NMP de Coliformes Totales y Fecales

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Fuente:Gaviria,BlancaC.,ManualdePrácticasdeMicrobiologíadeAlimentos,1997,Bogotá,Colombia,CarreradeBacteriologíaPUJ

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NMP de Coliformes Totales y Fecales

  1. 1. PRÁCTICA 8: NUMERO MÁS PROBABLE N.M.P. DE COLIFORMES TOTALES Y FECALESN.M.P. DE COLIFORMES TOTALESMateriales• Diluciones de la muestra• Incubadora a 35°C• Gradilla• Pipetas de 1 mL estériles• Asa bacteriológica• 9 tubos de 150 x 15 mm conteniendo 10 mL de Caldo Bilis Verde Brillante con tubo de fermentación de 70 x 10 mmProcedimiento Inocular de cada una de las diluciones 10-1, 10-2, 10-3, 1 ml a cada uno de 3 tubos conteniendo Caldo Bilis Verde Brillante. Incubar los tubos a 35°C durante 24-48 horas Observar los tubos que presenten producción de gas Comparar en la tabla de N.M.P. e informar como Coliformes Totales por gramo ó ml Puede continuarse con pruebas para Coliformes Fecales.N.M.P. DE COLIFORMES FECALES(PRUEBA DE MACKENZIE)Materiales• Asa bacteriológica• Baño de agua a 44°C• Tubos con 10 mL de Caldo Bilis Verde Brillante con tubos de fermentación• Gradillas• Tubos con Agua de triptona• Reactivo de Indol según KovacProcedimiento De cada tubo positivo en Caldo Bilis Verde Brillante de la Prueba de Coliformes totales, inocular con asa a un tubo con Caldo Bilis Verde Brillante y un tubo con Agua de triptona Incubar a 44°C durante 24 horas Observar la formación de gas en Caldo Bilis Verde Brillante Efectuar prueba de Indol sobre el agua de triptona Los tubos con producción de gas y reacción de Indol positivo, se tienen en cuenta para el reporte como coliformes fecales Comparar en la tabla N.M.P. e informar como Coliformes Fecales por gramo o mililitro.
  2. 2. NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP) DE BACTERIAS, SEMBRANDO TRES TUBOS POR CADA DILUCIÓNNo. de tubos Positivos en cada Límites de confianzadilución NMP/g ó mlDiluciones Infer. Super. Infer. Super.10-1 10-2 10-3 99% 95%0 1 0 3 <1 23 <1 171 0 0 4 <1 28 1 211 0 1 7 1 35 2 271 1 0 7 1 36 2 281 2 0 11 2 44 4 352 0 0 9 1 50 2 382 0 1 14 3 62 5 482 1 0 15 3 65 5 502 1 1 20 5 77 8 612 2 0 21 5 80 8 633 0 0 23 4 177 7 1293 0 1 40 10 230 10 1803 1 0 40 10 290 20 2103 1 1 70 20 370 20 2803 2 0 90 20 520 30 3903 2 1 150 30 660 50 5103 2 2 210 50 820 80 6403 3 0 200 <100 1900 100 14003 3 1 500 100 3200 200 24003 3 2 1100 200 6400 300 4800Fuente: Gaviria, Blanca C., Manual de Prácticas de Microbiología de Alimentos, 1997, Bogotá,Colombia, Carrera de Bacteriología PUJ.

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