Presentacion tinciones josemendez

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Describe las técnicas de imagen cerebral por tinciones

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Presentacion tinciones josemendez

  1. 1. FACULTAD DE PSICOLOGÍA.UNAM SUA José Méndez VenegasMaestro josemv@unam.mxUnidad Técnicas de Imagenología Tinciones 2 Cerebral Ciudad de México, 2012 Para utilizar el contendio de esta presentación, favor de citar la fuente
  2. 2. Análisis de imágenes de células nerviosas obtenidas mediante técnicas de tinción.Nitrato de plataVioleta de cresilOtras técnicas de tinción
  3. 3. Tinciones para el análisis de células cerebrales
  4. 4. Tinción de NisslEs un método fundamental que utiliza colorantesacidófilos como el azul de metileno, el violeta de cresilo, la tionina, la hematoxilina, el azul de toluidina o el rojo neutro, que se unen al ARNcontenido en los ribosomas, tiñendo el núcleo, el nucléolo y los ribosomas del retículo endoplasmático rugoso o sustancia de Nissl. En las células gliales solamente se tiñen los núcleos. Con esta tinción no se logran visualizar las ramificaciones de las neuronas.
  5. 5. Tintura de Nils Cuerpos de tres neuronas multipolares del astaventral de la materia gris de la médula espinal, con las característicastípicas del soma incluyendo los nucleolos prominentes (flecha verde) dentro de un gran núcleo leptocromático y grumos de sustancia de Nissl o poliribosomas rER (flecha roja). La sustancia de Nissl o cromática se extiende desde la base de cada dendrita (D) pero no dentro del promontorio que da nacimiento al axon
  6. 6. Tinción de Nils que ilustra la tinción en neuronas, células gliales y células endoteliales de los capilares sanguíneos de la corteza cerebral humana
  7. 7. Hipocampo humano con tinción de Nissl mostrando la citoarquitectura y la distribución de los campos neuronales.
  8. 8. Hipocampo humano con Tinción de Nissl, procedente de un paciente epiléptico, se observa un patrón deesclerosis de hipocampo, con extensa muerte neuronal (marcada con asteriscos).
  9. 9. Soma neuronal del asta ventral de la médula espinal de rata.Las estructuras basófilas aparecen teñidas de color azul.
  10. 10. Tinciones por medio de impregnación con metales Técnicas con nitrato de platareducido : Bielschowsky, Bodian, Cajal, Glees, Nauta, que utilizan compuestos con nitrato de plata para posteriormentetratarse las muestras con alguna sustancia reductora.
  11. 11. Tinción de Cajal del nucléolo y otroscomponentes de una célula piramidal.
  12. 12. Tinción de Cajal en donde se observanfibras y axones colaterales en células de Purkinje.
  13. 13. Neurona del bulbo raquídeo Tinción de Cajal
  14. 14. Tinción de Golgi Se basa en la adición de nitrato de plata ydicromato potásico en un tejido, formando un denso precipitado marrón oscuro que impregna completamente las células del sistema nervioso. Con este método seobtiene acceso a la morfología completa de las neuronas y células gliales, y asimismo el marcaje de los axones de las neuronas permite obtener información acerca de la conectividad de las distintas regiones cerebrales.
  15. 15. Permite diferenciar morfológicamente cada una delos tipos celulares del cerebro y además ayuda a agruparlas según sus características externas. La técnica tiñe selectivamente un porcentaje muy bajo de células
  16. 16. Tinción de Golgi para células piramidales.
  17. 17. Neurona piramidal de la corteza cerebral teñida con una modificación del método de Golgi.
  18. 18. Tinción de Golgi de la corteza cerebral en donde el precipitado negro permite observar a las neuronas y los astrocitos
  19. 19. A. Neurona piramidal que exhibe el soma y su arborización dendrítica en diferentes planos de profundidad (Técnica de Golgi y Colonnier)B. Neurona piramidal a partir del soma .Abajo en el centro, se desprende hacia arriba la dendrítica apical (Tinción de hematoxilina y eosina)
  20. 20. En esta imagen se observaun corte delgado decerebro de gato teñido pordos procedimientos:la Tinción de Nissl, que tiñeTODOS los cuerposcelulares de violeta y laTinción de Golgi quemuestra los perfiles dealgunas neuronas teñidosde negro observándose lassiluetas de los cuerposcelulares y susprolongaciones. El métodode Golgi tiñe el 5 % omenos de las neuronas.Si se tiñeran todas lasneuronas del tejido el corteparecería casi totalmentenegro.
  21. 21. Tinciones para mielina Se basan en el uso de colorantes conafinidad por las proteínas unidas a los fosfolípidos. Sirven para identificartractos de fibras. En neuropatología se utilizan combinaciones de tinciones para Nissl y mielina.
  22. 22. 1. Con tetróxido de osmio. Tiñe tejidos grasos de color pardo.Muestra de una fibrade mielina preparadacon tetróxido deosmio Se observa unnodo de Ranvier através de la mitad deella. La tinción másoscura de la mielinase interrumpe en elnodo, donde la fibraestá cubierta sólo porel citoplasma de lacélula de Schwann.
  23. 23. Fibras separadas teñidas con tetróxido de osmio, mostrando degeneración axonal.
  24. 24. Corte semifino teñido con colorante de Richardson mostrando engrosamiento de dos fibras nerviosas,una de ellas mielinizada y la otra con una lámina fina de mielina.
  25. 25. 2.Klüver-BarreraUtiliza reactivos como azul de luxol rápido,ácido periyódico de Schiff (PAS) yhematoxilina. Permite marcar de un color lossomas y de otro color la mielina de losaxones, permitiendo detectar las principalesrutas por las que las neuronas se proyectana otras áreas. El colorante rojo neutro seutiliza para teñir los cuerpos de la sustanciagris y el colorante azul de luxol pone demanifiesto las vías de la sustancia blanca.
  26. 26. Método de Klüver- Barrera para núcleos, grumos de Nissl y vainas de mielinaNúcleos y grumos de Nissl color rojo-violeta. Vainas de mielina azul oscuro.
  27. 27. Fragmento de corteza cerebral que contiene neuronas corticales, piramidales(flechas). Tinción de Klüver-Barrera.
  28. 28. Intoxicación aguda por disolventes. Cortehemisférico del cerebro con necrosis del centro oval. Tinción de mielina, luxol fast blue-KIüver Barrera.
  29. 29. Tinciones para la glía Tinción de Cajal que utiliza oro sublimado. Este método permite identificar los dos tipos de células neurogliales de la corteza cerebral, especialmente, los astrocitosprotoplásmicos rebeldes a la tinción con otros métodos. Esta técnica posibilitó describir detalles como los pieschupadores de las células de la astroglía en la sustancia blanca de cerebros humanos
  30. 30. Sección del cerebro de un paciente con laenfermedad de Alzheimer teñido con el método de Cajal con oro sublimado
  31. 31. Proximidad a una vena sanguíneaTinción de Cajal con oro sublimado
  32. 32. Para revelar neurotransmisores
  33. 33. Fluorescencia inducida por formaldehído y ácido glioxílico. Este método permita la visualización de monoaminas debido a su unión con el formaldehído y provee una estimación semicuantitativa de las terminales monoaminérgicas y la distribución de ladensidad de los cuerpos celulares en los tejidosdel Sistema Nervioso Central de los mamíferos.
  34. 34. Neurona de rata marcada con fluorescencia Foto tomada con microscopía laser confocal; tincióncon anticuerpos contra tubulina en neuronas cultivadas in vitro.
  35. 35. Inmunocitoquímica Las técnicas inmunocitoquímicas son un tipo de técnicas histológicas que permiten identificarelementos del Sistema Nervioso como orgánuloscelulares, neurotransmisores, enzimas de síntesis o de degradación de neurotransmisores, receptores para neurotransmisores, etc. La técnica consiste en crear artificialmente sustancias químicas que reconozcan específicamente al elemento que se quiere estudiar; estas sustancias reciben el nombre de anticuerpos.
  36. 36. Detección de la molécula tirosina hidroxilasa mediante inmunocitoquímica usando un anticuerpo primario sinmarcar, un anticuerpo secundario conjugado con biotina y el complejo avidia-biotina-peroxidasa.
  37. 37. Detección con inmunofluorescencia de dos antígenos en una sección de tejido nervioso: la molécula tirosina hidroxilasa (a laizquierda) y el neuropéptido Y (a la derecha), usando fluoresceína y texas red como fluorocromos, respectivamente, mediante unmétodo de marcaje indirecto. En esta sección la tirosina hidroxilasaaparece en cuerpos celulares (flecha) mientras que el neuropéptido Y aparece en fibras. El asterisco indica donde está la célula con tirosina hidroxilasa, pero no emite luz visible porque la foto se ha tomado iluminando la sección con una longitud de onda que no excita a la fluoresceína.
  38. 38. Una vez extraído del cerebro y preparado el tejido, se incuba en unasolución que contiene el anticuerpo que se unirá al elemento a estudiar. Posteriormente, se procede a lalocalización del anticuerpo porque éste emite señales bajo cierta condiciones, por ejemplo, señales radioactivas ufluorescentes o porque lo exponemos aun segundo anticuerpo que reconoce al primero y que emite una señal.
  39. 39. Estas técnicas pueden utilizarsetambién para medir la actividad cerebral a través de detectar proteínas que se sintetizancuando las neuronas se activan gracias a los genes de acción inmediata
  40. 40. Secciones del cerebro del ratón inmunoteñidas con un anticuerpoantineuroglobina.A. CortezaB. Hipocampo y surco dentadoC. Tallo cerebralD. Cerebelo y células de Purkinje.
  41. 41. Cerebro, neuronas y células gliales teñidas con una técnica inmunohistoquímica
  42. 42. Células de Purkinje del Cerebelo con tinción de Golgi, fotografía obtenida de una preparación original del laboratorio de Golgi en el Istituto di Patologia nella Università di Pavia
  43. 43. Estas imágenes se obtuvieron de cortes de tejido nervioso tratados con impregnaciones argenticas Las células que observamos en la imagen A son neuronas piramidales y en la B astrocitos fibrosos
  44. 44. BIBLIOGRAFÍAHistología y biología celular: introducción a la anatomía patológica. A.Kierszenbaum. Pp. 248•Fundamentos de psicobiología: libro de prácticas. María Dolores EscarabajalArrieta. Pp. 52-54•Neuroimagen. Técnicas y procesos cognitivos. Ríos, M. pp. 9-10•Fundamentos de Psicobiología. Diego Redolar Ripoll (coor)) pp. 119-120.•Garcia-Lopez P, Garcia-Marin V and Freire M (2010). The histological slidesand drawings of Cajal. Front. Neuroanat. 4:9. doi: 10.3389/neuro.05.009.2010.•http://www.golgistain.com/Services.php•http://www.siumed.edu/~dking2/ssb/NM032b.htm•http://www.courseweb.uottawa.ca/medicine-histology/english/ss_basictissues/nervous_tissue.htm•http://www.ihcworld.com/royellis/gallery/cajal.htm•http://www.anatomyatlases.org/MicroscopicAnatomy/Section06/Plates•Histochemistry and Cell Biology Volume 49, Number 2, 81-93, DOI: 10.1007/http://redalyc.uaemex.mx/pdf/843/84342604.pdfhttp://campus.usal.es/~histologia/PDAtecnicas/histotec/neurotec/neurotec.hthttp://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do

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