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Parte 03 del Módulo IV del Diplomado en Hematología y Banco de Sangre.
Ponente: Dr. Carlos Esquerre Aguirre
Fecha: 13 de Setiembre de 2015. Trujillo - Perú.

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3 Pruebas pretransfusionales

  1. 1. DIPLOMADO EN HEMATOLOGÍA Y BANCO DE SANGRE MÓDULO IV (13 de Setiembre de 2015) CLASE 3
  2. 2. PRUEBAS PRETRASFUSIONALES 2
  3. 3. DEFINICION Las pruebas prestransfuncionales son pruebas inmunohematologicas cuyo principio es la hemaglutinación y su objetivo principal es evitar la destrucción intravascular de los hematíes en un receptor. Objetivo: Transfundir al paciente hemoconponentes de excelente calidad , para evitar el contagio de enfermedades infeccionas y reacciones postransfuncionlaes. 3
  4. 4. PRINCIPIOS INMUNOLOGICOS DE LA TRASFUSION • Las células sanguíneas , eritrocitos, leucocitos y plaquetas( en su membrana tiene proteínas o polisacáridos que pueden actuar con Ag y provocar Ac en las personas que carecen de ellos. • Al .Antieritrocitario : Ac contra Ag ERITROCITARIOS. • Al. Antiplaquetaria : Ac contra Ag de las PLAQUETAS. • A Este fenómeno se le denomina aloinmunizacion. 4
  5. 5. Los Ac pueden aparecer de forma natural ( los Ac contra Ag del sistema ABO que aparecen en todos los individuos) o provocados por trasfusión o embarazo. A los Ac Aloinmunes contra Ag eritrocitarios diferentes a los del sistema ABO , se les denomina ANTICUERPOS IRREGULARES. La destrucción de las células trasfundidas que son causadas por los Ac del receptor es una reacción inmunológica del organismo. 5
  6. 6. • Consecuencia clínica de la aloinmunizacion Depende el tipo de Ac( IgG o Ig M ). • Los Ac ERITROCITARIOS producen reacción hemolítica inmediata grave ( Ac ABO). • MENOS grave o retardada ( Ac frente a otros Ag) y enfermedad hemolítica del recién nacido. • EN caso de Ac anti plaquetaria puede provocar reacciones febriles transfusionales, refractariedad plaquetaria ( Ac HLA o propios de las plaquetas ) y purpura neonatal inmune. 6
  7. 7. PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD (Pcom) • Sirve para evitar la reacción hemolítica aguda y aseguran la compatibilidad entre donante- receptor. • Las pruebas analíticas de laboratorio detectan posibles Ac en el receptor con Ag de las células trasfundidas: - Grupo sanguíneo y RH - Detención de anticuerpos irregulares - Pruebas cruzadas mayor o menor según sea el caso. 7
  8. 8. • Lo mas común se realiza entre el suero del receptor y células rojas del donante e investigan la presencia de posibles Ac en suero mediante su reacción en diferentes medios físicos - químicos. • Para detención de una reacción hemolítica en casos de incompatibilidad eritrocitaria y la facilidad técnica para realizar la Pcom con hematíes , estas se llevan acabo en los casos de la transfusión . 8
  9. 9. GRUPO SANGUINEO • Los grupos sanguíneos se dividen en: Grupo hemático, constituido por Ag eritrocitarios Grupo sérico, constituido por Ac antieritrocitarios Estos grupos constituyen el sistema ABO y el sistema RH . • Otros grupos sanguíneos: Sistema MNS, Sistema Duffy, Sistema P, Sistema Lutheran (Lu), Sistema Kell, Sistema Lewis, Sistema Kidd (Jk), Sistema Fisher, Sistema I. 9
  10. 10. SISTEM ABO 10
  11. 11. FACTOR RH • Es una proteína adicional que puede estar presente en la membrana de los hematíes . • Cuando una persona tiene esta proteina se le considera RH positivo pero si esta ausente RH negativo. • El RH esta constituido por un complejo de seis antígenos fundamentales, formados por tres pares de genes alelos : - Cc - Dd - Ee 11
  12. 12. El antígeno de mayor poder de sensibilizacion es el D y le sigue en importancia el e y el E. 12
  13. 13. ANTIGENO DU • Ag DU : Es una variable débil del Ag D, poco frecuente pero es común en los individuos de raza Negra(22%). Este Ag da reacciones débiles o Negativas con el Ac anti – D siendo detectado por la prueba indirecta de la antiglobulina Coombs. • Clasificación: - Variante Du debil - Du adquirido - Du hereditario 13
  14. 14. Técnica DU • Verificar grupo Rh (-) • Lavar 3 veces GR del paciente a 1000 r.p.m por1 min. • Tubo : Agregar dos gotas de suspensión de GR al 5 % del paciente + 2 gotas de Anti D . Mezclar y centrifugar a 1000 r.p.m por 1 min. • Incubar a 37 ºc por 30 min. • Centrifugar • Lavar 3 veces con S.S.F • En el tercer lavado decantar el sobrenadante , agregar 2 gotas de Ig GC3d centrifugar y observar. 14
  15. 15. INTERPRETACION • AGLUTINACION: POSITIVO • NO AGLUTINA :NEGATIVO 15
  16. 16. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO ABO/RH • A) DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO EN TUBO: • Objetivo: Detención de grupos sanguíneos. 1)Se coge tres tubos de ensayo y se rotulan con :A ,B y D. 2 ) Con ayuda de una pipeta Pasteur se echa una gota de sangre diluida al 5% en cada tubo . 3) Se añade 1 gotas de Rvo Anti A al tubo A , B al tubo B Y Anti D al tubo D. 4) Se mezcla centrifuga por 1min. A 1000 r.p.m observar aglutinación. 16
  17. 17. Interpretación: : Presencia de aglutinación la reacción un botón en la base del tubo indica positivo en este caso A POSITIVO 17
  18. 18. PRUEBA SERICA ,INVERSA O REVERSA • Su principio es la hemaglutinación y su objetivo es determinar la presencia o ausencia de Ac Anti A y Anti B en suero es una confirmación cruzada del grupo globular directo. PREPARACION: • Seleccionar GR del grupo A y GR del grupo B. • Lavar 3 veces con S.S.F a 1000 r.p.m por 1 min. • Hacer dilución al 2 – 5 % con S.S.F. 18
  19. 19. METODO EN FASE SERICA • Rotular 2 tubos como A y B • Agregar 2 gotas (100 ul) de suero del paciente a cada tubo. • Al tubo A agregar 1 gota ( 50ul) de células A y al tubo B , También y mezclar. • Centrifugar por 1 min. 1000 r.p.m • Observar: SI hay aglutinación y/o hemolisis , re suspendiendo el botón de células del fondo del tubo. • Estabilidad al 100% 48 horas a 4 °c. 19
  20. 20. GRUPO INVERSO EN TARJETA • AGLUTINACION :APOSITIVO igual 4+ • AUSENCIA DE AGLUTINACION : NEGATIVO 20
  21. 21. FENOTIPIFICACION DE RH 21
  22. 22. PRUEBAS CRUZADAS 22
  23. 23. 23
  24. 24. CONCEPTO 24
  25. 25. • Los hematíes y el suero deben ser incubados el tiempo suficiente para que puedan reaccionar incluso Ac muy poco potentes. • Para preparar la suspensión de hematíes del donante se utiliza sangre contenida en los segmentos de la bolsa. 25
  26. 26. • Para realizar la prueba se rotulan dos tubos en cada uno se coloca 1 Gota de suspensión al 5% de hematíes del donante y dos gotas de suero del receptor. FASE I • Añadir 2 gotas de suero del receptor . • Agregar : una gotas de suspensión de eritrocitos al 5 % donante . • Centrifugar 1000 r.p.m por un 1 min. • INTERPRETACION: aglutinación o POSITIVO ( detener la prueba) o NEGATIVO continuar Fase II 26
  27. 27. FASE II • Agregar 2 gotas de albumina y mezclar. • Incubar 37 °c durante 30 min. • Centrifugar 1000 r.p.m • INTERPRETACION: AGLUTINACION • POSITIVO( detener la reacción ) • NEGATIVO continuar FASE III 27
  28. 28. FASE III • Tubo lavar 3 veces con SSF a 3000 r.p.m durante 2 min. • Luego desechar el sobrenadante • Agregar 2 gotas reactivo control globina poliespecifico Ig g C3d . • Centrifugar por 1 mi. a 1000 r.p.m inmediatamente observar. • Interpretacion: AGLUTINACION o POSITIVO ( detener la prueba ) o NEGATIVO (compatible) 28
  29. 29. INTERPRETACION • La PRUEBA es compatible si no hay aglutinación y indica incompatibilidad ya que significa que algún Ac del suero se ha unido a los eritrocitos del donante. 29
  30. 30. 30
  31. 31. CONCEPTO 31
  32. 32. • Detecta anticuerpos irregulares en el suero del donador y ratifica algún error de clasificación ABO/Rh. 32
  33. 33. 33

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