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DIPLOMADO EN HEMATOLOGÍA Y
BANCO DE SANGRE
MÓDULO IV (13 de Setiembre de 2015)
CLASE 1
ASPECTOS GENERALES DE LA
INMUNOHEMATOLOGIA
Dr. Carlos Esquerre Aguirre
FUNDAMENTOS DE LA
INMUNOGENETICA
La inmunogenética es la rama de la genética que estudia
factores genéticos que controlan ...
ALELOS
• Son los responsables de la especificidad de los antígenos.
Por ejemplo: los antígenos principales del sistema ABO...
LA INMUNOHEMATOLOGÍA
Es la parte de la hematología que estudia procesos
inmunitarios que tienen lugar en el organismo en
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ANTÍGENO
ANTICUERPO
Los antígenos de los grupos
sanguíneos pueden ser proteínas o
glicoproteínas estructurales de
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• Constituyen alrededor del 73% de las
inmunoglobulinas totales.
• Por su tamaño, atraviesan con facilidad la
placenta, pu...
PRINCIPIOS DE LA REACCIÓN ANTÍGENO
- ANTICUERPO
En las reacciones antígeno-anticuerpo se distinguen 2 fases:
• La primera ...
Características de la reacción
antígeno anticuerpo
REVERSIBILIDAD: Dado que la reacción
se debe a fuerzas no covalentes es...
La mayoría de las técnicas empleadas en banco
de sangre para detectar las reacciones
antígeno – anticuerpo se basan en :
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HEMOLISIS
La hemolisis de los eritrocitos mediada por inmunidad, depende
de:
• La clase de Inmunoglobulina
• La capacidad ...
AGLUTINACIÓN
Anticuerpo
Los antígenos situados en
la membrana de los
hematíes reaccionan con
los anticuerpos y el
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Se definen en dos fases:
1. Sensibilización: Unión de anticuerpos con antígeno, es
reversible y la fuerza de unión depende...
2. Aglutinación:
Se debe al entrecruzamiento que los Ac facilitan
entre las células.
La aglutinación de GR cubiertos tanto...
• La aglutinación de glóbulos rojos en suspensiones
fisiológicas puede ocurrir por dos mecanismos
básicos:
Aglutinación
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Aglutinación especifica
Partiendo del concepto que una suspensión de glóbulos rojos en
soluc. Salina fisiológica constituy...
Aglutinación inespecífica
• Llamado fenómeno de panaglutinación
• Los glóbulos rojos (no sensibilizados por los anticuerpo...
Proceso físico - químico de la
aglutinación
El factor mas importante en este proceso es:
“La distancia media que separa lo...
POTENCIAL ZETA
La diferencia del potencial eléctrico creado entre la doble capa de iones
positivos cerca del glóbulo y el ...
Por ello, al considerar la aglutinación especifica de los hematíes hay que tener
en cuenta, como mínimo tres variables:
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En la ausencia de agentes
aglutinantes, la fuerza de
repulsión predomina y mantienen
la suspensión globular estable en
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El potencial zeta de un sistema puede ser cambiado de dos
maneras:
1. Por la reducción de la carga eléctrica de la membran...
Factores que intervienen en la reacción
antígeno - anticuerpo
• Disminución del potencial Z.
• Tipo de inmunoglobulina.
• ...
PH
• La mejor sensibilización se logra a un pH entre 6 – 8
• Fuera de estos limites se puede observar hemolisis de los
G.R...
PROPORCIÓN Ag/Ac
 La sensibilidad del test se incrementa
cuando la concentración del anticuerpo
es más alta que la del an...
CAMBIOS EN LA FUERZA IONICA DEL MEDIO
• Es determinado por la cantidad de iones Na+ y Cl-. El plasma
tiene alta concentrac...
Factores que interviene en la aglutinación
Puede ser alterado por la
variación de la carga de los
hematíes o por la variac...
TÉCNICAS SEROLÓGICAS
Esenciales para la detección e
identificación de aloanticuerpos,
antianticuerpos, fenotipaje de GR,
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Técnicas de producción artificial de la
aglutinación de. G.R
Los principales elementos para producir aglutinación son:
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Enzimas proteolíticas:
La tripsina, la papaína, la bromelina y ficina son las
principales enzimas proteolíticas, capaces d...
TRATAMIENTO DE HEMATIES POR
ENZIMAS PROTEOLITICAS
Hematies Potencial Zeta(mv) Reduccion del
potencial Z(%)
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PRUEBAS SEROLOGICAS PARA
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1 Inmunohematologia

Parte 01 del Módulo IV del Diplomado en Hematología y Banco de Sangre.
Ponente: Dr. Carlos Esquerre Aguirre
Fecha: 13 de Setiembre de 2015. Trujillo - Perú.

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1 Inmunohematologia

  1. 1. DIPLOMADO EN HEMATOLOGÍA Y BANCO DE SANGRE MÓDULO IV (13 de Setiembre de 2015) CLASE 1
  2. 2. ASPECTOS GENERALES DE LA INMUNOHEMATOLOGIA Dr. Carlos Esquerre Aguirre
  3. 3. FUNDAMENTOS DE LA INMUNOGENETICA La inmunogenética es la rama de la genética que estudia factores genéticos que controlan la respuesta inmunitaria, así como la expresión de otras características hereditarias de naturaleza antigénica, incluyendo los antígenos de los grupos sanguíneos, FORMA LA BASE DE LA GENETICA.
  4. 4. ALELOS • Son los responsables de la especificidad de los antígenos. Por ejemplo: los antígenos principales del sistema ABO son: A, B y O y sus alelos son: A1 B1 O1. CROMOSOMAS • Son estructuras organizadas compuestas de ADN • En ellos se encuentra el código genético para la producción de sustancias particulares de grupos sanguíneos y otras características. • La parte del cromosoma que posee el código para la sucesión de ácidos aminados se llaman ALELOS. • Durante la reproducción cada gameto cede al nuevo organismo un conjunto de cromosomas (23 pares cromosomas). ABO 9q34.1 – q34.2 ABO Rh 1p36.2 – p34 RHD/RHCE
  5. 5. LA INMUNOHEMATOLOGÍA Es la parte de la hematología que estudia procesos inmunitarios que tienen lugar en el organismo en relación con los elementos sanguíneos. Uno de los aspectos más importantes de la inmunohematología es el estudio y cuantificación de los grupos sanguíneos eritrocitarios que son componentes antigénicos presentes en la superficie de los hematíes, ya que se relaciona directamente con la terapéutica transfusional y la prevención de accidentes hemolíticos graves.
  6. 6. ANTÍGENO ANTICUERPO Los antígenos de los grupos sanguíneos pueden ser proteínas o glicoproteínas estructurales de membrana del eritrocito. • Llamadas también inmunoglobulinas, son proteínas plasmáticas que se ubican en la fracción gammaglobulinas, producidas por el sistema inmunológico para reconocer y unirse al antígeno para su destrucción. • Están formados por cadenas de Aminoácidos unidas por puentes peptídicos. • Son Sintetizados por los linfocito B maduros • Inmunoglobulinas: Ig E, Ig A, Ig D, Ig G e Ig M.
  7. 7. • Constituyen alrededor del 73% de las inmunoglobulinas totales. • Por su tamaño, atraviesan con facilidad la placenta, pudiendo causar LA ENFERMEDAD HEMOLITICA DEL RECIEN NACIDO. • No producen aglutinación de los glóbulos rojos antigénicos; solo los recubre y sensibiliza. • Constituyen alrededor un 8% de las inmunoglobulinas totales. • Aglutinan con facilidad a los glóbulos rojos. Debido a su alta valencia. • Durante las reacciones antígeno - anticuerpo , activan el complemento, causando hemolisis de los eritrocitos
  8. 8. PRINCIPIOS DE LA REACCIÓN ANTÍGENO - ANTICUERPO En las reacciones antígeno-anticuerpo se distinguen 2 fases: • La primera consiste en la unión del antígeno con el anticuerpo . • La segunda en las manifestaciones que resultan de dicha unión. La clave de la unión está en la complementariedad entre Ag y Ac: si ésta es buena, se produce la exclusión de agua, lo que permite un acercamiento estrecho entre epitopo y paratopo, lo que determina altas fuerzas de unión.
  9. 9. Características de la reacción antígeno anticuerpo REVERSIBILIDAD: Dado que la reacción se debe a fuerzas no covalentes es reversible y por lo tanto se ve afectada por factores como la temperatura, la proporción ag-ac, el pH y la fuerza iónica. ESPONTANIEDAD: La reacción ag-ac no requiere energía adicional para poder efectuarse. RAPIDEZ: Es la velocidad con la que ocurre la primera etapa de la reacción. La segunda etapa, incluyen todas las manifestaciones que se presentan como consecuencia de la interacción: precipitación, aglutinación, floculación, hemolisis, etc. ESPECIFICIDAD: Es la capacidad de un anticuerpo de combinarse con un solo determinante antigénico, o la capacidad de una población de anticuerpos para reaccionar con un solo antígeno
  10. 10. La mayoría de las técnicas empleadas en banco de sangre para detectar las reacciones antígeno – anticuerpo se basan en : Hemolisis Aglutinación TIPOS DE REACCION
  11. 11. HEMOLISIS La hemolisis de los eritrocitos mediada por inmunidad, depende de: • La clase de Inmunoglobulina • La capacidad del anticuerpo de unirse al complemento • La interacción con el sistema reticuloendotelial (sistema mononuclear fagocitico) El mecanismo de La hemolisis inmune determina el lugar de la hemolisis: a. H. intravascular: característico de Ac IgM, mediada por complemento. b. H. extravascular: característico de Ac IgG, mediada por sistema mononuclear fagocitico.
  12. 12. AGLUTINACIÓN Anticuerpo Los antígenos situados en la membrana de los hematíes reaccionan con los anticuerpos y el resultado de la reacción produce aglutinación. Antígeno
  13. 13. Se definen en dos fases: 1. Sensibilización: Unión de anticuerpos con antígeno, es reversible y la fuerza de unión depende de la “exactitud de encaje” entre el antígeno y el anticuerpo. Se ve influenciado por los siguientes factores: • Temperatura: IgM a 4°C e IgG a 37°C • pH: 6 – 8 • Fuerza Iónica del medio: Baja fuerza iónica incrementa la tasa de unión de Ac. Esta es la base de la pruebas para detección de Ac que emplean LISS.
  14. 14. 2. Aglutinación: Se debe al entrecruzamiento que los Ac facilitan entre las células. La aglutinación de GR cubiertos tanto por IgM e IgG aumenta por centrifugación.
  15. 15. • La aglutinación de glóbulos rojos en suspensiones fisiológicas puede ocurrir por dos mecanismos básicos: Aglutinación especifica Aglutinación inespecífica
  16. 16. Aglutinación especifica Partiendo del concepto que una suspensión de glóbulos rojos en soluc. Salina fisiológica constituye un sistema estable; entonces diremos que: • Cuando la estabilidad es cambiada por la introducción de anticuerpos específicos que se fijan con antígenos de membrana eritrocitaria, produciendo la aglutinación de estas células.
  17. 17. Aglutinación inespecífica • Llamado fenómeno de panaglutinación • Los glóbulos rojos (no sensibilizados por los anticuerpos) son aglutinados por sustancias presentes en el medio de la suspensión. Como: - Detergentes - Iones metálicos: Cr, Al,Fe - Macromoléculas: albumina, polibreno, dextran, etc.
  18. 18. Proceso físico - químico de la aglutinación El factor mas importante en este proceso es: “La distancia media que separa los glóbulos rojos en suspensión” Esta distancia puede ser disminuida por la adición de anticuerpos u otras sustancias al medio, hasta un punto critico en que ocurre la AGLUTINACION.
  19. 19. POTENCIAL ZETA La diferencia del potencial eléctrico creado entre la doble capa de iones positivos cerca del glóbulo y el medio con iones de sodio y cloruro se denomina potencial Z. La fuerza de repulsión entre glóbulo rojo, en un medio salino depende del valor del Potencial Z D: constante dieléctrica del medio U: fuerzo ionica del medio de suspension Y : carga eléctrica del G.R.
  20. 20. Por ello, al considerar la aglutinación especifica de los hematíes hay que tener en cuenta, como mínimo tres variables:  La carga eléctrica de la superficie del hematíe (y)  La constante dieléctrica del medio (que constituye una determinación relativa del estado de ionización) (D)  Fuerza iónica del medio de suspensión ( u)
  21. 21. En la ausencia de agentes aglutinantes, la fuerza de repulsión predomina y mantienen la suspensión globular estable en medio salino. Desde el punto de vista físico - químico la aglutinación ocurre por la agregación de los glóbulos rojos, cuando la distancia entre ellos se reduce hasta un valor mínimo. Esta distancia depende de los valores de dos fuerzas antagónicas: Fuerza de cohesión: Es la tensión interfacial que tiende agregar a los glóbulos rojos Fuerza de repulsión: debida a los escudos de cargas positiva (capa doble) creados alrededor de los glóbulos rojos.
  22. 22. El potencial zeta de un sistema puede ser cambiado de dos maneras: 1. Por la reducción de la carga eléctrica de la membrana del hematíe (debidos al tto de GR con enzimas proteolíticas - tripsina, bromelina, ficina, papaína - y efecto de fijación de Ac) 2. Cambios en la composición del medio (cambios de la fuerza iónica y de constante dieléctrica del sistema - macromoleculas) Los parámetros utilizados para comprender las reacciones de aglutinación son: • Si la carga eléctrica del glóbulo rojo disminuye • Si la constante dieléctrica del sistema aumenta • Si la fuerza iónica del medio aumenta El potencial zeta puede bajar o aumentar la aglutinabilidad del sistema, o hasta puede promover la aglutinación de los GR en suspensión.
  23. 23. Factores que intervienen en la reacción antígeno - anticuerpo • Disminución del potencial Z. • Tipo de inmunoglobulina. • Numero de antígenos • Ubicación de los antígenos • Temperatura • Proporción de Ag/Ac • pH • Cambios en la fuerza Iónica del medio SENSIBILIZACION AGLUTINACION
  24. 24. PH • La mejor sensibilización se logra a un pH entre 6 – 8 • Fuera de estos limites se puede observar hemolisis de los G.R. para valores extremos del ph o una inhibición de la aglutinación. TEMPERATURA La temperatura ideal para promover la reacción antígeno anticuerpo depende de la naturaleza del anticuerpo. • Los anticuerpos fríos: Ig M, reaccionan a 4°C • Los anticuerpos calientes: Ig G, reaccionan a 37 ºC. Factores que afectan la sensibilización
  25. 25. PROPORCIÓN Ag/Ac  La sensibilidad del test se incrementa cuando la concentración del anticuerpo es más alta que la del antígeno.
  26. 26. CAMBIOS EN LA FUERZA IONICA DEL MEDIO • Es determinado por la cantidad de iones Na+ y Cl-. El plasma tiene alta concentración en cloruro de sodio. • La presencia de estos iones en el medio bloquea las cargas superficiales de los glóbulos rojos y los anticuerpos. Una capa de Na+ es formada alrededor de ellos es por ello que su unión es más difícil. • Pero si la concentración de los cationes alrededor de los glóbulos rojos disminuye, este permite a las moléculas de anticuerpos tener más fácil acceso a los lugares antigénicos de la membrana eritrocitaria aumentando así la sensibilización. • “ De acuerdo a la ecuación del potencial Z: donde hay un aumento de la fuerza iónica (u) lleva a una disminución del potencial zeta de la suspensión de glóbulos rojo lo que favorece la aparición de aglutinación.”
  27. 27. Factores que interviene en la aglutinación Puede ser alterado por la variación de la carga de los hematíes o por la variación en la concentración de cationes libres en el medio de suspensión. Cuando la unión de antígeno- anticuerpo sobre la superficie de la célula, rompe el potencial Z hace más fácil la unión de un eritrocito con otro.
  28. 28. TÉCNICAS SEROLÓGICAS Esenciales para la detección e identificación de aloanticuerpos, antianticuerpos, fenotipaje de GR, diagnostico de anemias hemolíticas (AHAI) y diagnostico de enfermedades hemolíticas del RN (EHRN).
  29. 29. Técnicas de producción artificial de la aglutinación de. G.R Los principales elementos para producir aglutinación son: LISS: Refuerza la interacción Ag – Ac durante la incubación, aumentando la velocidad de asociación y permitiendo acortar el tiempo de incubación de 60 minutos a 10 – 15 minutos sin sacrificar la sensibilidad SUSTANCIAS MACROMOLECULARES: Albumina al 20 – 30%, y el polietilenoglicol (PEG), aumenta su constante dieléctrica de la suspensión, disminuyendo el escudo de cargas positivas, debido a esto, baja el valor del potencial y disminuye la fuerza de repulsión interglobular; favoreciendo la aglutinación. Posee una extremidad positiva(amínica) y otra negativa(carboxilica) y se polarizan en el campo eléctrico de los G.R.
  30. 30. Enzimas proteolíticas: La tripsina, la papaína, la bromelina y ficina son las principales enzimas proteolíticas, capaces de sacar de la membrana eritrocitaria fragmentos peptídicos de glucoproteínas de membrana conteniendo moléculas de acido sialico, disminuyendo la carga negativa de los GR. “Potencial z es directamente proporcional a la electronegatividad del glóbulo rojo” Técnicas de producción artificial de la aglutinación de G.R.
  31. 31. TRATAMIENTO DE HEMATIES POR ENZIMAS PROTEOLITICAS Hematies Potencial Zeta(mv) Reduccion del potencial Z(%) No tratados - 19.6 0.0 Tripsina - 15.6 24.4 Bromelina - 14.1 28.1 Papaina - 10.1 48.0 Ficina - 9.0 53.9
  32. 32. PRUEBAS SEROLOGICAS PARA ESTUDIOS INMUNOHEMATOLOGICOS SEROLOGIA EN TUBO
  33. 33. TECNICA DE GEL - CENTRIFUGACIÓN

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