1.
DIPLOMADO EN HEMATOLOGÍA Y
BANCO DE SANGRE
MÓDULO IV (13 de Setiembre de 2015)
CLASE 3

2.
PRUEBAS PRETRASFUSIONALES
2

3.
DEFINICION
Las pruebas prestransfuncionales son
pruebas inmunohematologicas cuyo
principio es la hemaglutinación y su objetivo
principal es evitar la destrucción
intravascular de los hematíes en un
receptor.
Objetivo: Transfundir al paciente
hemoconponentes de excelente calidad ,
para evitar el contagio de enfermedades
infeccionas y reacciones
postransfuncionlaes. 3

4.
PRINCIPIOS INMUNOLOGICOS
DE LA TRASFUSION
• Las células sanguíneas , eritrocitos, leucocitos y
plaquetas( en su membrana tiene proteínas o
polisacáridos que pueden actuar con Ag y
provocar Ac en las personas que carecen de
ellos.
• Al .Antieritrocitario : Ac contra Ag
ERITROCITARIOS.
• Al. Antiplaquetaria : Ac contra Ag de las
PLAQUETAS.
• A Este fenómeno se le denomina
aloinmunizacion. 4

5.
Los Ac pueden aparecer de forma natural ( los Ac
contra Ag del sistema ABO que aparecen en todos
los individuos) o provocados por trasfusión o
embarazo.
A los Ac Aloinmunes contra Ag eritrocitarios
diferentes a los del sistema ABO , se les denomina
ANTICUERPOS IRREGULARES.
La destrucción de las células trasfundidas que
son causadas por los Ac del receptor es una reacción
inmunológica del organismo.
5

6.
• Consecuencia clínica de la aloinmunizacion
Depende el tipo de Ac( IgG o Ig M ).
• Los Ac ERITROCITARIOS producen reacción
hemolítica inmediata grave ( Ac ABO).
• MENOS grave o retardada ( Ac frente a
otros Ag) y enfermedad hemolítica del
recién nacido.
• EN caso de Ac anti plaquetaria puede
provocar reacciones febriles transfusionales,
refractariedad plaquetaria ( Ac HLA o
propios de las plaquetas ) y purpura
neonatal inmune.
6

7.
PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD (Pcom)
• Sirve para evitar la reacción hemolítica aguda
y aseguran la compatibilidad entre donante-
receptor.
• Las pruebas analíticas de laboratorio detectan
posibles Ac en el receptor con Ag de las
células trasfundidas:
- Grupo sanguíneo y RH
- Detención de anticuerpos irregulares
- Pruebas cruzadas mayor o menor según sea el
caso.
7

8.
• Lo mas común se realiza entre el suero
del receptor y células rojas del donante
e investigan la presencia de posibles
Ac en suero mediante su reacción en
diferentes medios físicos - químicos.
• Para detención de una reacción
hemolítica en casos de
incompatibilidad eritrocitaria y la
facilidad técnica para realizar la Pcom
con hematíes , estas se llevan acabo
en los casos de la transfusión .
8

9.
GRUPO SANGUINEO
• Los grupos sanguíneos se dividen en:
Grupo hemático, constituido por Ag eritrocitarios
Grupo sérico, constituido por Ac antieritrocitarios
Estos grupos constituyen el sistema ABO y el sistema
RH .
• Otros grupos sanguíneos:
Sistema MNS, Sistema Duffy, Sistema P, Sistema
Lutheran (Lu), Sistema Kell, Sistema Lewis,
Sistema Kidd (Jk), Sistema Fisher, Sistema I.
9

10.
SISTEM ABO
10

11.
FACTOR RH
• Es una proteína adicional que puede estar
presente en la membrana de los hematíes .
• Cuando una persona tiene esta proteina se le
considera RH positivo pero si esta ausente RH
negativo.
• El RH esta constituido por un complejo de seis
antígenos fundamentales, formados por tres pares
de genes alelos :
- Cc
- Dd
- Ee
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12.
El antígeno de mayor poder de
sensibilizacion es el D y le sigue en
importancia el e y el E.
12

13.
ANTIGENO DU
• Ag DU : Es una variable débil del Ag D, poco
frecuente pero es común en los individuos de raza
Negra(22%). Este Ag da reacciones débiles o
Negativas con el Ac anti – D siendo detectado por
la prueba indirecta de la antiglobulina Coombs.
• Clasificación:
- Variante Du debil
- Du adquirido
- Du hereditario
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14.
Técnica DU
• Verificar grupo Rh (-)
• Lavar 3 veces GR del paciente a 1000 r.p.m por1
min.
• Tubo : Agregar dos gotas de suspensión de GR al 5
% del paciente + 2 gotas de Anti D . Mezclar y
centrifugar a 1000 r.p.m por 1 min.
• Incubar a 37 ºc por 30 min.
• Centrifugar
• Lavar 3 veces con S.S.F
• En el tercer lavado decantar el sobrenadante ,
agregar 2 gotas de Ig GC3d centrifugar y observar.
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15.
INTERPRETACION
• AGLUTINACION: POSITIVO
• NO AGLUTINA :NEGATIVO
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16.
DETERMINACION DE GRUPO
SANGUINEO ABO/RH
• A) DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO EN
TUBO:
• Objetivo: Detención de grupos sanguíneos.
1)Se coge tres tubos de ensayo y se rotulan con :A ,B
y D.
2 ) Con ayuda de una pipeta Pasteur se echa una
gota de sangre diluida al 5% en cada tubo .
3) Se añade 1 gotas de Rvo Anti A al tubo A , B al
tubo B Y Anti D al tubo D.
4) Se mezcla centrifuga por 1min. A 1000 r.p.m
observar aglutinación.
16

17.
Interpretación: :
Presencia de aglutinación
la reacción un botón en la
base del tubo indica
positivo en este caso A
POSITIVO
17

18.
PRUEBA SERICA ,INVERSA O
REVERSA
• Su principio es la hemaglutinación y su objetivo es
determinar la presencia o ausencia de Ac Anti A y
Anti B en suero es una confirmación cruzada del
grupo globular directo.
PREPARACION:
• Seleccionar GR del grupo A y GR del grupo B.
• Lavar 3 veces con S.S.F a 1000 r.p.m por 1 min.
• Hacer dilución al 2 – 5 % con S.S.F.
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19.
METODO EN FASE SERICA
• Rotular 2 tubos como A y B
• Agregar 2 gotas (100 ul) de suero del paciente a
cada tubo.
• Al tubo A agregar 1 gota ( 50ul) de células A y al
tubo B , También y mezclar.
• Centrifugar por 1 min. 1000 r.p.m
• Observar: SI hay aglutinación y/o hemolisis , re
suspendiendo el botón de células del fondo del
tubo.
• Estabilidad al 100% 48 horas a 4 °c.
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20.
GRUPO INVERSO EN TARJETA
• AGLUTINACION :APOSITIVO igual 4+
• AUSENCIA DE AGLUTINACION : NEGATIVO
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21.
FENOTIPIFICACION DE RH
21

22.
PRUEBAS CRUZADAS
22

23.
23

24.
CONCEPTO
24

25.
• Los hematíes y el suero deben ser incubados el
tiempo suficiente para que puedan reaccionar
incluso Ac muy poco potentes.
• Para preparar la suspensión de hematíes del
donante se utiliza sangre contenida en los
segmentos de la bolsa.
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26.
• Para realizar la prueba se rotulan dos tubos
en cada uno se coloca 1 Gota de
suspensión al 5% de hematíes del donante y
dos gotas de suero del receptor.
FASE I
• Añadir 2 gotas de suero del receptor .
• Agregar : una gotas de suspensión de
eritrocitos al 5 % donante .
• Centrifugar 1000 r.p.m por un 1 min.
• INTERPRETACION: aglutinación
o POSITIVO ( detener la prueba)
o NEGATIVO continuar Fase II
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27.
FASE II
• Agregar 2 gotas de albumina y
mezclar.
• Incubar 37 °c durante 30 min.
• Centrifugar 1000 r.p.m
• INTERPRETACION: AGLUTINACION
• POSITIVO( detener la reacción )
• NEGATIVO continuar FASE III
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28.
FASE III
• Tubo lavar 3 veces con SSF a 3000 r.p.m durante 2
min.
• Luego desechar el sobrenadante
• Agregar 2 gotas reactivo control globina
poliespecifico Ig g C3d .
• Centrifugar por 1 mi. a 1000 r.p.m inmediatamente
observar.
• Interpretacion: AGLUTINACION
o POSITIVO ( detener la prueba )
o NEGATIVO (compatible)
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29.
INTERPRETACION
• La PRUEBA es compatible si no hay aglutinación y
indica incompatibilidad ya que significa que algún
Ac del suero se ha unido a los eritrocitos del
donante.
29

30.
30

31.
CONCEPTO
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32.
• Detecta anticuerpos irregulares
en el suero del donador y ratifica
algún error de clasificación
ABO/Rh.
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33.
33