5.약물대사 발표자료 정혜광-110914

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5.약물대사 발표자료 정혜광-110914

  1. 1. Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced toxicity Jeong Hye Gwang Department of Toxicology, College of Pharmacy, Chungnam National University Toxicology LAB
  2. 2. 장내세균총은 의약품의 대사에 영향을 미치는 가? Toxicology LAB
  3. 3. • 500-1000 different species• >1014 bacteria in body• Diverse metabolic activity• Anaerobic condition• Lots of substrates exist.• From mouth to rectumI, ileumC, cecumA, ascending colonT, transverse colonD, descending colonS/R, sigmoid/rectumSousa et al., IJP 363: 1-25 (2008)
  4. 4.  Reduction: azo- & nitro-group, sulfoxide, double bond Hydrolysis Dehydroxylation Acetylation/deacetylation Cleavage of N-oxide bond Proteolysis Denitration Deconjugation Thiazole-ring opening Deglycosylation N-Demethylation
  5. 5. 장내미생물에 의한 대사의 영향 장간재순환에 의한 배설 지연 독성대사체의 생성 발암대사체의 생성 무독화 약리활성 대사체의 생성 대사 및 독성에 있어 종차의 원인 Host 조직에서는 생성되지 않는 새로운 대사체의 생성 투여경로에 따른 독성 차이의 원인 Toxicology LAB
  6. 6. 장내미생물에 의한 대사체 독성 연구 화학물질 대사능을 갖는 장내세균이 매우 다양함 대사 후 독성을 유발하는 예가 많음: arbutin, geniposide, aucubin 등 장내미생물 대사계 (ex: fecalase)를 개발하여 장내미생물 대사에 의한 독성평가 활용이 시도되고 있음 In vivo 독성 평가시험: 무균동물이나 무균동물에 특정 장내미생물 정 착시킨 모델동물의 활용기법이 진행 중임 Toxicology LAB
  7. 7. 장내미생물에 의한 대사 독성 연구: arbutinArbutin HQ Food Chem. Toxicol., 44: 1940-1947, 2006 Toxicology LAB
  8. 8. 장내미생물에 의한 대사 독성 연구 CH3 CH2OH CH2O-glucuronideO2N NO2 CYP O2N NO2 UDP-GT O2N NO22,6-dinitrotoluene 2,6-dinitrobenzylalcohol 간에서 소장으로 배설 CH2OH CH2O-glucuronide nitroreductaseO2N NH2 O2N NO2 -glucuronidase 소장에서 간으로 재흡수 CH2OH CH2OH CH2OH 단백질 및O2N NH2 CYP O2N NHOH O2N NHOX DNA 와 acetylation 공유결합 sulfation 2-amino-6-nitro- X=-COCH3 -XO- benzylalcohol -SO3H Toxicology LAB
  9. 9. 장내미생물에 의한 대사 독성 연구 Toxicology LAB
  10. 10. 장내미생물에 의한 대사 독성 연구 In vivo 무균동물 시험: Single cell gel electrophoresis (Comet assay) liver colon(GF: Germ free, HFA: human flora associated, IQ: 2-amino-3-methyl-3H-imidazo[4,5-f]quinoline ) Toxicology LAB
  11. 11. 연구의 목적 다양한 in vitro 장내미생물 대사계를 활용한 독성평가 기술의 개발  장내미생물 배양계  Human fecal preparation (fecalase)  Intestinal microbial enzyme mix 장내미생물 대사 후 동물세포 배양계에서의 독성평가 기술 개발
  12. 12.  Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced cytotoxicity Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced genotoxicity Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced immunotoxicity Toxicology LAB
  13. 13. 장내미생물 대사체의 독성 평가 활성산소종(reactive oxygen species) 관련 독성평가: ROS 생성능 조사. 세포독성 평가: lactate dehydrogenase(LDH) assay, MTT reduction test. Apoptosis 유발능 평가: 세포 사멸 유전자(Bax)와 세포 사멸 억제 유전자(Bcl-2, BCl-XL)의 발현,caspase-3 활성 및 TUNEL assay. TUNEL staining장내 미생물 대사체 Toxicology LAB
  14. 14. 독성평가 수행물질 Geniposide Genipin Arbutin Hydroquinone Baicalin Bacialein methyl-paraben benzoic acid Toxicology LAB
  15. 15. 장내미생물 대사체의 독성 평가장내미생물 배양법을 이용한 미생물대사체 독성 평가시험법 개발을 위한시험균주• Bifidobacterium longum HY81, B. longum HY82, B. adolescentis HY83• Bacteroides fragilis KCTC3688최소영양배지 조성을 위한 배지 조건• 증균배지: 미생물을 처음부터 접종하여 증 균시키면서 물질의 대사 유도• 혐기희석액: 대수기의 균주를 접종시켜 미 생물의 증식은 일어나지 않고 물질의 대사 만 유도증균배지 및 혐기희석액에 시험물질을 대사시켜 대사체 분석  장내미생물 배양법을 통한 대사체 독성평가 가능성 확인증균배지 및 혐기희석액의 세포독성  최소영양배지 조성 확립신속한 in vitro 독성평가가 가능한 장내미생물 배양기술 확립 Toxicology LAB
  16. 16. 장내미생물 대사체의 독성 평가 대사전 물질인 arbutin과 독성대사체인 hydroquinone의 동시 정량 분석법 확립 증균배지 및 혐기희석액 내에서 장내미생물에 의한 대사로 arbutin 양은 감소하고 대사체인 hydroquinone 의 생성 확인 장내미생물의 종류 및 배양조건에 따라 시험물질의 대사능에 현저한 차이가 있음을 규명  개인 간 장내미생물총의 조성차이에 따라 장내에서의 화학물질 대사에 있어서 현저한 개인차를 보일 수 있음을 확인 Toxicology LAB
  17. 17. B. adolescentis 배양에서 arbutin의 대사 Hydroquinone Arbutin 8.3 120 7.8 Arbutin Concentration ( g/ml) 100Log value 7.3 Hydroquinone 80 Control 6.8 60 Arbutin 40 6.3 20 5.8 0 0 4 8 12 16 20 24 0 4 8 12 16 20 24 28 Time (hr) Time (hr) Growth curves of Bifidobacterium adolescentis Production of hydroquinone from arbutin in the culture media
  18. 18. 장내미생물 대사체의 독성 평가 0.8 MTT assay 120 120 0.7 arbutin hydroquinone Cell viability (% of control) 100 Cell viability (% of control) 100 DEVD-pNA cleavage 0.6 Caspase-3 assay (FU/mg protein) 80 0.5 80 0.4 60 60 0.3 40 40 0.2 0.1 20 20 0.0 0 0 NA 1uM 100uM 1mM 10mM NA 1uM 10uM 100uM 1mM 2.5mM 5mM 10mM NA 1uM 10uM 100uM 1mM 2.5mM 5mM 10mM Arbutin Hydroquinone 1200 120 1100 LDH leakage (% of control) LDH leakage (% of control) 1000 LDH assay 100 900 80 800 700 60 600 500 40 400 300 20 200 100 0 0 NA 1uM 10uM 100uM 1mM 2.5mM 5mM 10mM NA 1uM 10uM 100uM 1mM 2.5mM 5mM 10mM Arbutin 7 Hydroquinone 1.4 6 DCF fluorescnce (Fold of control) DCF fluorescnce (Fold of control) 1.2 5 ROS assay 1.0 4 0.8 3 0.6 2 0.4 0.2 1 0.0 0 NA 1uM 10uM 100uM 1mM 5mM 10mM NA 1uM 10uM 100uM 1mM 5mM 10mM arbutin HydroquinoneMTT 및 LDH assay 로 세포독성 평가, 활성산소 영향 평가, caspase-3 활성 및 APOPercentage 방법으로 세포사멸 평가원물질 arbutin 자체의 세포독성은 나타나지 않았음Hydroquinone 자체에서 세포독성 발현 - 100 M 이상의 농도에서는 MTT 및 LDH assay, ROS 생성능, capase-3 활성, APOPercentage 방법모두에서 세포독성 확인 Toxicology LAB
  19. 19. 장내미생물 대사체의 독성 평가 NA NA NA Arbutin -3mM 160 Arbutin -3mM 160 Arbutin -3mM Arbutin -1.5mM Arbutin -1.5mM 160 Arbutin -1mM Arbutin -1.5mM 140 Arbutin -1mM Arbutin -1mM Cell viability (% of control)Cell viability (% of control) 140 140 Cell viability (% of control) 120 120 120 100 100 100 80 80 80 60 60 60 40 40 40 20 20 20 0 0 0 CM medium CM medium+Bac. fragilis BL medium BL medium+Bif. Longum HY81 BL medium BL medium+Bif. Longum HY82 증균배지를 이용해 실제로 장내미생물과 arbutin 배양시 독성변화를 측정 확립된 MTT assay로 간세포주에 관한 세포독성 분석 증균배지로 이용된 BL 및 CM 배지 자체에 arbutin 처리시 세포독성 유발되지 않았음 BL 및 CM 배지에 Bifi. longum HY81, Bif. longum HY82, Bacteroides fragilis 균주와 arbutin을 각각 처리하여 함께 배양 - Bifi. longum HY81, Bif. longum HY82 배양액에서 세포독성이 강하게 나타남 이는 장내미생물이 arbutin 대사에 관여하여 세포독성을 유발하는 대사체를 생성시켰음을 의미 Toxicology LAB
  20. 20. 장내세균효소 복합체 fecalase의 제조시험관내 실험 (in vitro)에서 간장 대사 반응계를 대신하여 사용되고 있는 간의 마이크로조말 (microsomal) 효소 화합물인 S9 혼합액처럼, 인체의 소화관내 대사반응계를 대신할 수 있는 장내세균효소 복합체 (fecalase)을 제조Fecalase를 이용하여, 경구투여되는 식품과 의약품의 독성을 평가할 수 있는 새로운 독성평가 방법의 개발 Fecalase의 제조 및 합성기질을 이용한 효소활성 측정 Toxicology LAB
  21. 21. Fecalase에 의한 대사체의 독성평가장내세균효소 복합체(Fecalase) 에 의한 독성물질 대사체의 독성평가장내세균 효소 복합체(Fecalase) 에 의해서 Arbutin→ Hydroquinone으로 대사됨Fecalase의 대사 독성 물질에 대한 독성 평가를 하기 위하여 LDH, MTT, caspase-3 방법을 활용하여 조사한 결과 장내세균 효소 복합체에 의한대사체(Arbutin→ Hydroquinone)에서 세포 독성이 증가됨을 확인하였음 Toxicology LAB
  22. 22. Fecalase에 의한 대사체의 독성평가 장내미생물 대사 독성 물질에 대한 안전성 평가를 하기 위하여 TUNEL assay 방법을 활용하여 조사한 결과 장내세균 효소 복합체에 의한 대 사 체 (Arbutin→ Hydroquinone) 에 서 세 포 사 멸 이 증 가 됨 을 확인하였음 장내세균 효소복합체에 반응된 arbutin은 Bax의 단백질 발현을 증가시켰으며, Bcl-2의 단백질 발현을 농도 의존적으로 억제시켰음 항산화제를(NAC) 전 처리한 결과 장내세균 효소복합체(fecalase)에 반응된 arbutin에 증가된 ROS 생성능 및 세포독성이 억제되었음 Toxicology LAB
  23. 23. 장내 미생물 대사효소계 (intestinal microbial enzyme mix)의 제조 소화관 대사계를 시험관내 실험에서 대신 할 수 있는 분변효소액인 fecalase를 개 발하였으나 fecalase 는 안정성이 낮고, 상시 이용이 힘들다는 단점이 있음 시험관내 실험 (in vitro)에서 분변 효소액(이하 Fecalase)을 대체할 수 있는 장내 미 생물 대사효소계 (intestinal microbial enzyme mixture, 이하 enzyme mix)를 제조장내세균총을 대신할 수 있는 microbial enzyme mix를 만들기 위하여 강하고 다양한 효소활성을 나타내는 9개의 균주를 선별하였음9개 분리균주를 5 mix, 7 mix 및 9 mix 한 효소혼합액의 21개 효소활성 측정 Toxicology LAB
  24. 24. Fecalase 및 microbial enzyme mix에 의한 대사체의 독성 평가장내세균 효소복합체(fecalase)과 장내미생물 대사효소계(intestinal microbial enzyme mix)의 세포사멸 평가기술 개발 및 대사활성 비교장내세균 효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에 반응된 arbutin을 MTTassay 방법을 이용하여 세포 독성을 조사한 결과 장내세균 효소복합체및 장내미생물 대사효소계에 반응된 arbutin에 의해서 세포 독성이 증가하였음Arbutin의 경우 장내미생물 대사효소계가 장내세균 효소복합체보다 독성 대사체 생성을 증가시켰을 것으로 사료됨 Toxicology LAB
  25. 25. 장내미생물 대사체의 독성 평가 0.3 geniposide Cell viability (% of control) 140 geniposide genipin genipin DEVD-pNA cleavage 120 (FU/mg protein) 0.2 100 80 0.1 60 40 0.0 20 0 NA 50uM 100uM 200uM 500uM NA 50uM 100uM 200uM 500uM 180 geniposide 160 LDH leakage (% of control) genipin 140 120 100 80 60 40 20 0 NA 50uM 100uM 200uM 500uMMTT 및 LDH assay 로 세포독성 평가, caspase-3 활성 및 APOPercentage 방법으로 세포사멸 평가원물질 geniposide 자체의 세포독성은 나타나지 않았음Genipin 자체에서 세포독성 발현 - 100 M 이상의 농도에서는 MTT 및 LDH assay, capase-3 활성, APOPercentage 방법 모두에서 세포독성확인 Toxicology LAB
  26. 26. Fecalase 및 microbial enzyme mix에 의한 대사체의 독성 평가장내세균 효소복합체(fecalase)과 장내미생물 대사효소계(intestinal microbial enzyme mix)의 세포사멸 평가기술 개발 및 대사활성 비교장내세균 효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에 반응된 geniposide을 MTT assay , Bcl-2 family, caspase assay방법을 이용하여 세포 독성을조사한 결과 장내세균 효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에 반응된 geniposide에 의해서 세포 독성이 증가하였음 Toxicology LAB
  27. 27. Fecalase 및 microbial enzyme mix에 의한 대사체의 독성 평가장내세균 효소복합체와 장내미생물 대사효소계 세포사멸 평가기술 개발 및 대사활성 비교원물질인 baicalin, methyl-paraben 에서 독성을 나타났으며, baicalein, benzoic acid의 경우 원 물질의 독성 보다 세포 독성이 적었음. 장내세균효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에 반응된 baicalin의 경우 세포 독성이 baicalein보다 세포 독성이 적음을 확인하였음Baicalein 및 methyl-paraben의 경우 장내세균 효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에서 다른 물질로 대사되어 독성이 나타나지 않은 것으로사료됨 Toxicology LAB
  28. 28. Conclusion β-glucosidase Cytotoxicity Intestinal microfloraArbutin, Geniposide Hydroquinone, Genipin  장내미생물에 시험물질을 첨가하여 대사를 유도한 후 세포생존율 과 apoptosis 등의 독성지표를 통하여 평가  Fecalase와 장내미생물 대사효소계(intestinal microbial enzyme mix)를 이용한 세포사멸 평가기술 개발 및 대사활성 비교 Toxicology LAB
  29. 29.  Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced cytotoxicity Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced genotoxicity Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced immunotoxicity Toxicology LAB
  30. 30. 장내미생물 대사체의 유전 독성 평가 DNA 손상 관련 유전자 발현을 활용한 유전독성 평가.  p53 유전자 발현 및 활성을 이용한 유전독성 평가.  8-Oxoguanine glycosylase (OGG1) 발현을 이용한 유전독성 평가.장내 미생물 대차체에 의한 유전독성 영향을 p53 및 8-oxoguanine glycosylase (OGG1)유전자 발현을 통한 분석. Toxicology LAB
  31. 31. 장내미생물 대사체의 유전 독성 평가 Comet assay 및 in vitro 소핵시험을 통한 유전독성 연구. 장내세균 효소복합체(fecalase)과 장내 약물대사효소계(intestinal microbial enzyme mix)의 유 전독성 평가기술 개발 및 대사활성 비교.장내 미생물 대사체에 의한 유전 독성에 대한 영향을 cometassay 방법을 구축하여 평가 장내 미생물 대사체에 의한 유전 독성에 대한 영향을 in vitro 소핵 assay 방법을 구축하여 평가 Toxicology LAB
  32. 32. 장내미생물 대사체의 유전 독성 평가 Relavive p53 gene expression 14 Geniposide P-53 12 Genipin GAPDH 10 NA 1 10 25 50 125 8 Geniposide (uM) 6 4 P-53 2 GAPDH 0 Relavive OGG1 gene expression NA 1 10 25 50 125 4.0 NA 1 uM 5 uM 10 uM 50 uM 100 uM Genipin (uM) 3.5 Geniposide Genipin 3.0DCF fluorescnce (Fold of control) 2.5 DCF fluorescnce (Fold of control) 1.4 2.5 1.2 2.0 2.0 1.0 1.5 1.5 0.8 1.0 0.6 1.0 0.5 0.4 0.5 0.0 0.2 NA 1 uM 5 uM 10 uM 50 uM 100 uM 0.0 0.0 NA 20 uM 50 uM 100 uM 200 uM 500 uM NA 20 uM 50 uM 100 uM 200 uM 500 uM Relative p53 luciferase activity geniposide genipin 14 Geniposide Genipin 12 (Fold of control) 장내 미생물 대사체에 의한 유전독성 영향을 p53, 8-oxoguanine 10 glycosylase(OGG1) 유전자 발현을 통한 분석 8 6 장내미생물에 의한 대사체(Geniposide→ Genipin)의 p53, OGG1 4 유전자 발현에 대한 영향을 조사한 결과 Geniposide의 대사체인 Genipin 에서 p53, OGG1 유전자 및 p53 활성이 증가됨을 2 확인하였음. 전구 물질인 Geniposide는 영향이 없음 0 NA 1 uM 5 uM 10 uM 50 uM 100 uM Toxicology LAB
  33. 33. Fecalase에 의한 대사체의 유전 독성 평가 12 Relavive p53 gene expression without Fecalase 10 with Fecalase 8 6 4 2 0 NA 1 uM 50 uM 100 uM Geniposide Relavive OGG1 gene expression 4 without Fecalase장내세균 효소 복합체에 의한 대사체의 유전독성 with Fecalase영 향 을 p53, 8-oxoguanine glycosylase (OGG1) 3유전자 발현을 통한 분석장 내 세 균 효 소 복 합 체 (fecalase) 에 Geniposide 을 2첨 가 하 여 대 사 를 유 도 한 후 p53, OGG1 유 전 자발현에 대한 영향을 조사한 Geniposide의 대사체인Genipin 에서 p53, OGG1 유전자 및 p53 활성이 1증가됨을 확인하였음. 전구 물질인 Geniposide는영향이 없음 0 NA 1 uM 50 uM 100 uM Geniposide Toxicology LAB
  34. 34. Fecalase 및 microbial enzyme mix에 의한 대사체의 유전 독성 평가 장내세균 효소복합체과 장내미생물 대사효소계의 유전독성 평가기술 개발 및 대사활성 비교 장내세균 효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에 반응된 genipin의 경우 DNA손상이 발생이 높아 comet tail의 이동성이 증가하였음 In vitro 소핵시험 방법을 활용하여 유전 독성을 조사한 결과 장내세균 효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에 반응된 genipin에 의해서 소핵 생성능이 증가하였음 Toxicology LAB
  35. 35. Conclusion β-glucosidase Genotoxicity Intestinal microflora Genipin Geniposide 장내 미생물에 시험물질을 첨가하여 대사를 유도한 후 유전자 발 현(p53, OGG1)을 통한 유전독성 평가기술 개발 Comet assay 및 in vitro 소핵시험을 이용하여 장내미생물에 대한 유전독성 평가기법 개발 Toxicology LAB
  36. 36.  Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced cytotoxicity Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced genotoxicity Role of metabolism by intestinal bacteria in chemical-induced immunotoxicity Toxicology LAB
  37. 37. 장내미생물 대사체의 면역 독성 평가 전사인자 활성화 기법을 활용한 독성평가기술의 개발 염증관련 COX-2의 발현을 이용한 면역독성 평가기술 개발 염증 반응 관련 주요 전사조절인자인 NF- B, AP-1 등의 활성 측정 (transient transfection) 염증 반응 관련 유전자인 COX-2 promoter 활성 측정 (transient transfection) signaling pathways leading to inflammation 장내 미생물 대사체 TPA, LPS, TNF- Cytoplasm PG synthesis NIK MEKK-1 MAPKK IKK- I B NF- B MAPK AP-1 NF- B COX-2 I B NF- B Nucleus NO O2- ONOO - iNOS AP-1 COX-2 NF- B iNOS Toxicology LAB
  38. 38. 장내미생물 대사체의 면역 독성 평가 Relative NF-kB luciferase activity Relative COX-2 luciferase activity Geniposide 4 120 Genipin Geniposide GenipinCell viability (% of control) 100 3 (Fold of control) COX-2 Luc 80 2 60 40 1 20 0 0 NA 10 uM 50 uM 100 uM NA 10 uM 50 uM 100 uM 3 Geniposide Genipin (Fold of control) 2 NF-kB Luc 1 0 NA 10 uM 50 uM 100 uM 5 Relative AP-1 luciferase activity Geniposide 4 Genipin (Fold of control) AP-1 Luc 장내 미생물 대사체에 의한 면역독성 영향을 COX-2 유전자 3 발현 및 전사조절인자 (NF-κB, AP-1) 활성을 통한 분석 2 장 내 미 생 물 에 의 한 대 사 체 (Geniposide→ Genipin) 의 면 역 독성과 관련된 단백질인 COX-2 유전자 발현 및 주요 전사 조절 1 인자의 활성을 조사한 결과 Geniposide의 경우 COX-2 발현에 여향이 없었으나 장내미생물(β-glucosidase)에 의해 가수분해된 0 Genipin은 NF-κB, AP-1의 전사 조절인자의 활성화를 통하여 NA 10 uM 50 uM 100 uM COX-2 발현을 증가시킴을 확인하였음 Toxicology LAB
  39. 39. Fecalase에 의한 대사체의 면역 독성 평가Relative COX-2 luciferase activity 4 Relative NF-kB luciferase activity 3 without Fecalase with Fecalase without Fecalase 3 with Fecalase (Fold of control) (Fold of control) 2 2 1 1 0 0 NA 10 uM 50 uM 100 uM NA 10 uM 50 uM 100 uM Geniposide Geniposide 4 장내세균 효소 복합체에 의한 대사체의 면역독성Relative AP-1 luciferase activity without Fecalase 영향을 COX-2 유전자 발현 및 전사조절인자 with Fecalase (NF-κB, AP-1) 활성을 통한 분석 3 (Fold of control) Geniposide 을 장 내 세 균 효 소 복 합 체 에 동 시 2 배양하여 마우스 대식세포주에 처리한 결과 Geniposide와 장내세균 효소복합체 (fecalase)에 배 양 한 조 건 에 서 Geniposide 가 Genipin 로 1 대사되어 NF-κB, AP-1의 전사 조절인자의 활성 및 COX-2 발현을 증가시킴 0 NA 10 uM 50 uM 100 uM Geniposide Toxicology LAB
  40. 40. Fecalase 및 microbial enzyme mix에 의한 대사체의 면역 독성 평가 장내세균 효소복합체과 장내미생물 대사효소계의 면역독성 평가기술 개발 및 대사활성 비교 장내세균 효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에 반응된 geniposide 에 의 해 서 COX-2 promoter 의 활 성 이 증 가 하였음 장내세균 효소복합체 및 장내미생물 대사효소계에 반응된 geniposide 에 서 NF-κB, AP-1 의 활 성 이 증 가 됨 을 확인하였으며 장내미생물 대사효소계과 장내세균 효 소 복 합 체 의 geniposide 의 대 사 활 성 반 응 은 차 이 가 나타나지 않았음 Toxicology LAB
  41. 41. Conclusion β-glucosidase Immunotoxicity Intestinal microflora Geniposide Genipin 장내 미생물에 시험물질을 첨가하여 대사를 유도한 후 염증관련 유 전자 발현을 활용한 면역독성 평가기법 개발 전사인자 활성화 기법을 활용한 독성평가기술 개발 Fecalase와 intestinal microbial enzyme mix를 활용한 면역독성 평 가 기술 개발 Toxicology LAB
  42. 42. Conclusion국내에 연구기반이 거의 없던 in vitro 장내미생물 대사독성 기술을 확립:장내미생물 배양계, fecalase, intestinal microbial enzyme mix식품, 천연물 및 의약품 등의 안전성 평가를 위해서 장내미생물에 의한 대사및 독성연구의 필요성 및 중요성을 입증 및 제시.식품, 천연물 및 의약품 등의 in vitro 독성 평가에 S9 mix와 함께 fecalase 및intestinal microbial mix를 적용하여 평가할 필요성 제시.신약개발 시 장내미생물에 의한 대사를 확인할 필요성 제시.장내미생물에 의한 화학물질의 대사 및 대사로 인한 약리 및 독성작용의 변화와 관련된 연구의 활성화 및 이에 대한 지속적인 연구가 필요함. Toxicology LAB
  43. 43. ACKNOWLEDGEMENTS:영남대학교 정태천 교수영남대학교 강미정 박사한국야쿠르트 안영태 박사경희대학교 김동현 교수경희대학교 이용섭 교수 약학대학Toxicology LAB경희대학교 여희경 College of Pharmacy-CNU hgjeong@cnu.ac.kr

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