KUNSTMATIGE INSEMINATIE

3,215 views

Published on

Artificial insemination of honeybee queens. Seminar in Kiev 06-07yu04yu2013
Haagdorens Guido

Published in: Technology
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

KUNSTMATIGE INSEMINATIE

  1. 1. KUNSTMATIGE INSEMINATIEHaagdorens Guido
  2. 2. IndelingWaarom KIAan te kopen/Zelf te makenVoorbereidingen/Wat/WanneerHet sperma tappen/BewarenKoninginnen kweken (kort) / Klaarmaken,voorbereidenHet inseminerenNazicht / OpvolgenBeebreedVragen?
  3. 3. Waarom KIVoordelen Nadelen-Kontrole over afstamming -Investeringskost darren -Mikroskoop-Kontrole over paring -Toestel-Kontrole over tijdstip -Ontspanner-Zelfbedruipend bij goede -Koudlichtbron selectie -Randmateriaal-Eénmaal geinstalleerd -Planning volgen kostprijs per KIpraktisch nihil -Rijpe darren -Sperma bewaren
  4. 4. Benodigde materialenMIKROSKOOP-Mikroskoop vergroting tussen 15 en 30-Stereo(binoculair) voor dieptezicht-Afstand tot object appr 150mm-45°inkijk-Oogafstand(interpupillair)moet instelbaar zijn-Betaalbaar type : MBS-10 van LOMO (tussen 70 en 500€) op internet.-Duurdere typen : zoom van bv.Olympus
  5. 5. MBS-10Kostprijs : tussen 70 en 500€Internet:E-bay.de Marktplaats.nl
  6. 6. Mogelijke vergrotingenOculair 6x 8x 14xLenzen x0,5 x1 x2Factor 0,6 / 1 / 2 / 4 / 7Werkafstand afhankelijk van vergroting. Voor ons ongeveer170mmMogelijke vergrotingen met lens van bv 0,56x0,5x0,6=1,8 8x0,5x0,6=2,4 14x0,5x0,6=4,26x0,5x1=3 8x0,5x1=4 14x0,5x1=76x0,5x2=6 8x0,5x2=8 14x0,5x2=146x0,5x4=12 8x0,5x4=16 14x0,5x4=286x0,5x7=21 8x0,5x7=28 14x0,5x7=49
  7. 7. Olympus Zoom 10-45Kostprijs internet E-bayTussen 150 en ??? €
  8. 8. Mogelijke vergrotingOculair van 10x , 15x , 20xLenzen 0,62x , 1x , 1,5x , 2xZoomfactor van 0,9 tot 4Vergroting met bv oculair 20x en lens 0,62Alles tussen 11,2 en 49,610x alles tussen 5,6 en 24,815x alles tussen 8,4 en 37,2
  9. 9. Pauly• Goedkoper model , stereozoom 10 tot 40• Prijs 240€ plus verzending.
  10. 10. Technische Daten:Stereo-Zoom-Mikroskop mit Auf-und Durchlicht.Okulare: 10x Weitfeldokulare mitregulierbarem Augenabstand 55-75mm,Sehfelddurchmesser 22 - 5,5 mmObjektive: Zoom Objektiv 1 - 4x fürstufenlose Vergrösserung 10-40xbei 91 mm ArbeitsabstandBeleuchtung: 12 V 10 W Auf- undDurchlicht (Halogen)Maße: 41 x 35 x 41,50 cm 1A Pauly Alsterdorfer Str. 276- 27822297 Hamburg Tel: 1A Pauly Alsterdorfer Str. 276- 27822297 Hamburg Tel: 040/51431777 Email: info@1apauly.eu
  11. 11.  Niet kopen : goedkopere verticale types, moeilijke houding om mee te werken. Mono types : met één oog heeft u geen dieptezicht.
  12. 12. Inseminatietoestel• -Tweedehands : praktisch onvindbaar• -Merktoestellen :prijzig , tussen 2000 en ????• -Alternatief : zelfbouwers 500 a 700€
  13. 13. SwientyPrijs 2150€
  14. 14. SchleyKostprijs 3285 US
  15. 15. Kleinmateriaal• -CO2 gasfles• -Ontspanner• -Waterslot• -Siliconendarm• -Houders spuiten• -Capillairen• -Proefbuizen• -RVS pincetten• -Reservespuiten (Insuline)• -Bewaarkast voor proefbuizen• -Darrenvliegbak• -Glazen recipienten voor DW/Alc/Spermaverdunner• -Etc
  16. 16. CO2 gasfles (biergas)Huren:éénmalige waarborg.Per vulling(ruilfles) 25€Minstens 5 jaar te gebruikenOntspanner: van 15 tot 250€
  17. 17. WaterslotZelf maken , proefbuis + rubberstop
  18. 18. Debietmeter Niet noodzakelijk , wel handig. In te stellen tussen ongeveer 40 a 60 liter/h
  19. 19. SiliconendarmTe vinden in groothandel.Afmetingen:1.5 binnen doormeter ,3 mm buitendiameterBenodigd voor afdichting capillairen
  20. 20. Houders spuitenSamengesteld uit insulinespuit(apotheker) en omhulsel.
  21. 21. Inseminatiespuit
  22. 22. Reinigingsspuit
  23. 23. Glazen recipienten
  24. 24. Capillair Zelf maken uit glazen buisjes van 1,5mm doormeter.Te verkrijgen in handel (Belgo Chemica) Doormeter punt 0,25mm Lengte naar believen. Bij goede keuze kunnen er twee uit één buisje gemaakt worden.
  25. 25. Adres Kiev• Unilab LTD• Novokostantinovskaya 22/15• 04080 Kiev• Tel +38444304845• Unilab@i.com.ua• www.unilab.kiev.ua• Artikel nr : 920 15 15
  26. 26. Afgesneden capillair 0,25mm
  27. 27. Afwerken capillair
  28. 28. Stadia capillair
  29. 29. Geschuurd capillair korrel 1000 slispapier
  30. 30. Meten capillair
  31. 31. Bepaling volumeBuiten diameter 1,55mmBinnen diameter 1,10mmNuttige oppervlakte 1,1x1,1mmx3,1415/4=0,9503mm²Volume per mm=0,9503mm³Benodigen minstens 8mm³ sperma , dus 8/0,9503 = 8,5mmCapilair insemineren.Advies , 10mm siliconenmaat gebruiken.
  32. 32. Sperma bewaarkast Zelf maken
  33. 33. Wijnkoeler 12 tot 18°C
  34. 34. KoudlichtbronKeuze uit drie types:met vaste armen , met ringlicht en het nieuwe model met LED.Kostprijs varieert van 50€ tot 500€.(Internet)Alternatief:zelf maken.
  35. 35. Model met ringlicht
  36. 36. LED uitvoeringOp internet E-bay 45 a 100€
  37. 37. Darrenvliegkooi met verlichting Zelf maken met plexi Plakken met chloroform Verlichting:gezichtsbruiner 2 voor 10€
  38. 38. Sterillisatiebak voor materiaalGebruiken van microgolf sterilisatiebakje voor tutterfles..
  39. 39. Autoclaaf=professioneel=duurder
  40. 40. 100%steriel op 2,3bar 134°C na 3minuten
  41. 41. BevruchtingskastjesGestandaardiseerd werken. Kooitjes van krulspelden blauw. Stoppen maken van Nico systeem.
  42. 42. Kooitjes
  43. 43. DarrenvliegbakZelf maken
  44. 44. Darrenschuif Zelf maken
  45. 45. Darrenzeef Zelf maken
  46. 46. SpermaverdunnerAndrostar plus. Te verkrijgen bij www.cayers.com
  47. 47. Verdunner klaarmakenVroeger werd verdunner klaargemaakt in 1 liter en in 20 porties ingevroren. Na kontakt met de fabrikant raad die aan de verpakking in 20 aparte dosissen te verdelen en ze pas op te lossen in DW op het moment van gebruik.Is omslachtiger maar zou betere resultaten geven.Tweede mogelijkheid : verdunner klaarmaken volgens volgende formule:2.43% trisodium Citrate-2-hydrate• 0.21% NaHCO3• 0.3% D(+)glucose monnohydrate• 0.3% sulfacetamid sodium• KCI in distilled water (ph 7.5-8.4)• 0.1 penicillin sodium
  48. 48. • Probleem is hier het gebruik van peniciline. Men kan een voorschrift bij een dierenarts halen en het laten maken bij de apotheek. Indien u nauwkeurige weegschalen gebruikt kan het gemakkelijk zelf gemaakt worden vooropgesteld dat men aan peniciline geraakt. Resultaat is goed , het produkt kan enkele weken bewaard worden in de koelkast.
  49. 49. Zuivere EthanolApotheek etc.Tip : in Italie 11€ de liter.
  50. 50. SchijnwerperEender welke draagbare straffe lamp.
  51. 51. Narcose flesZelf maken van honingbokaal of grotere pot.
  52. 52. Spuiten 50mL voor spermaverdunner Vullen met verdunner.+-Twee weken houdbaar.
  53. 53. Penseel
  54. 54. BroedstoofZelf maken van oude frigo.twee lampen van 40Watt in serieEn één IR lamp van 150W. Twee thermostaten voor safety.
  55. 55. Professioneler model=duurder.Zelfbouw=120€
  56. 56. Temperatuurregelaar E-bay 35€
  57. 57. Werkruimte
  58. 58. Darrenkweek Tussen ei en rijpe dar ongeveer 40 dagen. Begin april bij goed weer in geselecteerde kast twee ramen met een wasstrip hangen aan buitenzijde van het broednest. Kast prikkelen met voeding twee water op een suiker/honing. Na uitbouwen van darrenraat en beleggen,voor uitlopen van darren ramen boven rooster hangen met Open broed erbij. Een week na uitlopen vd darren de darrenschuif en vliegbak plaatsen. Altijd ‘s morgens of ‘s avonds. Open bijenbroed bijhangen. Namiddag enkele keren vliegbak openen.Eénmaal rijp kan tappen beginnen.
  59. 59. Eén van de ….
  60. 60. Tips darrenkweek• Dar is in principe rijp veertig dagen na het leggen van het ei.• Beste resultaten om darren rijp te krijgen is zoals gezegd open broed bijhangen in combinatie met volgende punten:• Darren kweken op een oude moer geeft betere resultaten dan jongere moeren.• Ook een moerloos volk waarin koninginnen gekweekt worden gaat prima.
  61. 61. Klaarmaken verdunner Eén liter GEDEMINERALISEERD water aan de kook brengen in RVS pot. Laten afkoelen tot 30°C. Verpakking Androstar oplossen met RVS lepel. Kan enkele weken gebruikt worden op kamertemperatuur. Beter is portie van bv 1/20 of 1/10 oplossen voor gebruik.
  62. 62. Darrenvliegbak
  63. 63. Sperma aftappen Beste tijdstip is namiddag vanaf 14h00. Vier uur op voorhand worden twee spuiten verdunner klaargemaakt. Spermaspuiten,proefbuis en glas steriliseren. Voor aanvang tappen spermaspuit klaarmaken. Eén potje vullen met verdunner, één met alcohol en één met DW. Eén proefbuis vullen en merken. Darrenvliegbak aanzetten om temperatuur te halen (25°C minimum) Darren ophalen met darrenzeef en sterke lamp. Niet meer dan u kan verwerken op 20 minuten. Darren lossen in vliegbak. Proper blad op bodem.
  64. 64.  Stelselmatig darren uitnemen , uitstulpen en sperma opzuigen. Opletten voor mukus. Spuiten verstoppen na uitharden. Bij gevuld capillair zorgen dat sperma tussen twee kleine luchtbellen zit. Capillair verwijderen , eventueel afsluiten met glazen stoppen. Bewaren in proefbuis gevuld met verdunner Ofwel op spuit in koelkast op 12 a 16°C DONKER BEWAREN.
  65. 65. Sperma bewaren• -Beste resultaat is onmiddellijk gebruiken.• -Kan best bewaard worden op een temperatuur tussen 15 en 20°C in het donker en zonder schommelingen.• -Info Bienefeld : 14dagen.• -Op het internet varieren de tijden tot 8 (35! weken dr Moritz)doch met kwaliteitsverlies. Men raad aan : afsluiten met vaseline prop zonder luchtbel.
  66. 66. Sperma bewarenNa aftappen zorgen dat er een luchtbel aan beide zijden zit afgesloten met een druppel verdunner. Eventueel te verzegelen met een glazen stopje.Daarna in proefbuis voorzien van spermaverdunner plaatsen en bewaren op kamertemperatuur, is enkele dagen te gebruiken.Beter bewaren in een konstante temperatuur tussen 12en 16°C in het donker.Wijnkoeler met Peltier element leent zich hier uitstekend voor. Is instelbaar tussen bv 12 en 18°C.Cappilair blijft op spuit. Geen risico op kontaminatie.
  67. 67. Vers sperma
  68. 68. Sperma 1 week oud op 25°C
  69. 69. Koninginnen kweken• Er bestaan verschillende methoden.Iedereen kiest een methode die hem ligt.• Zelf kweek ik op moerloze volken.• K 10 dagen boven rooster op lege ramen.• Na 10 dagen moer eraf.Belegde ramen verdelen over andere kasten.• Kast is hopeloos moerloos.Dan geselecteerde larven inhangen.• De 14e dag in broedstoof hangen. Een dop in kast laten hangen naast een open broed raam.• Na geboorte van K kunnen EWK gevuld worden.
  70. 70. • Voederdeeg is mengsel van bloemsuiker gemengd met honing.10 kg suiker op 1Kg honing.Volgens keuze 15 eieren toevoegen.Deeg blijft soepeler.• Kast zeven en bij voldoende bijen deze verdoven met lachgas.• Per EWK één pollepel bijen.• Kastje kan na één dag buiten gezet worden met vliegat op koninginnerooster.• Na minstens zes dagen is koningin klaar. Beter is tot 9 a 10 dagen wachten.
  71. 71. Koninginnen prepareren. Men zorgt dat men koninginnen heeft van 9 a 10 dagen oud. Daags voor het insemineren de koningin opsluiten in haarspeld en een 5 a 20 tal minuten laten slapen. Na het ontwaken terug in ZELFDE kastje plaatsen. Ouder sperma controleren op kwaliteit onder microscoop 750x vergroten. Voor het insemineren de koningin laten vliegen tegen een raam om zich te laten ontlasten. Daarna koningin in dwangbuisje laten lopen, in toestel bevestigen, gas toevoeren, haakjes manoevreren, spuit inbrengen en ongeveer 8 a 10 µl inspuiten
  72. 72.  Daarna koningin merken , knippen en laten ontwaken. Terugplaatsen in bevruchtingskastje met suikerstop. Kontrole na één dag.Moet bevrijdt zijn en rondlopen. Na 6a10 dagen aan de leg. Na aanvang leg 10 dagen wachten , kontroleren op gesloten broed. Indien OK , koningin invoeren op gekende manieren.
  73. 73. Koningin klaarmaken
  74. 74. Inseminatie1
  75. 75. Inseminatie2
  76. 76. Na insemineren Na insemineren gas afsluiten , koningin knippen, merken en terug in kooitje plaatsen met suikerstop.Eventueel in broedstoof laten wakker worden (30°C) Koningin loopt rond na vijf minuten. Men kan eventueel één of twee bijen bijdoen en kooitje terughangen in ZELFDE EWK. Bijen zullen dadelijk interesse vertonen en suikerstop uiteten. Binnen enkele uren is de koningin bevrijdt en loopt rond. Is de koningin gekwetst geweest dan zal ze binnen één a twee dagen sterven. Nieuwe invoeren en herbeginnen. Verloopt alles normaal zal ze na 5 a 7 dagen aan de leg gaan. Eénmaal gesloten broed kan ze verenigd worden.
  77. 77. Kweektip Na vaststellen van gesloten broed kan moer geplaatst worden. Bij wegname koningin onmiddellijk een rijpe dop plaatsen. Deze wordt ALTIJD aanvaard. Dop laten uitlopen , na 10 dagen terug insemineren etc. Koningin die na 3 weken niet aan de leg is verwijderen en vervangen. Sperma is op de juiste wijze bewaard nog bruikbaar na 10 a 12 weken.
  78. 78. Gebruikte spuitenKunnen eventueel gereinigd en ontsmet worden. Doorspoelen met javel. Daarna grondig spoelen en steriliseren. Is intensieve bezigheid met mogelijke contaminatie van de spuiten.Daarom advies , gebruik nieuwe.
  79. 79. Gebruikte EWK• Bijen in slaap doen met lachgas. Na een 5tal minuten in kast afvegen.• Broed uitsnijden en boven een rooster in een darrenschuif plaatsen. Reden:koningin mag er niet in leggen. Na het uitlopen van alle broed was verwijderen . Kastjes proper maken en bewaren voor volgend jaar.
  80. 80. Gebruikte EWK
  81. 81. Queen banking 16 koninginnen per raam tussen open broed in moerloze kast bewaren en insemineren. Na 5 dagen invoeren op 3 ramer ,indien goed geinsemineerd gaan 7e dag aan de leg.
  82. 82. Blup• Best linear unbiased prediction.• Vrij vertaald : Beste lineaire onbevooroordeelde voorspelling.
  83. 83. Voorbeeld van inteeltmoer(hagelschot) en eennakomeling standbevrucht.
  84. 84. • Vragen?????????

×