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Presentación iRNAs - Daniel Salas

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Presentación para ser usada en clase y online

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Presentación iRNAs - Daniel Salas

  1. 1. INTERFERENCIA DE LAEXPRESIÓN GÉNICA CON RNATema 1
  2. 2. RNA Interferencia (iRNA)Fragmentos de RNA que se unen al RNAminterrumpiendo su traducción silenciando eltranscripto.
  3. 3. Formación iRNA1. Generación del iRNA.2. Efector iRNA: Interrupción del RNAm.
  4. 4. Generación de iRNAs– Componentes:Proteina Descripción FunciónDICER Enzima RNAasa III, procesadsRNA en siRNA de 25 pares debases (pb), con dominio helicasa,dominio catalítico y de unión adsRNA.Clivar la cadena de RNAformadora de iRNAs.RISC Dos proteínas de unión al RNA,RNA/DNA helicasa, Factor deiniciación de traducción RdRP(Proteína transmembránica).Amplificar las secuencias deiRNA formadas.Transportador del iRNA hastatarget RNAm.DROSHA Enzima RNAasa III clase II. Corta la molécula de miRNA.Regulariza los genes deinteracción RISC/iRNA.Inducción de la clivación deltarget RNAm.
  5. 5. Generación de iRNA por acción de la DICER y amplificación de los fragmentos por RISC.
  6. 6. Interrupción de la expresión de RNAm por siRNA transportada por RISC.
  7. 7. Interrupción de la expresión de RNAm por siRNA transportada por RISC.
  8. 8. Tipos de iRNA1. siRNA.2. shRNA.3. miRNA.
  9. 9. 1. siRNA• Longitud: 19-22 pb.• Síntesis por PCR.• Transcripción in vitro.
  10. 10. 2. shRNA– Interference RNA Short Hairpin (shRNA).• Longitud: hasta 25 pb.• Transfección vía plásmidos.• Síntesis in vitro.
  11. 11. 3. miRNA• Longitud: 22 pb.• Dos tipos de RNAasa: DROSHA y DICER.• Transfección por plásmido y vector.
  12. 12. TIPO DE iRNA VENTAJAS DESVENTAJASsiRNA Método rápido.Síntesis escaladas.Capacidad de marcaje desiRNA.Fácil transfección.Control de cantidad de iRNApor factores.Poco efectivo, no específico.No buena transfección (aveces).Expresión no inducible.Corto tiempo de vida siRNA.No útil en tiempo.Eficacia baja en proteínas muyexpresadas.Costoso.shRNANo se trabaja con RNA.Expresión estable y transitoria.Costo efectivo.Expresión inducible.Screenings en pools.Requiere clonación yverificación de inserto.Sitios de integración algenoma.miRNANo se trabaja con RNA.Expresión estable o transitoria.Costo-efectiva paraexperimentos largos.Vía de llegada directa paracélulas difíciles de transfectar.Screening por pools.Requiere clonación yverificación de inserto.Sitios de integración al genomainciertos en muchas ocasiones.
  13. 13. Transfección de iRNA– Vectores:• Plásmidos• Virus
  14. 14. Estudio de la Función Génica de los iRNAs:– Screening en pool– Screening en placas multipozos– Microarrays– Detección de redes genéticas
  15. 15. Screening en pool– Screening en placas multipozos
  16. 16. Microarrays
  17. 17. Detección de redes genéticas

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