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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Entomologie moléculaire et étude de lastructuration génétique des populationsd’anophèlesMme AMADOU HadizaMSP/LCE/PNLP/LAVNigerEVALUATIONpar les FACILITATEURS

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007PlanIntroductionMéthodes utilisées dans les études des populations d’AnophèlesLes marqueurs morphologiquesLa cytogénétiqueLa biologie moléculaireStructuration génétiques des populations d’ AnophèlesDéfinitionFacteurs influençant la structure génétique des populationsIntérêt des études de la génétique des populationsd’Anophèles et leur structuration génétiqueConclusion

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007IntroductionAnophèles vecteurs des Plasmodium (environ60 espèces)La plus part des espèces appartiennent à descomplexesMieux connaître la cible: pour mettre en placeune stratégie de lutte contre les vecteurs.

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Marqueurs morphologiquesMorphologieÉtablir la taxonomie des vecteursBiogéographieBionomiqueNB: ne révèle pas les différencesentre espèces jumellesESPECE ??

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Méthodes utilisées :la cytogénétiqueAnalyse de l’alternance des bandes sur les chromosomespolythènes (cellules nourricières de l’ovaire)Identification des espèces jumelles (présence d’inversionschromosomiques)Identification des formes chromosomiques (différentescombinaisons d’inversions paracentriquesdu chromosome2)Ex: pour le complexe Gambiae:An. gambiae s.s, An. arabiensis ,An. melas, An. merus ...An. gambiae s.s (Mopti, Bamako,Savane, Bissau, Forest)

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Figure 4. Diagrammatic representation of thefixed and polymorphic inversionsobserved in the seven species of the Anophelesgambiae complex. From Coluzzi, et al.1979 Trans R Soc Trop Med Hyg 73:483-497. .La cytogénétique

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007La biologie moléculaire: La PCREtude de la phylogénie(ADN mitochondrial)Identification desmembres d’un complexed’espèces (Identification Aet B par PCR-rDNA)kengne et al

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007La connaissance du génomed’ An. gambiaeIdentification de gIdentification de gèènesnesdont certains sontdont certains sontimpliquimpliquéés dans las dans labiologie des moustiques,biologie des moustiques,dans la transmissiondans la transmission desdesPlasmodiumPlasmodium, dans la, dans larréésistance auxsistance auxinsecticidesinsecticidesUtilisation des marqueurs microsatellites pour l’étude (fluxgénétique; Identification M et S par PCR- RFLP)

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Limites de la PCRLaboratoire et équipementPersonnel spécialiséCoût

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Structuration génétiques despopulations d’ AnophèlesDéfinition: Etude de la distribution spatiale des vecteurs (distributionde plusieurs espèces ou des génotypes au sein d’une même espèce)Facteurs influençant la structure génétique des populationsCroisement préférentiel entre génotypes similaires: réduction dunombre des hétérozygotesMigration modifie la fréquence alléliqueTaille de la population influence la fréquence alléliqueMutation apporte de nouveaux allèlesSélection change la fréquence des allèles

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Intérêt: apport à la compréhension de latransmission•Distribution of the species Anopheles gambiae complexin Madagascar. Jean Michel Léong Pock Tsy et al. 2003415122040000246810121416juin juillet aout septembre octobre moisIASAn.gambiae s.s. An. ArabiensisTaux dTaux d’’infectioninfection àà ll’’antigantigèènene sporozosporozoïïtiquetiquedd’’ An. gambiae s.sAn. gambiae s.s et det d’’AnAn arabiensisarabiensis dedejuinjuin àà octobre 2004 au Malioctobre 2004 au Mali

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007IntérêtsEvaluation de la variation génétiqueEstimation de leurs capacités d’adaptation auxpressions de sélectionEstimation des flux géniques( circulation des gènesparmi les populations; ex : gènes de résistance)Adapter les moyens de lutte

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Diagnostic PCR de la mutation Kdr et diffusionde cette mutation au sein du complexe An.gambiaeWeill etWeill et alal, 2000, 2000

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Mutation Kdr au NigerLocalisation géographiquePopulation sensibleAn. gambiae M kdr/kdrAn. gambiae M kdr/kdsAn. gambiae S kdr/kdrNiger/ CERMESLEGENDE ?

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007ConclusionMeilleur compréhension de la transmission etperspectives pour le contrôle des vecteursMesurer l’impact des interventions en matière deLutte Anti VectorielleOrienter les nouvelles approches de Lutte AntiVectorielle

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Références bibliographiquesCAT INIST: Variabilité Génétique et Flux de Gènes chez les MoustiquesAnopheles arabiensis et Anopheles gambiae, Vecteurs du Paludisme en Afrique.Apport des Loci Microsatellites.http://cat.inist.fr/?aModele=afficheN&cpsidt=196505IRD journal Sciences au Sud- dossier d’Avril 2003, Anophèles d’Afriquehttp://www.ird.eu/fr/actualites/journal/dossiers/paludisme.S. Manguin, D. Fontenilles, F. Chandre, L. Lochouarn, J. Mouchet, P.Kengne & P.Guillet: Génétique des populations Anophélienneshttp://www.pathexo.fr/pdf/Articles-bull/1999/1999n4/T92-4-GMI-2.pdfDidier Fontenille, ETUDES GENETIQUES ET MOLECULAIRES DESMOUSTIQUES: des outils pour la lutte http://wcentre.tours.inra.fr/sfpar/j-EntomologieMedicale/Fontenille.pdfOMS (2000) Molecular entomology and prospects for malaria control. Bull.WHO, 78, 1412-1423Pock Tsy, J.B. Duchemin et al (2003) Distribution of Anopheles gambiaecomplex and first evidence of Anopheles merus as a malaria vector inMadagascar. Malar J 2(1):33.

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09/05/2007 Atelier paludisme 2007Références bibliographiquesCharvolin Eléonore, Epinette Sébastien, Erny Cécile, Farcy Solenne, FleuryCarinne, Guichoux Erwan: Les nouveaux outils d’investigation du génome :base d’une meilleure connaissance du Paludisme ?http://dessbiodiversite.free.fr/ancien/travaux/moustique.docJean Mouchet, Pierre Carnevale, Marc Coosemans, Jean Julvez , Sylvie Manguin,Dominique Richard-Lenoble, Jacques Sircoulon, 2004Biodiversité du paludisme dans le monde.Kengne P. et al. (2003) Développement d’une PCR (Polymerase ChainReaction) spécifique d’espèces du complexe Anopheles nili (Theobald) 1904 auCameroun. Bull.SOC.Exot, 96, 3, 165-167, 65-67.IRD cmmuniqué de presse du 14 Avril 2000La caractérisation biologique et génétique des Anopheles en Afrique : un intérêtfondamental pour lutter contre la transmission du paludismehttp://www.ird.eu/fr/actualites/communiques/2000/anopheles.htm