Her 2

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  • I would like to spend the rest of my time to talk about emerging novel diagnostic methods, particularly genomics and proteomics. This slides illustrates how new laboratory techniques have found their way into routine diagnostics. Immunohistochemistry and FISH are now routinely used in the management of breast cancer. Will microarrays and proteomics be the next? These new techniques offer the unique possibility of examining a very large number of genes and proteins to develop predictors of outcome which are made up by many genes rather than a single marker.
  • Her 2

    1. 1. • Laboratorio de Biología Molecular (IMR) Bioq. Horacio Lucero
    2. 2. Factores de riesgo para el cáncer de mama• Edad avanzada • Edad 1er embarazo• Menarquia precoz • Uso de estrógenos• Menopausia tardía • Fact. dietéticos• Nuliparidad • Anteced. familiares
    3. 3. 30 Antecedentes familiares 25 2 familiares  21,1 % 20 (1:5) 15 1 familiar  13,3 % (1:8) 10 No familiares  7,8 % (1:13)% da d li ba bor P 5 0 i 20 30 40 50 60 70 80 Lancet 2001; 358:1389-99 Edad (años) (
    4. 4. BRCA1 y BRCA2 BRCA1 BRCA2Año clonación 1994 1995Cromosoma 17q21 13q12Exones / ADN 24 exones / 5.6 kb 27 exones / 10.2 kbNº aminoácidos 1.863 aa 3.418 aaNº mutaciones > 1.230 (500) > 1.380 (300)Patrón herencia Autos. Dominante Autos. DominanteFunción biológica Mantener integridad del genoma Breast Information Core: http://research.nhgri.nih.gov/bic
    5. 5. Incremento del riesgo de cáncer (RR)1086420 Menarquia Edad Tardía Mastopatía THS Alcohol Historia BRCA1/2 precoz 1er. Hijo benigna familiar
    6. 6. ¿Qué proporción del cáncer de mama y de ovario es hereditaria?Cáncer de mama Cáncer de ovario 15-20% 5-10% 5-10% Esporádico Familiar Hereditario
    7. 7. ¿Cuándo debemos sospechar unSíndrome de Cáncer de Mama y Ovario Hereditario? Historia familiar de cáncer de mama (múltiples miembros de varias generaciones) Diagnóstico a edad temprana Afectación bilateral o multifocal Asociación a otros tumores: cáncer de ovario Cáncer de mama en varones Evidencia de transmisión autosómica dominante
    8. 8. Genes de susceptibilidad al Cáncer de Mama Hereditario BRCA1 20% BRCA2 20% TP53 <1% PTEN <1%Otros 55%:Penetrancia variable CHEK 2 5%?STK11ATM Wooster R. N Engl J Med 2003;348:2339-47
    9. 9. Genes de susceptibilidad al Cáncer de OvarioCáncer de ovario BRCA1 (~ 70%) Hereditario (5%−10%) Otros genes (~8%) HNPCC (~2%) BRCA2 (~20%)
    10. 10. Riesgo de cáncer asociado a BRCA1 Cáncer de mama: 50%−85% Segundo cáncer de mama primario: 40%−60% Cáncer de ovario: 15%−45% Posible aumento de riesgo de otros cánceres: cérvix/cuerpo uterino, páncreas, próstata
    11. 11. Riesgo de cáncer asociado a BRCA2 Cáncer de mama en el varón (6%) Cáncer de mama (50%−85%) Cáncer de ovario (10%−20%) Riesgo aumentado de otros cánceres: próstata, páncreas, …
    12. 12. Riesgo de cáncer de mama en portadoras de mutación en BRCA 100 Portadoras BRCA1+ 80 (BCLC) Riesgo de 60 cáncerde mama (%) 40 20 Población general 0 40 50 60 70 80 Edad Easton DF et al. Am J Hum Genet 56:265, 1995
    13. 13. Hipótesis de Knudson
    14. 14. Biologia del HER2• Human Epidermal Grow Factor Receptor- 2 neu.• Protoncogen.• Cromosoma 17.• Tirosinquinasa.• Transmembrana citoplasmatica.• Receptor de factores de crecimiento.
    15. 15. Rol del HER2/neu en Ca de mamaHER2/neu involucradoen el crecimiento celularnormal.La amplificación o sobreexpresión producereceptores HER2/neuactivados que estimulan elcrecimiento celular
    16. 16. HER2+ Asociado a peor pronostico, mayor recurrencia y mortalidad. Debe ser incorporado en las decisiones clínicas con otros factores pronóstico.
    17. 17. HER2+ Resistencia a distintos quimioterápicos. Esta asociado a escaso beneficio a distintas terapéuticas.
    18. 18. Rol del HER2/neu en Ca de mama PRONOSTICO: asociado con agresividad y peor pronostico FACTOR PREDICTIVO: Identificar pacientes que se pueden tratar con anticuerpos monoclonales.
    19. 19.  Sobre-expresión en superficie (IHQ) Amplificación (FISH)
    20. 20. • Localizado en 17q12-21.32• Gen c-erb B-2 = HER-2/neu (oncogen)• Identif. por transfección de células con ADN neuroblastomas de rata• Codifica glicoproteína transmembranaHuman EGFR-2 (~pt. v-erb-B del virus aviar) con actividad T-K
    21. 21. • 20-30 % de Ca. mama presentan amplificación de HER- 2 (o sobreexpresión)• Alteración Genética Adquirida• Asociado a mal pronóstico y resistencia al tratamiento convencional• HER-2 sirve como TARGET BIOLÓGICO para terapia con TRASTUZUMAB• FDA aprobó IHC (DAKO-VMS) y FISH (Vysis-VMS)
    22. 22. AMPLIFICACION• “PRODUCCIÓN SELECTIVA DE COPIAS SUPLEMENTARIAS DE 1 GEN SIN QUE SE PRODUZCA UN AUMENTO PROPORCIONAL EN OTROS GENES”
    23. 23. Para que se produzca la activación es necesario que la proteína se dimerice HOMODÍMEROS Disoc. rápida de ligando,1 1 4 4 señalización corta y débil HETERODÍMEROS Disoc. lenta de ligando,2 4 1 2 señalización potente y prolongada
    24. 24. AMPLIFICACIÓN GÉNICAINCREMENTO EN NIVELES DEPROTEÍNASMAYOR PROBABILIDAD DEFORMACIÓN DEHETERODÍMEROSMAYOR ESTIMULACIÓNCELULAR
    25. 25. • Southern Blot Por detección de ADN• PCR diferencial• FISH• Northern Blot Por detección de ARN• RT-PCR• Arrays (expresión génica)• Inmunohistoquímica (ICH)• Western Blot Por detección de Prot.
    26. 26. Inmunohistoquímica (CB11). Sobreexpresión deHER2/neu: positividad de membrana intensa ycompleta (200x)
    27. 27. INMUNOHISTOQUÍMICA•• Medición de expresión de HER-2/neu Medición de expresión de HER-2/neu usando mAbCB11 <5% de F+ usando mAbCB11 <5% de F+•• Alto valor predictivo negativo 95,5% Alto valor predictivo negativo 95,5% (ex. Baja o no detectable) (ex. Baja o no detectable)•• Alto valor predictivo positivo 96,2% Alto valor predictivo positivo 96,2% (sobreexp.) (sobreexp.)•• En moderada expresión: En moderada expresión: INCONCLUSO►FISH INCONCLUSO►FISH
    28. 28. FISH• Aplicar en casos de discordancia entre Expresión y Clasificación Histopatológica• Debería usarse SISTEMÁTICAMENTE antes de la implementación del TRASTUZ. debido a la Toxicidad y costo.• Provee Mejor información pronóstica• Asociado a una mejor respuesta al tratamiento.
    29. 29. FISHDesventajas:• más costoso que IHC• Más sofisticado que IHC• Señal temporaria• Entrenamiento especializado
    30. 30. NORMAL ANEUPLOIDIAS
    31. 31. NORMAL ANEUSOMÍA POR DELECIÓN
    32. 32. AMPLIFICACIÓNAMPLIFICACIÓN
    33. 33. FISH (HER2/neu) en secciones de carcinomaductal de mama (× 1.000): monosomía decromosoma 17 y amplificaciónde HER2/neu, múltiples señales del locusespecífico(cociente HER2/CEP17 > 10) y señal centroméricaúnica (verde).
    34. 34. Amplificación-sobreexpresion asociado con:• Peor grado histológico • Mayor agresividad biológica • Menor sobrevida total • Menor sobrevida libre de enfermedad • Ausencia de expresión de receptores hormonales • Mayor riesgo de metástasis
    35. 35. DNA Chip-Biochips-Arrays• Affymetrix (1993)• Microseries (microarrays) sobre vidrio y alta densidad de sondas• Macroseries (arrays) sobre filtros de nylon y baja densidad de sondas• Depósito de cadenas de ADN sobre chips (GENECHIPS)• Ultraminiaturización del análisis biológico.
    36. 36. DNA Chip-Biochips-Arrays• Combina técnicas electrónicas con materiales biológicos• Analiza grandes volúmenes de información en tiempos breves• Incorpora la Bioinformática para relacionar los datos• Chips a la carta• Medición de expresión génica-mutaciones- polimorfismos• Monitorea elevados volúmenes de información Genética• Información de actividad temporal
    37. 37. Biol mol medicinainformática ingeniería
    38. 38. Nuevas tecnologías Siglo XXI (?) DNA arrays Siglo XIX 1980s 2000 SNP analysis Multiplex PCR Proteomics RH FISHHistologia Predict de genes aislados Multi-gene predictores (?)
    39. 39. ¿Perfil de expresión génica? Tecnologia de arrays de cDNA Es una plataforma tecnológica madura, para medir la expresión de un gran número de genes simultaneamente. Demostración de que CM es un grupo de enfermedades heterogéneas. Demuestra que la Heterogeneidad clínica y biológica CM se explica por las diferencias en la composición genética
    40. 40. Conclusiones• Debería conocerse el status de HER-2/neu en TODOS los ca. de mama independiente de la edad de la paciente y del grado histológico del tumor.• La indicación del tratamiento con TTZ requiere una SELECCIÓN previa mediante metodologías precisas para estudiar el Gen y su producto.• Se debe pensar en el C.M. como un grupo heterogéneo de enfermedades.• Se debe explorar más acerca de predictores en múltiples genes.
    41. 41. Muchas gracias!!!

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