Estudio de dislipidemias por electroforesis

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Estudios de Laboratorio para el diagnostico de dislipidemias, clasificacion de dislipidemias, electroforesis de lipoproteinas en dislipidemias,

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Estudio de dislipidemias por electroforesis

  1. 1. ELECTROFORESISELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS:DE LIPOPROTEINAS: ASPECTOS TECNICOSASPECTOS TECNICOS Y APLICACIONESY APLICACIONES CLINICASCLINICAS Servi-Med BIOL. CARLOS BEJAR LOZANO Jefe del Departamento de Inmunología Servi-Med Laboratorios Clínicos Laboratorios Clínicos
  2. 2. EVOLUCIONEVOLUCION BIOLOGICABIOLOGICA YY EVOLUCIONEVOLUCION CULTURALCULTURAL Diabetes Dislipidemia Hipertensión Sedentarismo Servi-MedServi-MedLaboratoriosLaboratoriosClínicosClínicos
  3. 3. OBESIDAD:OBESIDAD: Cuestión cultural ?Cuestión cultural ? Cuestión de países desarrollados ?Cuestión de países desarrollados ? Cuestión genética ? … o TODO..?Cuestión genética ? … o TODO..? MéxicoMéxico disputa el Primer Lugar 2013Primer Lugar 2013 en Obesidad en el Mundo. Servi-MedServi-MedLaboratoriosLaboratoriosClínicosClínicos Importante un Sistema de ClasificaciónClasificación MediciónMedición y seguimientoseguimiento en dislipidemias.
  4. 4. CLASIFICACIONCLASIFICACION SOBREPESO / OBESIDADSOBREPESO / OBESIDAD I.M.C. = Kg peso ÷ (Altura m)2 I.M.C. = Kg peso ÷ (Altura m)2 Servi-MedServi-MedLaboratoriosLaboratoriosClínicosClínicos Si Lincoln hubiera tenido pc Si David hubiera viajado a EEUU Mi IMC: 84.0 kg ÷ (1.80)2 84.0 ÷ 3.24 = 25.9
  5. 5. FACTORES DE RIESGOFACTORES DE RIESGO VIEJOS Y EMERGENTESVIEJOS Y EMERGENTES Síndrome Metabólico / Síndrome de Resistencia a la Insulina Dislipidemia – Hipertensión – Diabetes SíndromeSíndrome metabólicometabólico
  6. 6. - Desfibrilador (60´s) - Unidad Coronaria (80´s) - Betabloqueadores LOSLOS AVANCESAVANCES DE LADE LA CARDIOLOGIA MODERNACARDIOLOGIA MODERNA Era de Reperfusión (´80´s) Trombolisis + Stents Disminución de MortalidadDisminución de Mortalidad IntrahospitalariaIntrahospitalaria NO PREVIENEN… TRATAN DE CORREGIR EL DEFECTO.:!NO PREVIENEN… TRATAN DE CORREGIR EL DEFECTO.:!
  7. 7. MORBILIDAD Y MORTALIDADMORBILIDAD Y MORTALIDAD ASOCIADA A DISLIPIDEMIASASOCIADA A DISLIPIDEMIAS  Cada hora mueren 7 personas en México por infarto, de los que el 70 % está relacionado con dislipidemias e hipertensión. http://www.invdes.com.mx/anteriores/Abril2001/htm/infarto.html  Es la tercer causa de muerte en México, después de diabetes y cáncer. http://sinais.salud.gob.mx/mortalidad/tabs/m_009.xls  Se estima que al menos un tercio de la población mexicana tiene algún grado de obesidad y dislipidemia, muchos de ellos asociados a diabetes.  Como medida de control de factores de riesgo, se debe controlar el nivel denivel de lípidoslípidos, así como otros factores de riesgo asociados (hipertensión, tabaquismo y sedentarismo y hábitos alimenticios).
  8. 8. Mortalidad Mundial 22.3 19.3 12.6 9.7 9 6.3 0 5 10 15 20 25 30 AterosclerosisAterosclerosis Enfermedad infecciosa Cáncer Accidentes Enfermedad pulmonar SIDA Causas de mortalidad (%) The World Health Report 2001. Geneva. WHO. 2001.
  9. 9. El papel del Laboratorio Clínico: Proporcionar elementos medibles para el control de este padecimiento Tendencias a buscar en la medicina..  LA MEJOR MEDICINA ES LA QUE CONTROLA Y PREVIENE LOS FACTORES DE RIESGO Y LAS COMPLICACIONES ASOCIADOS A: - SINDROME DE RESISTRENCIA A LA INSULINA - DIABETES / DISLIPIDEMIASDISLIPIDEMIAS, - HTA / TROMBOSIS LA MEJOR MEDICINA SERALA MEJOR MEDICINA SERA LA PREVENTIVALA PREVENTIVA……  LA MEJOR MEDICINA ES LA QUE CONTROLA Y PREVIENE LOS FACTORES DE RIESGO Y LAS COMPLICACIONES ASOCIADOS A: - SINDROME DE RESISTRENCIA A LA INSULINA - DIABETES / DISLIPIDEMIASDISLIPIDEMIAS, - HTA / TROMBOSIS LA MEJOR MEDICINA SERALA MEJOR MEDICINA SERA LA PREVENTIVALA PREVENTIVA……
  10. 10. Origen de las Dislipidemias: Dislipidemias primarias CausasCausas genéticasgenéticas (primarias)(primarias) de Dislipidemias:de Dislipidemias:  Genética FamiliarGenética Familiar  - Hipercolesterolemia FamiliarHipercolesterolemia Familiar - Dislipidemia Familiar CombinadaDislipidemia Familiar Combinada - Hipercolesterolemia PoligénicaHipercolesterolemia Poligénica - Hiperquilomicronemia familiarHiperquilomicronemia familiar - Hipertrigliceridemia familiarHipertrigliceridemia familiar - Déficit congénito de HDLDéficit congénito de HDL CausasCausas genéticasgenéticas (primarias)(primarias) de Dislipidemias:de Dislipidemias:  Genética FamiliarGenética Familiar  - Hipercolesterolemia FamiliarHipercolesterolemia Familiar - Dislipidemia Familiar CombinadaDislipidemia Familiar Combinada - Hipercolesterolemia PoligénicaHipercolesterolemia Poligénica - Hiperquilomicronemia familiarHiperquilomicronemia familiar - Hipertrigliceridemia familiarHipertrigliceridemia familiar - Déficit congénito de HDLDéficit congénito de HDL
  11. 11. Enfermedades mas comunes asociadas a desnutrición: • Gen Ob en cr7 que codifica para Leptina. • Se expresa (produce) en adipocitos, y bajo condiciones normales, será en proporción directa a la masa de tejido adiposo. Leptina ↑↑ Aumento de tejido adiposo Péptidos anoréxicos - Ghrelina - Serotonina - Colecistoquinina - Neuropéptido Y Lipogénesis ↓ Lipólisis ↑ Apetito ↓↓
  12. 12. Origen de las Dislipidemias: Dislipidemias Secundarias - DiabetesDiabetes:: Valores elevados de insulina, defectos en el catabolismo de quilomicrones y VLDL - ObesidadObesidad:: Mayor cantidad de lípidos en circulación y valores elevados de insulina (resistencia a la insulina) - HipotiroidismoHipotiroidismo:: Disminución del receptor de LDL y depuración lenta de las LDL - NefropatíasNefropatías:: Insuficiencia renal crónica y depuración lenta de VLDL con aumento de producción de LDL. Retención de colesterol para compensación oncótica. - ColestasisColestasis:: Bloqueo de vía excretoria de la bilis con aumento del paso colesterol y fosfolípidos al plasma - AlcoholismoAlcoholismo:: Estimula la secreción de VLDL por parte del hígado y síntesis hepática de triglicéridos - Terapia sustitutiva de EstrógenosEstrógenos:: Mayor síntesis de VLDL y HDL - DiabetesDiabetes:: Valores elevados de insulina, defectos en el catabolismo de quilomicrones y VLDL - ObesidadObesidad:: Mayor cantidad de lípidos en circulación y valores elevados de insulina (resistencia a la insulina) - HipotiroidismoHipotiroidismo:: Disminución del receptor de LDL y depuración lenta de las LDL - NefropatíasNefropatías:: Insuficiencia renal crónica y depuración lenta de VLDL con aumento de producción de LDL. Retención de colesterol para compensación oncótica. - ColestasisColestasis:: Bloqueo de vía excretoria de la bilis con aumento del paso colesterol y fosfolípidos al plasma - AlcoholismoAlcoholismo:: Estimula la secreción de VLDL por parte del hígado y síntesis hepática de triglicéridos - Terapia sustitutiva de EstrógenosEstrógenos:: Mayor síntesis de VLDL y HDL
  13. 13. Objetivo del estudio de Lípidos: 1.1. Proporcionar unaProporcionar una medidamedida que valore el riesgoque valore el riesgo de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis)de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis) asociada a dislipidemias, mediante elasociada a dislipidemias, mediante el  Indice de Riesgo = CTIndice de Riesgo = CT ÷ cHDL÷ cHDL 2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a hiperlipidemia (hiperlipidemia (cifrascifras absolutas de CT y TG) deabsolutas de CT y TG) de acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis,acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis, hígado graso, etc.hígado graso, etc. 1.1. Proporcionar unaProporcionar una medidamedida que valore el riesgoque valore el riesgo de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis)de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis) asociada a dislipidemias, mediante elasociada a dislipidemias, mediante el  Indice de Riesgo = CTIndice de Riesgo = CT ÷ cHDL÷ cHDL 2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a hiperlipidemia (hiperlipidemia (cifrascifras absolutas de CT y TG) deabsolutas de CT y TG) de acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis,acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis, hígado graso, etc.hígado graso, etc. “Solo se puede conocer lo que se puede medir”
  14. 14. Valoración de las Dislipidemias por LaboratorioValoración de las Dislipidemias por Laboratorio   Medición de Colesterol + Triglicéridos.   Medición del Perfil de Lípidos  Colesterol  cHDL + cLDL + cVLDL  “LIPIDOS TOTALES..??? “  Triglicéridos  Test de Quilomicrones: Se deja reposar el suero a 4ºC durante 24 hs; cuando existen quilomicrones, aparece un sobrenadante cremoso en la superficie. En sueros normales, esto nunca aparecerá.   Medición de Perfil de Lípidos + Electroforesis de Lipoproteínas - Colesterol - cHDL + cLDL + cVLDL - Triglicéridos - Indice de Riesgo Aterogénico  C.T. / cHDL - Alfa - Pre-Beta - Beta - Indices de Riesgo Aterogénico  Pre-Beta / Alfa  Beta / Alfa
  15. 15. CALCULO DE cLDL y cVLDL A PARTIR DECALCULO DE cLDL y cVLDL A PARTIR DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y cHLDCOLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y cHLD Fórmula de FriedewaldFórmula de Friedewald para calcular las distintas fracciones de colesterol: - Medición directa de Colesterol (CT), - Medición directa de Triglicéridos (TG) - Medición directa de cHDL - Calcular cLDLcLDL y cVLDLcVLDL mediante las fórmulas: * cLDL = CT – ((Tg / 5 ) + cHDL) * cVLDL = CT – (cLDL + cHDL)  No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia cVLDL = TG / 5
  16. 16. METODOS PARA VALORACIONMETODOS PARA VALORACION DE RIESGO ATEROGÉNICODE RIESGO ATEROGÉNICO  Medición de Colesterol y Triglicéridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y cVLDL, para obtener el riesgo aterogénico derivado de alteraciones del colesterol y las lipoproteínas de transporte.  No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia Normal (mg/dL) Ejemplo 1 Ejemplo 2 Ejemplo 3 Ejemplo 4 Colesterol Total 100 – 200 200 200 250 314 Triglicéridos 50 – 170 170 170 400 245 cHDL > 50 35 50 60 46 cLDL < 100 131 116 110 219 cVLDL < 21 34 34 80 49 Riesgo Aterogénico C T / cHDL < 4.5 5.7 4.0 4.1 6.8
  17. 17. METODOS PARA VALORACIONMETODOS PARA VALORACION DE RIESGO ATEROGÉNICODE RIESGO ATEROGÉNICO  Medición de Colesterol y Triglicéridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y cVLDL, para obtener el riesgo aterogénico derivado de alteraciones del colesterol y las lipoproteínas de transporte.  No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia Normal (mg/dL) Ejemplo 5 Ejemplo 6 Ejemplo 7 Ejemplo 8 Colesterol Total 100 – 200 185 180 205 344 Triglicéridos 50 – 170 400 679 754 3 018 cHDL > 50 37 42 56 65 cLDL < 100 68 2 - 1 - 324 cVLDL < 21 80 136 150 603 Riesgo Aterogénico C T / cHDL < 4.5 5.0 4.3 3.6 :-) 5.3
  18. 18. VALORACION DE RIESGO DE ENFERMEDAD CORONARIA (EC) CONVALORACION DE RIESGO DE ENFERMEDAD CORONARIA (EC) CON CIFRAS DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y LOS cHDL, cLDL Y cVLDLCIFRAS DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y LOS cHDL, cLDL Y cVLDL  Datos de Riesgo y Terapéutica del Toronto Working Group, 1998Toronto Working Group, 1998 Factor de Riesgo Coronario Nivel de riesgo Riesgo EC a 10 años Tratamiento, si: LDL(mg) ó CT/HDL ≥ 4 Muy alto ≥ 40% 135 ó >5 ≤ 3 Alto 20 a 39% ≥ 174 ó >6 ≤ 2 Normal 10 a 19% ≥ 193 ó >7 ≤ 1 Bajo <10% ≥ 232 ó >8
  19. 19. Las lipoproteínas están formadas por: - Fracción proteica o Apo (Apoproteína)  Función primordial en acoplamiento a receptores. - Colesterol total y esterificado - Triglicéridos. COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINASCOMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS
  20. 20. COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINASCOMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS  PROPORCION DE LIPIDOS / APOPROTEINASPROPORCION DE LIPIDOS / APOPROTEINAS
  21. 21. METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
  22. 22. METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
  23. 23. METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
  24. 24.  METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
  25. 25.  CAUSAS Y CLASIFICACIONCAUSAS Y CLASIFICACION DE LAS DISLIPIDEMIASDE LAS DISLIPIDEMIAS
  26. 26.  PROCESO DE LAPROCESO DE LA ATEROSCLEROSISATEROSCLEROSIS 
  27. 27. IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DELIMPORTANCIA DEL ESTUDIO DEL PACIENTE CON DISLIPIDEMIAPACIENTE CON DISLIPIDEMIA Cual es su riesgo aterogénico..??Cual es su riesgo aterogénico..??   NO HAY REGLA: Hay “flacos” con hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia, y flacos normolipémicos.   Hay “gordos” con hipercolesterolemia y/o hipertrigliceridemia y “gordos normolipémicos.  Se pueden clasificar las dislipidemias y medir el riesgo aterogénico… con solo medir colesterol y triglicéridos ? … Causas de obesidad ? … Causas de talla baja ?
  28. 28. ESTUDIO DE DISLIPIDEMIASESTUDIO DE DISLIPIDEMIAS • La ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS ofrece un método sensible y accesible para valoración de riesgos aterogénicos, tanto asociados a hipercolesterolemia como hipertrigliceridemia.  Patológico: Aumento de LDL y VLDL con agravamiento por presencia de quilomicrones. Disminución de síntesis de HDL.  Tendencia óptima: Aumentar HDL y disminuir LDL, IDL y VLDL Clasificación de Dislipidemias Terapéutica específica Riesgo EC Respuesta A tratamiento Electroforesis de Lipoproteinas
  29. 29. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS  ELECTROFORESIS DE MICROZONAELECTROFORESIS DE MICROZONA
  30. 30. Clasificacion de las DislipidemiasClasificacion de las Dislipidemias (OMS 1970 modificada de Fredickson y Levi de 1963)(OMS 1970 modificada de Fredickson y Levi de 1963) - Tipo I: Quilomicrones. - Tipo IIa: Betalipoproteínas (LDL) - Tipo IIb: LDL + VLDL (Beta y p-Beta) - Tipo III: IDL (Beta ancha) - Tipo IV: VLDL (pre-Betalipoproteínas) - Tipo V: VLDL + Quilomicrones  Método semi-semi- cuantitativocuantitativo  Debe interpretarse junto con los valores de colesterolcolesterol y triglicéridos.triglicéridos. Banda en el punto de aplicación corresponde a la presencia de quilomicrones, Banda ancha que abarca beta y prebeta sugiere un acúmulo anormal de IDL y/o de remanentes de quilomicrones. Banda Pre-Pre-αα (LipoalbúminaLipoalbúmina) aparece cuando hay ácidos grasos libres y lecitina unida a albúmina (no patológica).
  31. 31. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS  ELECTROFORESIS DE MICROZONA (acetato de celulosa)ELECTROFORESIS DE MICROZONA (acetato de celulosa) Punto de aplicación Lipoproteínas Beta (LDL) Lipoproteínas Pre-Beta (VLDL) Lipoproteínas Alfa (HDL) Sitio de aparición de los quilomicrónes Método electroforético que permite separar e identificar y medir las distintas fracciones lipoproteicas, mediante su tinción con Sudán Negro y su integración densitométrica en un lipidograma.
  32. 32. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS HDL VLDL LDL quilomicrones Integración densitométrica de la electroforésis
  33. 33. MUESTRA A USAR…?MUESTRA A USAR…?  El SUEROSUERO contiene Lipoprotein LipasaLipoprotein Lipasa, que es activa y estará degradando lipoproteínas en la muestra.  La Lipoprotein Lipasa es activada por laactivada por la HEPARINAHEPARINA, por lo que no es una muestra útil para una electroforesis de lipoproteinas.  ElEl EDTAEDTA inhibe la actividad de la enzima Lipoprotein Lipasa, por loinhibe la actividad de la enzima Lipoprotein Lipasa, por lo que es la muestra ideal a utilizar, ya seaque es la muestra ideal a utilizar, ya sea EDTA -Na, -K, o -LiEDTA -Na, -K, o -Li..  NO HAY CAMBIOS SIGNIFICATIVOS SI SE EMPLEA UNA MUESTRA DE SUERO Y SE EFECTUA LA ELECTROFORESIS ANTES DE 48 HORAS EN SUERO REFRIGERADO.  Si no se procesará antes de 48 horas de obtenida la muestra, será mas conveniente una muestra de plasma y refrigerar para procesar.
  34. 34. Datos del paciente ELECTROFORESIS DE PROTEINASELECTROFORESIS DE PROTEINAS  REPORTEREPORTE Corrimiento electroforético Datos de interpretación clínica Integración de electroforesis PROPORCIONAR AL MEDICO, TODA LA INFORMACION POSIBLE PARA EL CORRECTO APROBECHAMIENTO DEL ESTUDIO
  35. 35. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  PATRON NORMALPATRON NORMAL
  36. 36. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO IIa: Hiper-BetalipoproteinemiaFENOTIPO IIa: Hiper-Betalipoproteinemia
  37. 37. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO IIb: Hiperlipidemia MixtaFENOTIPO IIb: Hiperlipidemia Mixta
  38. 38. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO III: Beta AnchaFENOTIPO III: Beta Ancha
  39. 39. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
  40. 40. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS  FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
  41. 41. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicronesFENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
  42. 42. FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicronesFENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
  43. 43. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS Principales problemas y alternativas:Principales problemas y alternativas: Muy baja cantidad de lípidos (ppalm tg) Prescribir a pacientes dislipidémicos Uso de sueros envejecidos (> 2 días) Procesar al menos 3 veces por semana Usar plasma si se procesara después de 48 hs Uso de sueros/plasmas congelados No congelar. Ideal refrigerar a 4°C Uso de Buffer equivocado o deteriorado Recambio de buffer y uso de secantes Déficit Congénito de HDL ..? Usar un suero normal como Control Interno
  44. 44. ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS  Principales problemasPrincipales problemas Principales problemas de corrimientos: 1. Deficiente preparación de acetatos por no recambio de filtros  Habrá aparición de artificios en el corrimiento 2. Envejecimiento de reactivos  Teñido deficiente 3. Uso de amortiguador impropio  Corrimiento anormal 4. Muestras envejecidas  Desaparición o atenuamiento de bandas 5. No coincide lo que veo en el corrimiento con lo que integra el integrador densitométrico  Limpieza y mantenimiento de los sensores o fotoceldas de cada canal de integración. Sugerencias: - En lo posible, meter suero “normal” para comparar patrones anormales. - Recambio de papel filtro de puentes y desecantes. - Procesamiento 3 veces por semana - Programación de mantenimiento preventivo  al menos una vez al año
  45. 45. Corrimientos de lipoproteinas con muestras frescas (izquierda) y misma muestra con 5 dias de almacenamiento (imagen derecha).

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