PENGANTAR SPEKTROFOTOMETRI

1. INSTRUMEN KIMIA
FARMASI
INSTRUMEN IDENTIFIKASI PADA FARMAKOPE
INDONESIA EDISI IV

2. PENGANTAR
• Keterbatasan identifikasi non instrumen
• Kebutuhan akan identifikasi obat sebagai
persyaratan farmakope

3. KROMATOGRAFI
(chromatography)
• Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran
didasarkan atas perbedaan distribusi dari
komponen-komponen campuran tersebut diantara
dua fase, yaitu fase diam (padat atau cair) dan fase
gerak (cair atau gas).
• Bila fase diam berupa zat padat yangaktif, maka
dikenal istilah kromatografi penyerapan (adsorption
chromatography). Bila fase diam berupa zat cair,
maka teknik ini disebut kromatografi pembagian
(partition chromatography).

4. KROMATOGRAFI
(chromatography)
• Adsorben / penjerap= fase padat yang bertindak
sebagai fase diam dalam KCP atau KGP
• Penyangga= tempat melekatnya fase diam dalam
KCC atau KGC
• Pengembangan= fase gerak digerakkan melalui fase
diam untuk menghasilkan pemisahan
• Elusi= senyawa yang dipisahkan keluar dari sistem
• Visualisasi= penampakan senyawa yang dipisahkan
dengan pengembangan

5. KROMATOGRAFI
(chromatography)
• KGC/GLC = Gas Liquid Chromatography
• KGP/GSC = Gas Solid Chromatography
• KCC/LLC = Liquid Liquid Chromatography
• KCP/LSC = Liquid Solid Chromatography
• CC=Column Chromatography/Kromatografi Kolom
• PC = Paper Chromatography/Kromatografi Kertas
• KLT/TLC = Kromatografi Lapis Tipis/Thin Layer
Chromatography
• KCKT/HPLC = Kromatografi Cair Kinerja Tinggi/High
Performance Liguid Chromatography

6. KROMATOGRAFI
(chromatography)
• CC=Column Chromatography/Kromatografi Kolom

7. KROMATOGRAFI
(chromatography)
• KLT/TLC = Kromatografi Lapis Tipis/Thin Layer
Chromatography
Visible light UV 254 nm UV 366 nm
Si gel GF254 Pengembang: toluene – ethylacetate (9:1)

8. KROMATOGRAFI
(chromatography)
• PC = Paper Chromatography/Kromatografi Kertas
http://images.search.yahoo.com/images/view

9. PENGANTAR
SPEKTROFOTOMETRI

10. SPEKTROSKOPI
(Spectroscopy)
• Spektroskopi molekuler adalah ilmu yang mempelajari
interaksi antara gelombang elektromagnetik dengan
materi
• Metode spektroskopi digunakan untuk menentukan,
mengkonfirmasi struktur molekul, dan untuk
mengetahui kemurnian suatu senyawa

11. Prinsip Spektrometri
• Larutan sampel dikenai radiasi elektromagnetik,
sehingga menyerap energi / radiasi  terjadi
interaksi antara radiasi elektromagnetik dengan
materi (atom/molekul)
• Jumlah intensitas radiasi yang diserap oleh larutan
sampel dikonversi dengan konsentrasi analit 
data kuantitatif

12. • Spektrofotometer  spektrometer + fotometer
• Spektrometer  menghasilkan sinar dari spektrum
dengan panjang gelombang tertentu
• Fotometer  alat pengukur intensitas cahaya yang
ditransmisikan atau diabsorpsikan
• Spektrofotometer  untuk mengukur energi secara
relatif jika energi tersebut ditransmisikan,
direfleksikan atau diemisikan.

13. Spektrometri
Berdasarkan jenis materi yang berinteraksi dengan
radiasi elektromagnetik, dibagi :
Spektrometri molekul  radiasi elektromagnetik
berinteraksi dengan molekul
Contoh : NMR, IR, UV-Vis, XRD
Spektrometri atom  radiasi elektromagnetik
berinteraksi dengan atom
Contoh : AAS, AFS

14. SPEKTROSKOPI
(Spectroscopy)
• Spektroskopi Ultraviolet (UV) ---- Keadaan energi
elktronik
• Digunakan untuk ---- molekul konjugasi, gugus karbonil,
gugus nitro
• Spektroskopi Infrared (IR) ---- keadaan energi vibrasi
• Digunakan untuk ---- gugus fungsional, struktur ikatan

15. SPEKTROSKOPI
(Spectroscopy)
• Spektroskopi NMR ---- keadaan spin inti
• Digunakan untuk ---- bilangan, tipe dan posisi relatif dari
proton (inti hidrogen dan inti karbon 13)
• Spektroskopi Massa ---- Penembakan elektron
berenergi tinggi
• Digunakan untuk ---- berat molekul, keberadaan nitrogen,
halogen

16. REM sebagai energi yang merambat dalam bentuk gelombang.

17. Tipe Radiasi Frekuensi (Hz)
Panjang
Gelombang
gamma-rays 1020-1024 <1 pm
X-rays 1017-1020 1 nm-1 pm
ultraviolet 1015-1017 400 nm-1 nm
visible 4-7.5x1014 750 nm-400 nm
near-infrared 1x1014-4x1014 2.5 µm-750 nm
infrared 1013-1014 25 µm-2.5 µm
microwaves 3x1011-1013 1 mm-25 µm
radio waves <3x1011 >1 mm
Spektrum Elektromagnetik

18. warna yang teramati Warna yang diserap Panjang gelombang
Green Red 700 nm
Blue-green Orange-red 600 nm
Violet Yellow 550 nm
Red-violet Yellow-green 530 nm
Red Green 500 nm
Orange Blue 450 nm
Yellow Violet 400 nm

19. Spektrofotometer
 Sumber cahaya (Lampu) : memancarkan semua warna
cahaya (yaitu, cahaya putih).
 Monokromator : memilih satu panjang gelombang dan
panjang gelombang yang dikirimkan melalui sampel.
 Detektor : mendeteksi panjang gelombang cahaya
yang telah melewati sampel.
 Amplifier : meningkatkan sinyal sehingga lebih mudah
untuk baca terhadap kebisingan latar belakang.

20. SPEKTROSKOPI
(Spectroscopy)
• Spektroskopi UV-VIS
• Berkaitan dengan proses berenergi tinggi yakni transisi
elektron dalam molekul, maka informasi yang didapat
cenderung untuk molekul keseluruhan bukan bagian-
bagian molekulnya
• Sangat cocok untuk tujuan analisis karena metoda ini
sangat sensitif
• Sangat kuantitatif dan jumlah sinar yang diserap oleh
sampel diberikan oleh ungkapan hukum Lambert-Beer.
• Menurut hukum Beer, absorbans larutan sampel
sebanding dengan panjang lintasan cahaya d dan
konsentrasi larutannya c

21. SPEKTROSKOPI
(Spectroscopy)
• Spektroskopi UV-VIS
 Dimana,
A= serapan
Io = Intensitas sinar yang datang
I = Intensitas sinar yang diteruskan
ε = absorptivitas molar
ι = panjang atau tebal larutan
c = konsentrasi larutan

22. SPEKTROSKOPI
(Spectroscopy)
• Spektroskopi UV-VIS

23. SPEKTROSKOPI
(Spectroscopy)
• Spektroskopi UV-VIS
• Spektrofotogram, serapan maksimum merupakan ciri khas
dari suatu zat

24. SPEKTROSKOPI
(Spectroscopy)
• Spektroskopi UV-VIS
• Sumber Radiasi
• Lampu wolfram
• Kuvet (Sample Container)
• Kuarsa atau silika
• Monokromator
• Prisma kaca atau kuarsa
• Detektor
• Fotolistrik
• Pencatat

25. Komponen : lampu
Lampu
 Spektrofotometer UV
1. Lampu Gas hidrogen
2. Lampu Merkuri
 Spektrofotometer Visible
Lampu Tungsen

26. Komponen : monokromator
• Cahaya
• Semua cahaya
• Cahaya polikromatik

27. Komponen : monokromator
• Monokromator  memilih cahaya monokromatik
• Cahaya satu warna
Cahaya merah
yang diserap
oleh larutan
hijau

28. Komponen : sample cells
Sample cells (kuvet)
 Spektrofotometer UV
Quartz (crystalline silica)
 Spektrofotometer Visible
Glass

29. Struktur kimia dan absorpsi UV
Larutan yang dapat dianalisis dengan
spektrofotometer UV  senyawa yang mempunyai
gugus kromofor
Gugus kromofor : gugus molekul yang mengandung
sistem elektronik yang dapat menyerap energi pada
daerah UV

30. Struktur Kromofor
Group Structure nm
Karbonil > C = O 280
Azo -N = N- 262
Nitro -N=O 270
Thioketon -C =S 330
Nitrit -NO2 230
Diena terkonjugasi -C=C-C=C- 233
Triena terkonjugasi -C=C-C=C-C=C- 268
Tetraena terkonjugasi -C=C-C=C-C=C-C=C- 315
Benzena 261