
yang ditampilkan dalam inset. Setiap titik mewakili rata-rata ± S.D. dari incubations
rangkap tiga.

7. Enzim-enzim hati khusus P450 yang terlibat dalam hidroksi-dan metabolisme carebastine
belum diidentifikasi sejauh ini. Kedua ketokonazol (CYP3A inhibitor) dan astemizol (substrat
CYP2J2 dan CYP3A4) (Matsumoto et al., 2003) nyata menghambat (> 82%) dan pembentukan
desalkylebastine (Gambar 4, B dan C). CYP2J2 rekombinan manusia dan CYP3A4 terbentuk
carebastine dari hydroxyebastine (Gambar 5B). Mirip dengan pembentukan desalkylebastine dari
ebastine, pembentukan desalkylebastine dari hidroksi-dan carebastine dimediasi oleh enzim
CYP3A hanya (Gambar 5). Hasil ini menunjukkan bahwa pembentukan desalkylebastine dari
hidroksi-dan carebastine jelas dimediasi oleh CYP3A, dan hydroxyebastine dioksidasi untuk
carebastine oleh CYP2J2 dan CYP3A4. Ini akan menarik untuk mempertimbangkan enzim yang
bertanggung jawab untuk metabolisme terfenadine alkohol, yang memiliki kesamaan kimia
struktural untuk hydroxyebastine. Terfenadine alkohol juga memiliki dua jalur yang sama
metabolik utama dari karboksilasi dan N-dealkylation. Tidak seperti hydroxyebastine,
karboksilasi dari terfenadine alkohol dilaporkan dikatalisis didominasi oleh CYP3A4 (Ling dkk.,
1995). Namun, penelitian sebelumnya tidak mengevaluasi CYP2J2. Berdasarkan hasil terakhir
(Parikh et al., 2003), yang melaporkan bahwa CYP2J2 merupakan enzim utama yang terlibat
dalam terfenadine (analog struktural dari ebastine) hidroksilasi, kita bisa berspekulasi bahwa
CYP2J2 serta CYP3A4 mungkin terlibat dalam pembentukan asam terfenadine dari terfenadine
alkohol.
Setelah pemberian oral kepada manusia, ebastine hampir sepenuhnya dimetabolisme ke
desalkylebastine (Kang et al, 2004;.. Lasseter et al, 2004). Hal ini konsisten dengan temuan
dalam vitro, yang melaporkan bahwa ebastine didominasi dimetabolisme menjadi hidroksi-dan
dealkylebastine (Hashizume et al., 1998, 2001, 2002). Untuk memperjelas hal ini, kami
melakukan dalam studi metabolisme in vitro ebastine serta metabolitnya, hidroksi-dan
carebastine, menggunakan mikrosom hati manusia. Jarak intrinsik hydroxyebastine jauh lebih
tinggi daripada ebastine dan carebastine (Tabel 1). Rasio kecepatan maksimum dealkylation
(Vmax) dari hydroxyebastine juga lebih tinggi daripada ebastine dan carebastine. Berbeda
dengan hydroxyebastine, carebastine menunjukkan afinitas enzim rendah dan tingkat
metabolisme, sehingga mengakibatkan pembukaan metabolisme relatif rendah. Dalam P450s
mengungkapkan, pembentukan hidroksi-dan desalkylebastine dari ebastine yang dikatalisis
terutama oleh CYP2J2, dan CYP3A4 masing-masing (Tabel 2). Ketika hydroxyebastine
digunakan sebagai substrat, kami menyimpulkan bahwa CYP2J2 dan isoform CYP3A4
bertanggung jawab untuk oksidasi hydroxyebastine, sedangkan CYP3A4 dan CYP3A5
bertanggung jawab untuk pembentukan desalkylebastine. Analisis kinetik menunjukkan bahwa
pembersihan intrinsik hydroxyebastine jauh lebih tinggi daripada ebastine dan carebastine (Tabel
1). Hasil ini memberikan bukti bahwa sekali hydroxyebastine terbentuk, itu mengalami
biotransformasi cepat untuk menghasilkan mobil-dan desalkylebastine. Carebastine tampaknya
relatif metabolik stabil untuk ebastine dan hydroxyebastine, mendukung dalam temuan vivo yang
carebastine merupakan metabolit utama ebastine. Selain itu, penting untuk dicatat,
bagaimanapun, bahwa CYP2J2 juga dinyatakan dalam jaringan ekstrahepatik seperti jantung,
usus, dan ginjal. Oleh karena itu, dalam penelitian in vitro menggunakan jaringan ekstrahepatik
metabolisme seperti mikrosom usus diperlukan untuk menentukan kontribusi jaringan
ekstrahepatik dalam metabolisme ebastine dan metabolitnya.

8. Gb.4 Efek isoform P450-selektif inhibitor pada metabolisme ebastine (A), hydroxyebastine
(B), dan carebastine (C) dengan mikrosom hati manusia. Ebastine, hydroxyebastine, atau
carebastine (5 M) diinkubasi dengan mikrosom hati manusia dikumpulkan di hadapan
berbagai inhibitor. Data yang disajikan sebagai rata-rata ± S.D, determinasi rangkap tiga.
FF, furafylline (10 M); cou, coumarin (100 M); Tepa, thio-Tepa (5 M); SFZ, sulfaphenazole
(10 M); BEN, S-benzylnirvanol (1 M); QND, quinidine (10 M ); DEDC, dietilditiokarbamat
(10 M); KCZ, ketoconazole (1 M); ATZ, astemizol (50 M).
Gb.5 Perwakilan plot pembentukan masing-masing metabolit dari ebastine (A),
hydroxyebastine (B), dan carebastine (C) dengan cDNAmanusia-mengekspresikan isoform
P450. cDNA manusia-mengekspresikan P450s 1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1,
2J2, 3A4, dan 3A5 diinkubasi dengan ebastine 5 pM, hydroxyebastine, atau carebastine.
Data yang ditampilkan adalah rata-rata eksperimen rangkap tiga.

9. Identifikasi CYP2J2 sebagai katalis hidroksilasi ebastine dan hydroxyebastine (Gambar
1) dapat memungkinkan kita untuk menggunakan ebastine untuk menyelidiki sistem enzim.
Meskipun identifikasi daftar pertumbuhan obat klinis penting (Hashizume et al, 2001;.
Matsumoto et al, 2003;.. Parikh et al, 2003) dan zat endogen (Wu et al, 1996;.. Hashizume et al,
2002 ) sebagai substrat dari CYP2J2 in vitro, tetap saja sulit untuk menentukan atau
memprediksi konsekuensi klinis karena tidak tersedianya probe spesifik dan aman untuk
mengukur aktivitas enzim in vivo. Data kami menunjukkan bahwa hidroksilasi ebastine adalah
penanda tertentu dalam reaksi in vitro CYP2J2 dan mungkin memiliki utilitas sebagai alat
fenotip untuk mempelajari peran enzim ini dalam metabolisme obat manusia.