1/1 MD0xxx.01
Miltenyi Biotec:
免疫磁珠分选技术及应
用
德国美天旎生物技术有限公司
北方区技术支持
王卉
MD0197.02
内容
• MACS 技术原理
• MACS 技术设备及分选策略
• 几种特殊的 MACS 分选
分选和分析 DC 细胞
分选各种 T 细胞
分选和分析细胞因子分泌细胞
分选造血干细胞
分选人类肿瘤细胞
分选和分析凋亡和死亡细...
MD0347.01
MACS 技术原理
MACS(Magnetic Activated Cell Sorting) :
= 免疫学 + 细胞生物学 + 磁力学
• 基于抗体对抗原的特异性识别
• 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上,从而与细胞相连...
MD0651.01
MACS®
磁性分选
MACS 微珠进行
磁性标记
未标记的细胞
先行流出
洗脱阳性
分选的细
胞
MD0197.02
分选前标本制备:过滤
MACS 预选滤器:
30µm
MD0197.02
MACS 技术
设备与试剂
» MACS 微珠
» MACS 分选柱
» MACS 分选器
» 详细分选方案 *
MACS 技术
设备与试剂
• MACS 微珠:
MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的
超顺磁化微粒,可用于目的细胞的磁性标记。
• 特性:
50nm 大小
对细胞没有毒性
可生物降解
不影响细胞特性
MD0057.03
MACS 技术分选的 CD8+
T 细胞
微珠
MACS 微珠
直标微珠
多选微珠
间标微珠
MACS 技术
设备与试剂
• MACS 分选柱:
》填充有不同规格的铁珠。
》铁珠表面有亲水包被,不损伤细胞
。
》无菌包装。
》可用于分选多种细胞及亚细胞物质
、
细菌、病毒、 mRNA 和蛋白质。
• 专利产品
• 将磁场扩大 1000 ...
MD0061.02
在 MS 柱中产生的强大磁场
• MACS 分选柱:
MACS 技术
设备与试剂
• MACS 分选器:从手动到自动,从实验室到临
床
MACS 技术
设备与试剂
• MACS 分选器
MACS 技术
设备与试剂
autoMACS 分选仪
• 9 种程序,一机完成所有细胞分
选
• 成本低,两个可重复使用的分
选柱( 2 周内 100 次)
• 快速( 3 - 10 分钟)
•重复性好
• 全自动分选,仪器操作简单
• 适用范围广:从少量标本
( 105...
MACS 技术主要优势
• 小磁珠 : 50 nm (快速、不活化细胞、不沉
淀)
• 保留细胞功能(直接进行后续实验;无毒性;氧
化
铁和多聚糖组成,可生物降解)
• 与流式细胞仪兼容(不影响细胞光学特性、不影
响荧
光抗体标记、与流式细胞仪...
MACS®
细胞分选策略
• 阳性分选
• 去除分选
• 去除分选后再阳性分选
• 多重分选
MD0044.02
MACS 细胞分选策略
1 、阳性分选:
• 根据特异性标志分选细胞 : 阳性分选是指目的细胞磁性
标记
后,作为阳性的标记组分直接分选出来。
 
• 优点:
    》高纯度,尤其是富集稀有的细胞
》高回收率
》操作简便、迅速
MD0044....
MD016102
阳性分选策略
MACS®
微珠磁
性标记
未标记细胞先行流
出
将分选柱
移出磁场
,洗脱阳
性分选细
胞
MACS 细胞分选策略
2 、去除分选:
• 去除分选是磁性标记非目的细胞,并将其从细胞混合物
中去
除,即未磁性标记的细胞为目的细胞。
 
• 去除分选策略适用范围:
》去除不需要的细胞
》缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞)
》...
MD0160.02
去除分选
磁性标记 分选未磁性标记细
胞
MACS 细胞分选策略
3 、去除分选后再阳性分选:
• 即先去除非目的细胞,再进行阳性分选。
 
• 适用范围:
》非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。
》要分选非常稀有细胞,先去除非目的细胞再行阳性分
选,
可获得高纯度的目的...
1. 去除非 CD4+
T 胞。细
用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠 接磁性间 标
非记 CD4+
T 胞细
磁性分 去除 胞选 标记细
先行流出为 CD4+
T 胞细
2. CD25 微珠直接磁性标记 CD25+
胞细
性分 胞阳 选靶细
...
MD0652.01
多选微珠标记
MACS 分选
磁性颗粒的酶解离
终止解离反应
根据第二标
志进行磁珠
标记
MACS 分选
MACS 细胞分选策略
4 、多选微珠:
MACS 畅销机器与分选柱
• MiniMACS starting kit : 1 个分选架、 1 个 MiniMACS 分选器、 1
盒 MS 分选柱、 1 支价值 7500 元试剂( 15088 元):可做阳性分选、小
量标本、间标去除分选...
MACS 几种畅销磁珠与抗体
• 专利产品: CD133 、 CD303 、 CD304
• 特殊产品:人类 DC 系列: BDCA-1(CD1c) 、 BDCA-2(CD303) 、
BDCA-3(CD141) 、 BDCA-
4(CD304...
主要竞争对手分析
Dynal :大磁珠
主要市场: CD4 、 CD8 等高频细胞,
优势:价格
劣势:回收率低(不能做低频细胞、弱表达细胞分选
)
磁珠必需剪切(耗时——细胞状态不佳)
大磁珠(活化细胞)
我们的优势:纯度高、回收率高、细胞活...
主要卖点
干细胞产品:人类: CD133 、 CD34 、 MSC 试剂盒
( CD271 )
小鼠:系别阴性试剂盒、 CD117 微珠
定向分化培养基
DC 产品: 人类: BDCA-1 、 BDCA-2/4
小鼠: CD11c
NK 产品:...
识别 DC 和 DC 亚群 New
LineageLineage--
(CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56)
HLA-DRHLA-DR++
PDCPDC
CD11cCD11c--
CD123CD123++
BDC...
CD11cCD11c++
DCDC
CD8CD8++
DCDC CD4CD4++
DCDC
CD11cCD11c++
B220B220++
Gr-1 (Ly-6C/G)Gr-1 (Ly-6C/G)++
DCDC
CD11cCD11c++
B22...
MACS®
技术分选与分析大鼠 DC 细胞 New
MD0044.02
Anti-DC(OX62) 微珠
• 用于从大鼠外周血、淋巴和非淋巴组织中分选或者去
除 OX62+
DC 。
• 单克隆抗体 OX62 识别表达于大部分大鼠 DC 上的整...
MACS®
技术分选与分析功能性 T 细胞
MD0044.02
T h Ï ¸° û£ ¨C D 4 £ ©
T c Ï ¸° û£ ¨C D 8 £ ©
µ ÷½ ÚÐ ÔT Ï ¸° û(C D 4 + C D 2 5 + )
T C R ...
MD0420.02
MACS®
细胞因子分泌细胞分析与分选 New
抗原特异性
再刺激
细胞因子
分泌阶段
捕获试剂
标记
荧光标记和
磁性分选
• •••
Catch
Reagent
Detection
Antibody
Anti-PE
Mi...
MD0420.02
MACS®
细胞因子分泌细胞分析与分选 New
分选前
刺激组
分选后
未刺激组
* 百分比均为占 CD4 +
细胞百分比
MD0420.02
MACS®
细胞因子分泌细胞分析 New
刺激组
未刺激组
使用 PE- CMVpp65/HLA/A2- tetramers 和 IFN-γ Secretion Assay - Detection
Kit (APC) or ...
人类细胞因子分泌细
胞分选与检测试剂
盒
• IFN-γ 分泌细胞
• IL-2 分泌细胞
• IL-4 分泌细胞
• IL-10 分泌细胞
• TNF-α 分泌细胞
MACS®
细胞因子分泌细胞分析与分选
New
小鼠细胞因子分泌细胞
分选与...
人类干细胞分选微珠与试剂盒
• CD34 微珠及多选微珠:用于从骨髓、外周血、脐带血中
分选
造血干细胞、内皮前体细胞
• CD133 微珠:用于从骨髓、外周血、脐带血中分选
造血干细胞、内皮前体细胞、多能成体干细胞
( MAPC )
• CD...
MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR)new
成分 :
分选 :
•CD271 (LNGFR)-APC
•Anti-APC MicroBeads
•FcR Blocking
培养 :
•NH Expansio...
Ads in Blood (April & Mai)
MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR)
人类 MSC 的标准化研究
CD271 又叫做低亲和力神经生长因
子受体 (LNGFR), 是迄今为止发现的
最佳...
Ads in Blood (April & Mai)
MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR)
人类 MSC 的标准化研究
Nadia Quirici 等, Experimental Hematology
30...
MACS 小鼠干 胞分 盒细 选试剂
:
Lineage Cell Depletion Kit: 去除成熟
和分化的造血 胞, 富集造血干祖细 预
胞。细
CD117 MicroBeads :分 早期和选 晚
期干祖 胞。细
Anti-Sca-...
MACS®
技术分选人类肿瘤细胞 New
MD0044.02
•上皮肿瘤细胞
根据表面抗原进行分选与分析: Anti-HEA (EpCAM) MicroBeads
Anti-ErbB-2 (HER-2/neu)
MicroBeads
根据细胞内...
MACS®
技术分选凋亡细胞 New
MD0044.02
刺激、分化、凋亡、脱颗粒、坏死
PS 暴露
PS 暴露细胞被 AnnexinV 微珠磁性标记
磁性标记细胞滞留在分选柱上
PS 暴露细胞被洗脱下来
MACS®
技术分选转染细胞 New
MD0044.02
应用于功能基因、信号转导研究、药物筛选和标记技
术。
MACSelect4
转染细胞分选
试剂盒使用
pMACS4.1 和
自己的质粒
转染细胞 用
MACSelect4
微珠标记转
染...
MACS®
技术分选转染细胞 New
MD0044.02
优点:
省时:只需 2-3 小时(建立一个稳定的细胞系需数周
)
纯度高,背景低
 
不影响转染细胞功能和活力
分选的细胞可直接用于培养或功能检测
可用于:原代细胞 & 细胞系
贴壁 &...
MACS®
分子生物学和蛋白生化的分选
• 表位蛋白分选: µMACS 抗 His-, HA-, c-
myc-,
GFP- , GST- 蛋白分选 .
• 生物素化分子及其靶位分选: µMACS 链霉亲和素微珠
• µMACS 免疫沉淀: µ...
MACS®
分子生物学和蛋白生化的分选
优点:
• 分选柱上固定:高纯度利于灵敏的后续实验
作用温和,可获得理想的分子复
合物
分选柱上分子修饰,可以减少细胞损失
• MACS 微珠: 敏感,可用于极少量的目的分子
快速:分选 mRNA 仅需 ...
Miltenyi Biotec GmbH (headquarter)
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  • Miltenyi Biotec stands for MACS Technology.
    MACS stands for Magnetic Cell Sorting
  • There are a lot of different separation techniques apart from Magnetic Cell Sorting.
    Some of them are also used to pre-enrich cells befor performing a megnetic cell sorting.
  • Higher organisms such as man bears many different cell types. Here, different blood cell types are shown, all develping from a central stem cell. For a lot of applications it is necessary to obtain one single cell type.
  • One cell type in a mixture is labeled with a specific monoclonal antibody coupled to a very small magnetic bead. The cells are passed over a column which is placed in the magnetic field of a MACS separator. The magnetically labeled cells are retained in the column, the unlabeld cells run through. Then, the column is removed from the magnet and the labeled cells are eluted as the positive fraction. We call this a positive selection.
  • There are a lot of different separation techniques apart from Magnetic Cell Sorting.
    Some of them are also used to pre-enrich cells befor performing a megnetic cell sorting.
  • There are a lot of different separation techniques apart from Magnetic Cell Sorting.
    Some of them are also used to pre-enrich cells befor performing a megnetic cell sorting.
  • To see the MicroBeads you have to make a cross-section through the cell and perform a transmission electron micrograph. The MicroBeads are sitting on the surface (arrows). You can also see the douple membrane of the cell.
  • Reason for the steel balls: They generate a high gradient magnetic field with extremely strong magnetic forces in the „edges“. That allows Miltenyi Biotecto put extremely few material on the cell surface, i.e. the tiny MicroBeads.
  • Three take home (or better „take to the customer“ messages which are explained in the following slides.
  • Lots of different MACS separation strategies: no limit in cell separation!
  • All other cells are labeled with antibodies (could be indirect as shown here or direct.)
    Some customers prefer this method, although it is more difficult to obtain the cells you would like to habe (you label the cells which you do not want) and it is also more expensive (more antibodies, more MicroBeads). In doubt, Positive Selection should be the method of choice.
  • To isolate a cell according to two different markers: A positive selection followed by a second positive selection
  • What is possible for cells, is also possible for molecules.
  • What is possible for cells, is also possible for molecules.
  • What is possible for cells, is also possible for molecules.
  • What is possible for cells, is also possible for molecules.
  • Cytokine Secretion Assay is a completely new technology (got a different colour on the slide). Analysis and also enrichment of extremely rare antigen-specific T cells, for example.
  • Cytokine Secretion Assay is a completely new technology (got a different colour on the slide). Analysis and also enrichment of extremely rare antigen-specific T cells, for example.
  • Antigen-specific restimulation leads to cytokine secretion
    Catch reagent forms an artificial surface to catch the cytokine which is secreted. Catch reagent is composed of two antibodies, one of them directed against the cytokine. Labeling with detection antibody. Indirect magnetic labeling is optional for enrichment.
    Without enrichment (no columns): detect frequencies between 0.01-0.1% of total cells.
    With enrichment: detect frequencies down to 0.0001 % (1 cell in 10e6 cells!!)
    In addition, cells stay alive during enrichment and detection and can be taken into culture or used for molecular analysis.
  • Antigen-specific restimulation leads to cytokine secretion
    Catch reagent forms an artificial surface to catch the cytokine which is secreted. Catch reagent is composed of two antibodies, one of them directed against the cytokine. Labeling with detection antibody. Indirect magnetic labeling is optional for enrichment.
    Without enrichment (no columns): detect frequencies between 0.01-0.1% of total cells.
    With enrichment: detect frequencies down to 0.0001 % (1 cell in 10e6 cells!!)
    In addition, cells stay alive during enrichment and detection and can be taken into culture or used for molecular analysis.
  • Antigen-specific restimulation leads to cytokine secretion
    Catch reagent forms an artificial surface to catch the cytokine which is secreted. Catch reagent is composed of two antibodies, one of them directed against the cytokine. Labeling with detection antibody. Indirect magnetic labeling is optional for enrichment.
    Without enrichment (no columns): detect frequencies between 0.01-0.1% of total cells.
    With enrichment: detect frequencies down to 0.0001 % (1 cell in 10e6 cells!!)
    In addition, cells stay alive during enrichment and detection and can be taken into culture or used for molecular analysis.
  • What is possible for cells, is also possible for molecules.
  • NBT stains for alkaline phosphatase
    Introduction:
    In bone marrow (BM) stem and progenitor cells with haematopoietic differentiation potential exist in close proximity to the heterogeneous group of stem cells with nonhaematopoietic (NH) differentiation potential. Marrow stromal cells (MSCs) with the ability to strongly adhere to plastic comprise a heterogeneous population of NH stem cells with broad plasticity. Many attempts have been made to find the most efficient marker for the isolation of these MSCs, such as Stro-1, CD117, CD105, CD271, and anti-fibroblast antigen. CD271+ cells were reported to show a one to three log greater expansion in number of fibroblastic cells and a greater capacity to give rise to adipocyte colonies and induce osteoblastic differentiation, therefore CD271 has become one of the most promising and distinct marker for MSC isolation (Abstract Jones 04/Quirici02).
  • HEA:human epithelial antigen
    (melanoma chondroitin sulfate proteoglycan (MCSP)+
  • Cytokine Secretion Assay is a completely new technology (got a different colour on the slide). Analysis and also enrichment of extremely rare antigen-specific T cells, for example.
  • Cytokine Secretion Assay is a completely new technology (got a different colour on the slide). Analysis and also enrichment of extremely rare antigen-specific T cells, for example.
  • 省时 — 瞬时转染细胞可在2-3小时内被富集,取代了需花费数周去建立一个稳定的细胞系。
     优越的结果 — 经过高达50倍的富集,对转染细胞的研究更为敏感,未转染细胞的背景被明显地减少。
     温和 — 由于极小的微珠是无毒、可生物降解的,转染细胞在分选时不影响其功能和活力。另外,由于使用截断的受体作为分选标志,可避免对细胞功能的影响。直接 — 分选的细胞可直接用于培养或功能检测
    总体适用性 不同的MACSelect 系统均适用2种不同的表面标志进行磁化分选:MACSelect 4系统使用人CD4表面分子,而MACSelect KK试剂盒的载体表达小鼠MHC I类分子H-2KK
  • What is possible for cells, is also possible for molecules.
  • 高纯度—用于灵敏的下游实验
    把目的分子固定于MACS分选柱的磁场中,无需冗长的离心步骤,即可进行有效的洗涤。最后获得高纯度的分子,这对许多后继实验来说非常重要,例如对真核细胞表达的表位标记蛋白的研究,或由纯化的mRNA建立cDNA文库。
    温和—获得理想的分子复合物
    由于避免了离心和重悬过程,在分选柱上的洗涤步骤是非常温和的,因此,该技术用于分选易损分子复合物是十分理想和重要的。例如,需鉴定新的相互作用的分子时,如信号转导通路上的转录因子。
    创新—分选柱上的分子修饰
    在目的分子附着于分选柱时,可有效地对这些分子进行修饰。无论是在室温,还是其它温度,均可加入一些成分,孵育、洗涤,而且能减少目的分子不必要的损失。例如:cDNA合成后可在分选柱上进行mRNA的分选。
  • Picture of the company‘s main building in Bergisch Gladbach near Cologne in Germany
  • Kein Folientitel

    1. 1. 1/1 MD0xxx.01 Miltenyi Biotec: 免疫磁珠分选技术及应 用 德国美天旎生物技术有限公司 北方区技术支持 王卉
    2. 2. MD0197.02 内容 • MACS 技术原理 • MACS 技术设备及分选策略 • 几种特殊的 MACS 分选 分选和分析 DC 细胞 分选各种 T 细胞 分选和分析细胞因子分泌细胞 分选造血干细胞 分选人类肿瘤细胞 分选和分析凋亡和死亡细胞 分选转染细胞 分子生物学和蛋白生化的分选
    3. 3. MD0347.01 MACS 技术原理 MACS(Magnetic Activated Cell Sorting) : = 免疫学 + 细胞生物学 + 磁力学 • 基于抗体对抗原的特异性识别 • 磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上,从而与细胞相连 • 在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的
    4. 4. MD0651.01 MACS® 磁性分选 MACS 微珠进行 磁性标记 未标记的细胞 先行流出 洗脱阳性 分选的细 胞
    5. 5. MD0197.02 分选前标本制备:过滤 MACS 预选滤器: 30µm
    6. 6. MD0197.02 MACS 技术 设备与试剂 » MACS 微珠 » MACS 分选柱 » MACS 分选器 » 详细分选方案 *
    7. 7. MACS 技术 设备与试剂 • MACS 微珠: MACS 微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的 超顺磁化微粒,可用于目的细胞的磁性标记。 • 特性: 50nm 大小 对细胞没有毒性 可生物降解 不影响细胞特性
    8. 8. MD0057.03 MACS 技术分选的 CD8+ T 细胞 微珠
    9. 9. MACS 微珠 直标微珠 多选微珠 间标微珠
    10. 10. MACS 技术 设备与试剂 • MACS 分选柱: 》填充有不同规格的铁珠。 》铁珠表面有亲水包被,不损伤细胞 。 》无菌包装。 》可用于分选多种细胞及亚细胞物质 、 细菌、病毒、 mRNA 和蛋白质。 • 专利产品 • 将磁场扩大 1000 - 10000 倍 ——高纯度,高回收率
    11. 11. MD0061.02 在 MS 柱中产生的强大磁场
    12. 12. • MACS 分选柱: MACS 技术 设备与试剂
    13. 13. • MACS 分选器:从手动到自动,从实验室到临 床 MACS 技术 设备与试剂
    14. 14. • MACS 分选器 MACS 技术 设备与试剂
    15. 15. autoMACS 分选仪 • 9 种程序,一机完成所有细胞分 选 • 成本低,两个可重复使用的分 选柱( 2 周内 100 次) • 快速( 3 - 10 分钟) •重复性好 • 全自动分选,仪器操作简单 • 适用范围广:从少量标本 ( 105 )到大量标本( 4X109 ) ,进样量 0.5ml-50ml • 8 种全血微珠,可以做常见细胞 的全血分选,省去了费时的提取 单个核细胞过程
    16. 16. MACS 技术主要优势 • 小磁珠 : 50 nm (快速、不活化细胞、不沉 淀) • 保留细胞功能(直接进行后续实验;无毒性;氧 化 铁和多聚糖组成,可生物降解) • 与流式细胞仪兼容(不影响细胞光学特性、不影 响荧 光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩 短流 式分选时间) • 快速、简便、无菌 MD0043.02
    17. 17. MACS® 细胞分选策略 • 阳性分选 • 去除分选 • 去除分选后再阳性分选 • 多重分选 MD0044.02
    18. 18. MACS 细胞分选策略 1 、阳性分选: • 根据特异性标志分选细胞 : 阳性分选是指目的细胞磁性 标记 后,作为阳性的标记组分直接分选出来。   • 优点:     》高纯度,尤其是富集稀有的细胞 》高回收率 》操作简便、迅速 MD0044.02
    19. 19. MD016102 阳性分选策略 MACS® 微珠磁 性标记 未标记细胞先行流 出 将分选柱 移出磁场 ,洗脱阳 性分选细 胞
    20. 20. MACS 细胞分选策略 2 、去除分选: • 去除分选是磁性标记非目的细胞,并将其从细胞混合物 中去 除,即未磁性标记的细胞为目的细胞。   • 去除分选策略适用范围: 》去除不需要的细胞 》缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞) 》不需要抗体和目的细胞结合 》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群 MD0044.02
    21. 21. MD0160.02 去除分选 磁性标记 分选未磁性标记细 胞
    22. 22. MACS 细胞分选策略 3 、去除分选后再阳性分选: • 即先去除非目的细胞,再进行阳性分选。   • 适用范围: 》非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。 》要分选非常稀有细胞,先去除非目的细胞再行阳性分 选, 可获得高纯度的目的细胞。 MD0044.02
    23. 23. 1. 去除非 CD4+ T 胞。细 用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠 接磁性间 标 非记 CD4+ T 胞细 磁性分 去除 胞选 标记细 先行流出为 CD4+ T 胞细 2. CD25 微珠直接磁性标记 CD25+ 胞细 性分 胞阳 选靶细 CD4+ CD25+ 性调节 T 滞留在分 柱上, 磁选 离开 场 后洗脱下来 去除后再阳性分选 CD4+ CD25+ 双阳性细 胞
    24. 24. MD0652.01 多选微珠标记 MACS 分选 磁性颗粒的酶解离 终止解离反应 根据第二标 志进行磁珠 标记 MACS 分选 MACS 细胞分选策略 4 、多选微珠:
    25. 25. MACS 畅销机器与分选柱 • MiniMACS starting kit : 1 个分选架、 1 个 MiniMACS 分选器、 1 盒 MS 分选柱、 1 支价值 7500 元试剂( 15088 元):可做阳性分选、小 量标本、间标去除分选、分子生物学分选 • Mini&MidiMACS starting kit : 1 个分选架、 1 个 MiniMACS 分选 器、 1 个 MidiMACS 分选器、 1 盒 MS 分选柱、 1 盒 LS/LD 分选柱、 1 支价值 7500 元试剂( 27838 元):可做阳性分选和去除分选 • MS 分选柱: 1 盒 25 个, 2763 元 • LS 分选柱: 1 盒 25 个, 4356 元 • LD 分选柱: 1 盒 25 个, 5100 元 • uMACS 与 u 或者 M 分选柱:分子生物学分选 • VarioMACS 分选仪 • autoMACS 自动分选仪、 CliniMACS 分选仪 MD0044.02
    26. 26. MACS 几种畅销磁珠与抗体 • 专利产品: CD133 、 CD303 、 CD304 • 特殊产品:人类 DC 系列: BDCA-1(CD1c) 、 BDCA-2(CD303) 、 BDCA-3(CD141) 、 BDCA- 4(CD304) 小鼠 DC 系列: mPDCA 微珠与抗体 干细胞产品: CD133 、 CD271 微珠与抗体 细胞因子分泌细胞: CSA 分选与分析 TH2 细胞: CD294(CRTH) 微珠与抗体 分选人类肿瘤细胞:上皮肿瘤: CK 、 HEA 非血液肿瘤: CD45 去除 死亡细胞去除试剂盒 分选转染细胞 分选 HIV 病毒、 mRNA 、 cDNA • top ten : CD133 、 CD34 、人 CD4+CD25+ 、小鼠 CD4+CD25+ CD303/CD304 、人类 NK 、小鼠 CD11c 、 anti-PE 微珠 小鼠干细胞试剂盒(系别阴性+ CD117 )、 CD4/CD8 MD0044.02
    27. 27. 主要竞争对手分析 Dynal :大磁珠 主要市场: CD4 、 CD8 等高频细胞, 优势:价格 劣势:回收率低(不能做低频细胞、弱表达细胞分选 ) 磁珠必需剪切(耗时——细胞状态不佳) 大磁珠(活化细胞) 我们的优势:纯度高、回收率高、细胞活性好 不活化细胞,不改变细胞功能 省时、省细胞 产品品种最多,有专利产品 有手动、自动、临床级产品 有强大的技术支持队伍 很好的声誉,市场占有率最高 MD0044.02
    28. 28. 主要卖点 干细胞产品:人类: CD133 、 CD34 、 MSC 试剂盒 ( CD271 ) 小鼠:系别阴性试剂盒、 CD117 微珠 定向分化培养基 DC 产品: 人类: BDCA-1 、 BDCA-2/4 小鼠: CD11c NK 产品: 人类: NK 细胞阴选试剂盒、 CD3/CD56 T 细胞产品: CD4+CD25+ 调节性 T 细胞(人和小鼠) CSA 系列 CD4 、 CD8 微珠及阴选试剂盒 B 细胞产品: CD19 微珠及阴选试剂盒 肿瘤细胞分选:癌细胞富集试剂盒、 HEA 微珠、 CD45 阴选 单核细胞分选: CD14 微珠及阴选试剂盒 间标微珠 死细胞去除试剂盒 预选滤器、 FCR 阻断剂、 T 细胞活化与扩增试剂盒 流式细胞仪抗体(价廉、包装量大、优质) MD0044.02
    29. 29. 识别 DC 和 DC 亚群 New LineageLineage-- (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56) HLA-DRHLA-DR++ PDCPDC CD11cCD11c-- CD123CD123++ BDCA-2BDCA-2(CD303)(CD303)++ BDCA-4BDCA-4(CD304)(CD304)++ CD123CD123lowlow CD123CD123-- CD11cCD11c++ CD123CD123low/-low/- MDCMDC MDC1MDC1 MDC2MDC2 BDCA-1(CD1c)BDCA-1(CD1c)++ BDCA-3(CD141)BDCA-3(CD141)+ ++ + DC 亚群特异性标志 : Blood Dendritic Cell Antigens BDCA-2/4BDCA-2/4++ BDCA-1BDCA-1++ BDCA-3BDCA-3++
    30. 30. CD11cCD11c++ DCDC CD8CD8++ DCDC CD4CD4++ DCDC CD11cCD11c++ B220B220++ Gr-1 (Ly-6C/G)Gr-1 (Ly-6C/G)++ DCDC CD11cCD11c++ B220B220-- DCDC Conventional DCConventional DC (“lymphoid“ DC)(“lymphoid“ DC) (“myeloid“ DC)(“myeloid“ DC) CD11c CD8aCD11c CD8a CD11c CD4CD11c CD4 PE FITC APC CD11cCD11c CD11c B220 Gr-1CD11c B220 Gr-1 Plasmacytoid DC (PDC)Plasmacytoid DC (PDC) mPDCA-1mPDCA-1 MACS® 技术分选与分析小鼠 DC 细胞 New
    31. 31. MACS® 技术分选与分析大鼠 DC 细胞 New MD0044.02 Anti-DC(OX62) 微珠 • 用于从大鼠外周血、淋巴和非淋巴组织中分选或者去 除 OX62+ DC 。 • 单克隆抗体 OX62 识别表达于大部分大鼠 DC 上的整 合素 αE2 亚单位(分子量 150kDa )。 • 两个主要的树突状细胞亚群: CD4/OX41 双阳性和 CD4/OX41 双阴性亚群。 • 该抗原也表达于表皮 TCRα/β+ 或 γ/δ+ 的 T 细胞亚群 和垂体前叶星状滤泡样( S100+ )细胞的一个亚群,但 在朗格罕氏细胞和巨噬细胞上不表达。
    32. 32. MACS® 技术分选与分析功能性 T 细胞 MD0044.02 T h Ï ¸° û£ ¨C D 4 £ © T c Ï ¸° û£ ¨C D 8 £ © µ ÷½ ÚÐ ÔT Ï ¸° û(C D 4 + C D 2 5 + ) T C R r/d Ï ¸° û(T C R r/d Î ¢Ö é) N K /T Ï ¸° û(C D 5 6 ¶ àÑ ¡Î ¢Ö é£ «C D 3 Î ¢Ö é) T细 胞 亚 群 N a iv e T Ï ¸° û(C D 4 5 R O Ò õÑ ¡) » î» ¯T Ï ¸° û£ ¨C D 6 9 ¡ ¢C D 2 5 ¡ ¢C D 3 0 £ © Ð §Ó ¦T Ï ¸° û£ ¨C D 2 7 £ © ¼ ÇÒ äT Ï ¸° û£ ¨C D 4 5 R A Ò õÑ ¡¡ ¢C D 4 5 R O Ñ ôÑ ¡£ © T h 2 Ï ¸° û(a n ti-C R T H 2 ) T细 胞 功 能 亚 群 IF N -r IL -2 IL -4 IL -1 0 T N F -a ¿ ¹Ô -Ì ØÒ ìÐ ÔT Ï ¸° û T细 胞 分 选
    33. 33. MD0420.02 MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选 New 抗原特异性 再刺激 细胞因子 分泌阶段 捕获试剂 标记 荧光标记和 磁性分选 • ••• Catch Reagent Detection Antibody Anti-PE MicroBeads cytokine secreting cell secreted cytokine
    34. 34. MD0420.02 MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选 New 分选前 刺激组 分选后 未刺激组 * 百分比均为占 CD4 + 细胞百分比
    35. 35. MD0420.02 MACS® 细胞因子分泌细胞分析 New 刺激组 未刺激组 使用 PE- CMVpp65/HLA/A2- tetramers 和 IFN-γ Secretion Assay - Detection Kit (APC) or IL-2 Secretion Assay - Detection Kit (APC) 检测 HLA/A2 CMV+ 患者 PBMC 。 * 百分比均为占 CD8 + 细胞百分比
    36. 36. 人类细胞因子分泌细 胞分选与检测试剂 盒 • IFN-γ 分泌细胞 • IL-2 分泌细胞 • IL-4 分泌细胞 • IL-10 分泌细胞 • TNF-α 分泌细胞 MACS® 细胞因子分泌细胞分析与分选 New 小鼠细胞因子分泌细胞 分选与检测试剂盒 • IFN-γ 分泌细胞 • IL-2 分泌细胞 • IL-4 分泌细胞 • IL-5 分泌细胞 • IL-10 分泌细胞
    37. 37. 人类干细胞分选微珠与试剂盒 • CD34 微珠及多选微珠:用于从骨髓、外周血、脐带血中 分选 造血干细胞、内皮前体细胞 • CD133 微珠:用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、内皮前体细胞、多能成体干细胞 ( MAPC ) • CD117 微珠:用于从骨髓、外周血、脐带血中分选 造血干细胞、骨髓间充质细胞 • CD45/GlyA 去除分选试剂盒:用于从骨髓中阴选分选 多能成体干细胞( MAPC ) • CD105 微珠:用于从骨髓中分选间充质细胞 • 抗成纤维细胞微珠:用于从骨髓中分选间充质细胞 多能成体干细胞( MAPC ) MD0044.02
    38. 38. MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR)new 成分 : 分选 : •CD271 (LNGFR)-APC •Anti-APC MicroBeads •FcR Blocking 培养 : •NH Expansion Medium (2x500 mL) •CytoMix - CD271 (LNGFR) 质量控制 : •NH AdipoDiff Medium (12x8 mL) •NH OsteoDiff Medium (12x5 mL) Introductoryoffer
    39. 39. Ads in Blood (April & Mai) MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR) 人类 MSC 的标准化研究 CD271 又叫做低亲和力神经生长因 子受体 (LNGFR), 是迄今为止发现的 最佳 MSC 分选标志,可用于直接从 人类骨髓中分选 MSC 。 分选后 CD271 (LNGFR)+ MSCs 是一群 均一的 MSC 细胞群,而 CD271 阴性 细胞成分中没有成纤维细胞克隆形 成单位 (CFU-F) 活性。 与贴壁培养的 MSC 相比, CD271 分 选的 MSC 增殖能力增强 10 - 1000 倍。 CD271 分选和扩增的 MSC 保留 了多系分化潜能,具有分化为脂肪 细胞和成骨细胞、软骨细胞、内皮 细胞的可塑性。 cumulative population doubling (CPD)
    40. 40. Ads in Blood (April & Mai) MSC Research Tool Box - CD271 (LNGFR) 人类 MSC 的标准化研究 Nadia Quirici 等, Experimental Hematology 30 (2002) 783–791
    41. 41. MACS 小鼠干 胞分 盒细 选试剂 : Lineage Cell Depletion Kit: 去除成熟 和分化的造血 胞, 富集造血干祖细 预 胞。细 CD117 MicroBeads :分 早期和选 晚 期干祖 胞。细 Anti-Sca-1 MicroBeads :分 造血干选 胞和早期造血祖 胞。细 细 CD117+Sca-1+lin– 胞也有非造血分细 化潜能,如分化 肌 胞、内皮 胞为 细 细 、肝 胞、神 系 胞。细 经 统细 CD45/Ter119 微珠去除分 骨髓 胞选 细 ,可以得到 MAPCs, 也有体外分化为 多 胞的潜能。种细 小鼠骨髓造血干 胞细 (HSC) 定义 为 Sca-1+ 、 CD117+ (c-kit) 、 Thy- 1low 和 lin- 胞细 .
    42. 42. MACS® 技术分选人类肿瘤细胞 New MD0044.02 •上皮肿瘤细胞 根据表面抗原进行分选与分析: Anti-HEA (EpCAM) MicroBeads Anti-ErbB-2 (HER-2/neu) MicroBeads 根据细胞内细胞角蛋白分选与分析: cytokeratin •黑色素瘤细胞分选: Anti-melanoma MicroBeads •其它非造血系统肿瘤细胞 : CD45 MicroBeads 去除白细 胞 •骨髓瘤细胞: CD138 MicroBeads •霍奇金氏淋巴瘤 /RS 细胞: CD30 MicroBeads
    43. 43. MACS® 技术分选凋亡细胞 New MD0044.02 刺激、分化、凋亡、脱颗粒、坏死 PS 暴露 PS 暴露细胞被 AnnexinV 微珠磁性标记 磁性标记细胞滞留在分选柱上 PS 暴露细胞被洗脱下来
    44. 44. MACS® 技术分选转染细胞 New MD0044.02 应用于功能基因、信号转导研究、药物筛选和标记技 术。 MACSelect4 转染细胞分选 试剂盒使用 pMACS4.1 和 自己的质粒 转染细胞 用 MACSelect4 微珠标记转 染细胞 MACS 分选转 染细胞 分选后细 胞可用于 培养或者 分析
    45. 45. MACS® 技术分选转染细胞 New MD0044.02 优点: 省时:只需 2-3 小时(建立一个稳定的细胞系需数周 ) 纯度高,背景低   不影响转染细胞功能和活力 分选的细胞可直接用于培养或功能检测 可用于:原代细胞 & 细胞系 贴壁 & 悬浮细胞 稳定 & 短暂转染
    46. 46. MACS® 分子生物学和蛋白生化的分选 • 表位蛋白分选: µMACS 抗 His-, HA-, c- myc-, GFP- , GST- 蛋白分选 . • 生物素化分子及其靶位分选: µMACS 链霉亲和素微珠 • µMACS 免疫沉淀: µMACS 蛋白 A 、蛋白 G 微珠 • mRNA 分选: 从细胞、组织、外周血 、 总 RNA 中分选 mRNA MD0044.02
    47. 47. MACS® 分子生物学和蛋白生化的分选 优点: • 分选柱上固定:高纯度利于灵敏的后续实验 作用温和,可获得理想的分子复 合物 分选柱上分子修饰,可以减少细胞损失 • MACS 微珠: 敏感,可用于极少量的目的分子 快速:分选 mRNA 仅需 15 分钟 免疫沉淀只需 1-2 小时 一步法 cDNA 合成仅需 90 分钟 MD0044.02
    48. 48. Miltenyi Biotec GmbH (headquarter)

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