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Técnicas histologicas unidad I Anatomía Microsc. y Embr. Veterinarias

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Técnicas histologicas unidad I Anatomía Microsc. y Embr. Veterinarias

  1. 1. BIENVENIDOS…….. Anatomía Microscópica y Embriología Veterinaria
  2. 2. HISTOLOGÍA Y TÉCNICAS HISTOLÓGICAS Objetivos de un estudiante de Medicina Veterinaria Organismos Anatomía Ramas de la Anatomía: Macroscópica y Microscópica
  3. 3. NIVELES DE ORGANIZACIÓN DE LOS ORGANISMOS ANIMALES <ul><li>Átomos </li></ul><ul><li>Moléculas </li></ul><ul><li>Células </li></ul><ul><li>Tejidos </li></ul><ul><li>Órganos </li></ul><ul><li>Sistemas </li></ul>
  4. 5. HISTOLOGÍA <ul><li>Definición </li></ul><ul><li>Importancia </li></ul><ul><li>Métodos o técnicas histológicas: </li></ul><ul><li>Definición </li></ul><ul><li>Tipos: </li></ul><ul><li>Cultivo de células </li></ul><ul><li>Injertos </li></ul><ul><li>Coloración </li></ul><ul><li>Excisión </li></ul><ul><li>Microdisección </li></ul><ul><li>Microincineración </li></ul><ul><li>Fotografía </li></ul><ul><li>Inyecciones </li></ul>
  5. 6. CULTIVO DE CÉLULAS DEFINICIÓN CONDICIONES IDEALES PARA EL CULTIVO DE CÉLULAS: Medio nutritivo pH Medio estéril Temperatura
  6. 7. INJERTOS DEFINICIÓN TIPOS: Autoinjerto Homólogo Heterólogo Isólogo
  7. 8. MÉTODO DE COLORACIÓN DEFINICIÓN COLORANTE SALES SOLUBLES EN AGUA Colorantes con carga ( - )= Ácidos Colorantes con carga ( + )= Básicos
  8. 9. CLASIFICACIÓN DE LOS COLORANTES SEGÚN SU ORIGEN 1. NATURALES: Animal ( Carmín ) Vegetal ( Hematoxilina ) 2. ARTIFICIALES: Pigmentos minerales ( Azul de Prusia ) Derivados anilínicos ( Eosina )
  9. 10. CLASIFICACIÓN DE LOS COLORANTES Según su radical químico Ácidos ( Eosina ) Básicos ( Hematoxilina ) Neutros (Giemsa) Según su afinidad por los componentes celulares: Citoplasmáticos ( Eosina ) Nucleares ( Hematoxilina ) Núcleos Eucromáticos Núcleos Heterocromáticos
  10. 11. TIPOS DE COLORACIONES ORTOCROMÁTICA METACROMÁTICA PROGRESIVA RETRÓGRADA POR IMPREGNACIÓN VITAL Intravital Supravital
  11. 12. MÉTODOS DE COLORACIÓN <ul><li>Coloración de rutina </li></ul><ul><li>Coloraciones especiales </li></ul><ul><li>Histoquímica </li></ul>
  12. 13. <ul><li>DEFINICIÓN </li></ul><ul><li>HEMATOXILINA y EOSINA (H-E) </li></ul>COLORACIÓN DE RUTINA
  13. 14. COLORACIONES ESPECIALES <ul><li>DEFINICIÓN </li></ul><ul><li>TIPOS </li></ul><ul><li>GIEMSA: Frotis sanguíneos </li></ul><ul><li>TRICRÓMICA MALLORY-AZAN: Fibras colágenas (azul) </li></ul><ul><li>TRICRÓMICA DE MASSON: Fibras colágenas (azul) </li></ul><ul><li>GRAM: Bacterias ( + ) violeta ( - ) rosado </li></ul><ul><li>GROCOTT: Hongos (Negro) </li></ul><ul><li>VON KOSSA: Calcio (Negro) </li></ul>
  14. 15. HISTOQUÍMICA <ul><li>DEFINICIÓN </li></ul><ul><li>CLASIFICACION </li></ul><ul><li>Histoquímica enzimática </li></ul><ul><li>Inmunohistoquímica </li></ul>
  15. 16. HISTOQUÍMCA ENZIMÁTICA <ul><li>DEFINICIÓN </li></ul><ul><li>PROCEDIMIENTO </li></ul>TEJIDO + ENZIMA SUSTRATO PRODUCTO INCOLORO PRECIPITADO INSOLUBLE COLOREADO
  16. 17. INMUNOHISTOQUÍMICA <ul><li>DEFINICIÓN </li></ul><ul><li>PROCEDIMIENTO </li></ul>ANTÍGENO ANTICUERPO ANTICUERPO + COLORANTES FLUORESCENTES REACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO
  17. 18. HISTOLOGÍA <ul><li>Definición </li></ul><ul><li>Importancia </li></ul><ul><li>Métodos o técnicas histológicas: </li></ul><ul><li>Definición </li></ul><ul><li>Tipos: </li></ul><ul><li>Cultivo de células </li></ul><ul><li>Injertos </li></ul><ul><li>Coloración </li></ul><ul><li>Excisión </li></ul><ul><li>Microdisección </li></ul><ul><li>Microincineración </li></ul><ul><li>Fotografía </li></ul><ul><li>Inyecciones </li></ul>
  18. 19. Técnica para la preparación de tejidos <ul><li>Técnica de la Parafina </li></ul><ul><li>Técnica de la Celoidina </li></ul><ul><li>Técnica de Congelación </li></ul>
  19. 20. TÉCNICA DE LA PARAFINA DEFINICIÓN PROCEDIMIENTO TÉCNICO <ul><li>Recolección de la muestra </li></ul><ul><li>Fijación </li></ul><ul><li>Lavado </li></ul><ul><li>Deshidratación </li></ul><ul><li>Aclaración </li></ul><ul><li>Inclusión en parafina </li></ul>
  20. 21. 1) RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA BIOPSIA NECROPSIA: Muerte del animal (Natural o Eutanasia) Extracción de los órganos Reducción de las piezas: Tamaño Recolección rápida
  21. 22. 2) FIJACIÓN DEFINICIÓN FIJADOR Tipos: Físicos Químicos
  22. 23. FIJADORES FÍSICOS POR DESECACIÓN POR CALOR Seco Húmedo POR FRÍO POR CONGELACIÓN
  23. 24. FIJADORES QUÍMICOS SIMPLES Formol bufferado al 10% Formol al 4% Alcohol etílico Alcohol metílico Ácido ósmico del 1 al 2 % Oxidantes: Bicloruro de mercurio y potasio Ácido acético Ácido pícrico Ácido crómico
  24. 25. … FIJADORES QUÍMICOS COMPUESTOS Líquido de Bouin Líquido de Zenker Líquido de Helly Líquido de Fleming
  25. 26. … FIJADORES QUÍMICOS VOLUMEN 1:10 CONDICIONES QUE DEBE TENER UN BUEN FIJADOR: Alto poder de penetración Evitar los procesos autolíticos Endurecimiento
  26. 27. 3) LAVADO DURANTE 1 HORA AGUA CORRIENTE
  27. 28. 4) DESHIDRATACIÓN PRINCIPIO TIPO DE ALCOHOL EN GRADOS CRECIENTES DE CONCENTRACIÓN 1 HORA CADA UNO AUTOTECNICÓN
  28. 29. 5) ACLARACIÓN DEFINICIÓN TIPOS DE AGENTES ACLARANTES Xilol Cloroformo Benceno Tolueno 3 PASES 1 HORA CADA PASE
  29. 30. 6) INCLUSIÓN EN PARAFINA INCLUSIÓN: 2 pasos Impregnación o preinclusión Inclusión definitiva (Formación del bloque)
  30. 31. PREPARACIÓN DE LAS LÁMINAS CORTE DEL TEJIDO RECOLECCIÓN DEL CORTE O CINTA ESTUFA (37°C)
  31. 32. CORTE DEL BLOQUE DE PARAFINA DEFINICIÓN MICRÓTOMO CORTES DE LAS CINTAS
  32. 33. RECOLECCIÓN DEL CORTE O PESCA BAÑO DE FLOTACIÓN (37°C) FINALIDAD PESCA
  33. 34. ESTUFA
  34. 35. PROCESO DE COLORACIÓN DESPARAFINACIÓN HIDRATACIÓN TINCIÓN
  35. 36. DESPARAFINACIÓN XILOL 3 PASES 5 MINUTOS c/u
  36. 37. HIDRATACIÓN DEFINICIÓN 5 MINUTOS
  37. 38. COLORACIÓN DE RUTINA DEFINICIÓN PROTOCOLO: Hematoxilina 10´ Lavado con agua 15´ Diferenciar los componentes con alcohol ácido. Virar al color azul sustancias Alcalinas Lavado con agua corriente Eosina acuosa 3 deeps Lavado con agua 15´ Deshidratación 5´ Aclaración 3 pases 5 minutos c/u
  38. 39. MONTAJE Mar-tex Entellán Permount SECADO AL AIRE MICROSCOPIO
  39. 40. HISTORIA DEFINICIÓN CLASIFICACIÓN Según el tipo de luz: Óptico o de Luz Electrónico MICROSCOPIO
  40. 41. MICROSCOPIOS ÓPTICOS propiamente dicho MICROSCOPIOS ÓPTICOS especiales MICROSCOPIOS ÓPTICOS
  41. 42. Microscopio óptico simple Microscopio óptico compuesto Partes: MICROSCOPIO ÓPTICO PROPIAMENTE DICHO
  42. 43. MICROSCOPIOS ÓPTICOS ESPECIALES DE LUZ ULTRAVIOLETA DE FLUORESCENCIA DE CAMPO OSCURO CONTRASTE DE FASE DE LUZ POLARIZADA INTERFERENCIA
  43. 44. MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS De transmisión De barrido De fuerza atómica
  44. 45. … MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS Microscopio Electrónico de Transmisión
  45. 46. … MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS Microscopio Electrónico de Barrido
  46. 47. … MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS Microscopio de Fuerza Atómica
  47. 48. Recomendación Dedícate, al menos, una hora del día para aprender otro idioma, música, arte o practicar algún deporte ……..

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